j*****a
发帖数: 658 | 1 I need do IP and 1st antibody is polyclonal. Can somebody recommendate a
company with good proteinA-coupled sepharose beads? I will order soon.. GE
health has protein A sepharose CL-4B seems veryyyyy expensive, they only
have 25ml size which is ~$1395. Can someone recommendate another one with
good quality and not so expensive? Thank you guys very much. |
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f*****s
发帖数: 104 | 2 最近用GE healthcare的glutathione sepharose 4B resin purify a couple of GST-
tagged transcription factor DNA binding domains. The protein were bound to
the beads with high efficiency. However, when I used glutathione buffer to
elute the GST-protein off the beads, they can't be eluted. I tried 10 mM ,50
mM and 100 mM glutathione. To make the buffer, I diluted 1 M Tris (pH 7.5
at room temperature) to 50 mM, and added glutathione powder. There was also
2 mM DTT in the buffer. The elution was carried out... 阅读全帖 |
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a******2
发帖数: 42 | 3 有一个蛋白，想用protein A sepharose+antibody抓住血液（虫）中该蛋白与其他蛋白
的complex。做了几次，该蛋白结合的很好，但是complex结合到beads上太少（总的
binding capacity应该不是问题）。complex量相对来说本身就比较少，但是还bind不
牢，大部分都被洗脱了。
本想打算先过跟别的柱子，把单体和complex先分开，但是因为过了柱子可能会改变
complex的组成，老板不推荐这么做。
不知道版上各位是否有做过这类实验，求分享经验！谢谢！ |
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s******s
发帖数: 795 | 4 想研究protein A与B/C/D等的相互作用。
因为没法（或者很难）把蛋白A偶联到sepharose beads上，但是有commercially
available biotinylated protein A可以直接买（sepharose conjugated with
streptavidin当然也有卖），所以计划通过streptavidin+biotin搭桥，间接把protein
A
结合到sepharose beads上（sepharose-streptavidin + biotin-protein A），然后装
填柱子，然后apply protein B/C/D。
从来没做过avidin+biotin相关的实验，请问有朋友做过类似的么？streptavidin+
biotin的结合够强壮么？
假设 protein C可以与protein A结合，最后形成sepharose-streptavidin + biotin-
protein A + protein C。在wash和elute的时候，有特定的或者通用的条件可以
1。wash掉非特异结合的其他protein
2。特... 阅读全帖 |
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y*********u
发帖数: 14561 | 5 ☆─────────────────────────────────────☆
andie2008 (andie) 于 (Sat Jul 9 13:35:34 2011, 美东) 提到:
前情提要:
我家的猫喜欢睡crib和playyard 就是婴儿床 我婆婆要过来带小孩 所以强烈要求把猫
送走, 在我反对之下 建议把猫咪declaw 因为她小时候被猫抓 我个人表示无奈 我老公
表示中立
首先要感谢大家对trillion的关心 抨击虽然多 不过都是为了trillion好 所以第一次
看见骂人的贴哭笑不得 不知道是说谢谢还是骂回去 大家不要站着说话不腰疼 家庭和
睦还是第一位的 这个版上众多id毕竟没有宝宝只有宠物 我们只有养宠物的经验 没有
同时养宝宝和猫的经验 分析看问题容易偏激 所以我专门问问家里同时有猫有婴儿的家
庭怎么处理
所以大家不要悲愤了 declaw的可能性基本很小 再一个 领养我的猫这件事情也是基本
是不可能的 当居委会大妈有瘾啊 第三 再看见骂人的贴我就骂回去了
大家要给就给点建设性意见 嗯 就这样
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n***w
发帖数: 2405 | 7 前面已经发帖问了，有个前辈说there may be hydrophobic interaction between the
protein and the sepharose
beads so it's why it remained bound even after cleavage.
虽然说换载体换tag是个方法，我想知道市面上有没有除了sepharose的其他GST
binding matrix以减少hydrophobic
interaction.
我看了novagen和pierce的，他们的resin也和GE的sepharose差不多。。。
请问大家知道市面上还有别的不？
谢谢。 |
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s******o
发帖数: 2233 | 8 ☆─────────────────────────────────────☆
sepharose (琼脂糖) 于 (Tue Mar 30 23:59:16 2010, 美东) 提到:
店里装璜风格跟Miramar那家差不多，waitress很客气。菜单好像跟Miramar那家差不多
，早饭也有油条豆浆之类。
waitress说跟Miramar那家比，这家多一些上海菜和台湾菜。
为了鉴定一下这里的“上海菜”正宗与否，我们点了腌笃鲜。说是要时间长一点，不过
也没有等太久就上来了，原料很正宗，味道超级好。要说有什么缺点的话，就是稍微有点咸。不过腌笃鲜的原料本来就有咸
肉和火腿，可
能是因为材料放太多了，所以有点嫌咸。
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lisaSD (深深庭院,寂寂流年) 于 (Wed Mar 31 00:02:24 2010, 美东) 提到:
赞。。。看来不是“冒牌”chins？
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sepharose (琼脂糖) 于 (W |
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A****e
发帖数: 3180 | 10 ☆─────────────────────────────────────☆
maskedface (面具脸) 于 (Sat Jul 9 14:42:14 2011, 美东) 提到:
捐款退钱的，新仇旧恨的，求同存异的，和谐统一的。总之各种各样的。
在这个烽火连天的周末，发个处女帖，求插牌，求合影。
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sepharose (琼脂糖) 于 (Sat Jul 9 14:44:33 2011, 美东) 提到:
插花，存照
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tomochan (yo) 于 (Sat Jul 9 14:46:50 2011, 美东) 提到:
是啊 头都晕了 到底哪跟哪儿啊，笨妈、柴鱼和辣妈啊，大道一个人好可怜
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Zoei (猫狗一家) 于 (Sat Jul 9 14:48:45 2011, 美东) 提到:
嗯 我求人科普过了
大道是... 阅读全帖 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 11 因为手上的蛋白有high pI (>10)
准备用离子交换柱作为第一步粗提
就是直接lysate 9kg离心后上柱子
看了看GE的网站
CM sepharose fast flow resin,weak cation
SP sepharose fast flow resin,strong cation
好像都可以用
不过看起来都是要和FPLC一起用的
想问问看有没有人知道如果用普通gravity column行不行?
pack的时候有没有要注意的?
哦,还有个问题是我应该选CM还是SP? |
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l**********1
发帖数: 5204 | 12 //products.invitrogen.com/ivgn/product/G2879
is half price of GE Life Glutathione Sepharose™ High Performance
Description
Glutathione agarose prepared by linking the sulfur atom of glutathione to crosslinked beaded agarose can
be used for purification of GST fusion proteins. Each milliliter of gel can bind approximately 5-6 mg of
boivine-liver GST.
-------
GE Life Glutathione Sepharose™ High Performance
Binding capacity* » 10 mg recombinant GST/ml medium
* Binding capacity wil... 阅读全帖 |
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H****s
发帖数: 301 | 13 我来抛砖引玉吧：
（1）streptavidin+biotin的结合够强壮么？
够！非常够。
（2）在wash和elute的时候，有特定的或者通用的条件可以用吗？
这取决于A和C的结合强度，所以，怎么洗，怎么洗脱需要摸条件。
（3）请问有商用的sepharose-streptavidin推荐么（或者其他avidin variants
conjugated to agarose or sepharose beads）？
你可以试试Miltenyi的streptavidin microbeads或者其它品牌的，非常多。这个技术
比较成熟，基本的protocol可以在文献中很容易找到。
最后，需要考虑的是：你怎么保证商用的biotinylated protein A仍然具有protein A
的生物学活性？或者说biotinylation不会影响到A/B/C/D的结合？
protein |
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l**********i
发帖数: 60 | 15 谢谢sepharose，
也就是说加急 5个工作日就搞定
看来1000usd，真的能让老美干得很快活 |
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R***o
发帖数: 3964 | 16 Congratulation Sepharose !
May I ask you one question?
For example, my company submit my case October 15, 2010, and my case is
approved December 3rd, 2010. Can I start working December 3rd, 2010?
PS. (I am a full time student now, previous intern boss asked me to join
their firm ASAP)
Thanks |
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g*******a
发帖数: 31586 | 17 【 以下文字转载自 pets 讨论区 】
发信人: sepharose (琼脂糖), 信区: pets
标 题: 来发一发在国内见到的动物们~
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 00:42:04 2010, 美东)
在国内待了一个来月，去了一些地方，尽量把遇见的动物都拍下来了，跟大家一起分享
吧~ |
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g*******a
发帖数: 31586 | 18 【 以下文字转载自 pets 讨论区 】
发信人: sepharose (琼脂糖), 信区: pets
标 题: Re: 来发一发在国内见到的动物们~
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 00:45:07 2010, 美东) |
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g*******a
发帖数: 31586 | 19 【 以下文字转载自 pets 讨论区 】
发信人: sepharose (琼脂糖), 信区: pets
标 题: Re: 来发一发在国内见到的动物们~
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 00:48:43 2010, 美东) |
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c********e
发帖数: 6158 | 20 【 以下文字转载自 pets 讨论区 】
发信人: sepharose (琼脂糖), 信区: pets
标 题: 同事7周大的basset hound
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 21 22:42:48 2011, 美东)
请问这位童鞋，您还能再cute一点吗？？？ |
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s******o
发帖数: 2233 | 21 ☆─────────────────────────────────────☆
sepharose (家有petrol head) 于 (Thu Jun 11 01:57:40 2009, 美东) 提到:
费了好大力气，终于把家什从东部运到San Diego了。记得有一篇帖子里，有人提到过
，在San Diego某个大桥下面，有很多老墨，可以雇来帮忙干活的。有人知道具体是哪
儿吗？要是找他们帮忙搬家的话，行情如何？一小时大概给多少钱呢？
东西实在太多了，还要上下楼梯，不找人帮忙恐怕就是不可能任务了。多谢哈！
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daylight (家有猪朋狗友。) 于 (Thu Jun 11 10:30:01 2009, 美东) 提到:
听说好像在56/black mountain。我知道的是在Camino Ruiz两个7-11便利店那边有很多
。要早上去，下午人就散了。Camino Ruiz/Capricorn 和Camino Ruiz/Gold Coast (?).
忘了说：大概都是10块一小时，也有按 |
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s********g
发帖数: 695 | 22 ☆─────────────────────────────────────☆
elva (elva) 于 (Sat Nov 21 00:16:21 2009, 美东) 提到:
大家一起carpool吧。
谢谢！
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sepharose (琼脂糖) 于 (Sat Nov 21 00:47:11 2009, 美东) 提到:
什么时候？正想着吃串烤呢～
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Rajesh (Singh) 于 (Sat Nov 21 01:25:08 2009, 美东) 提到:
啊?每天都有吗?
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yudeli (babe) 于 (Sat Nov 21 01:29:08 2009, 美东) 提到:
hehe
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elva (elva) 于 (Sat Nov 2 |
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d*********y
发帖数: 62 | 23 Hello!大家好！！
非常不好意思，让MM们久等了，在大家都给我发了邮件之后，我已经将班级的schedule
初步定下来，具体的明细，会在后天之前分别发邮件告诉大家，然而在此之前，根据我的统计
，还是有MM说要报名,*但是没有发给我邮箱*，为了尊重每一位曾经热情报名的MM，*我在这里
将您的ID列在下面*，请您尽快回复我您的邮箱地址，当然如果您决定不参加了，那也就不用
再回复我，另外如有其他问题，欢迎给我发站内信，谢谢！
注明：以下ID是说报名但没有发给我邮箱的MM：
eelshcn (我爱)
arong00
fan6682
coldspring08
xxgg2020
wobniarfly
caosanping
sepharose
jilizhu
另外，还有MM专门报名girl night!谢谢你们的支持，不过现在有个问题是，由于我对
San Diego的不熟悉，再加上真的没有想到大家那么热情想要积极参与，所以至今我还无法
找到一个可以容纳20个人以上的地方，其实girl night并不是想要宣传什么，只是希望大家可
以一起找个地方坐下来聊一聊，喝点东西，相互认识一下而已~~所以在这... 阅读全帖 |
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s*********5
发帖数: 5637 | 24 今天上午写了35封圣诞卡又去Sepharose MM处拿了伯父帮我写的《爱的真谛》，觉得伯父写得比我在网上看的还棒。另外，伯父还帮我写了我的两个儿子的名字在字上面。我拿了字后就觉得心中更充满爱意了，不去犒劳一下两个小家伙实在不好意思。去哪儿呢，想来想去就想到了Yaya介绍的新张的梁妈妈家。上次去99对面吃了那家新的台湾眷村店，觉得东西又贵又没什么特色，还没有它的前身168好。不过那个Yaya提到的葱拌面还是满有吸引力的。
我们点了一客53号可乐烧猪脚便当。里面除了卤得香浓可口的猪脚，花生外，还有一块豆腐，一个卤蛋，麻油拌台湾高丽菜，和一点酸菜，白饭上点缀着一些肉燥。一看就十分可口。两个儿子也非常喜欢，平时挑食的老大还主动要求吃了大部分的猪脚。我一边吃，一边想着自己真该去99买点猪脚花生回去也去学着炖。。。
餐馆中午搞活动，点个菜或卷饼，再加2.5刀就可以加一小碗红烧牛肉面/拉皮。我加了一碗牛肉拉皮。虽然里面只有一块牛肉，但是汤非常香，拉皮也特别劲道。老二很喜欢吃这个面。
10刀就吃得我们很饱了。一下子搞定了两个儿子，我很满意，这么好的地方，下次还要带LD来吃。
唯一不足是那个停车场太小... 阅读全帖 |
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s*******e
发帖数: 806 | 25 现在报名可以吗？我很久以前好像也请求加过的，那时候也没人理我:(。
sepharose, San Diego, CA, 1 dog, dog sitter |
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n***h
发帖数: 429 | 26 宠友分布图，继续更新壮大中。如果里面没有你们和你们宠物宝贝的名字，请写信给xiaochaiyu ，我们会同时更新mitbbs的置底和google map。
这个宠友图是为了方便宠爸宠妈出门旅行/出差时保证小宠物们的生活起居有人照顾，
同时为了欢迎更多新同学的加入。请大家给出自己的地点，以及家里的宠物数量，以及是
否
能做cat/dog sitter。
考虑到隐私问题，给出州名即可，city名自愿给出。如果需要找临近的网友临时pet
sitting，请大家私下发信联系同州的网友，看是否在同一区。相信大家都是会彼此热
心帮助的。
———————————————————————————————————————
*update* 制作google地图版宠友分布图，链接如下
http://tinyurl.com/2zdype
farasi贡献了这个google宠友分布图，非常便于查询。我现在慢慢把现有的宠友信息
update上去，不过现在的信息很泛，一般就是到州，最多到city，像LA， boston这种宠
友密布的城市，如果你想把更细致的位置update上去可以管我要这个google acc... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 6180 | 27 没回错没回错，就是回文不引用签名档嘛
你看：
（btw 不许歧视用term的！）
发信人: sepharose (琼脂糖), 信区: pets
标 题: Re: 请推荐SD或者LA的dog boarding的地方
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 31 01:24:22 2009, 美东)
：（
明天打电话问问你推荐的那个地方吧。不行就只有定个pet friendly的旅馆，把Kirk带
上了。我知道la quinta是pet friendly的，还有其它价格可亲的旅馆推荐吗？
谢谢！ |
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b******a
发帖数: 12216 | 30 ☆─────────────────────────────────────☆
north (小北╰☆ 换个方向看世界) 于 (Wed Sep 12 15:39:12 2007) 提到:
宠友分布图，继续更新壮大中。如果里面没有你们和你们宠物宝贝的名字，请写信给xiaochaiyu ，我们会同时更新mitbbs的置底和google map。
这个宠友图是为了方便宠爸宠妈出门旅行/出差时保证小宠物们的生活起居有人照顾，
同时为了欢迎更多新同学的加入。请大家给出自己的地点，以及家里的宠物数量，以及是
否
能做cat/dog sitter。
考虑到隐私问题，给出州名即可，city名自愿给出。如果需要找临近的网友临时pet
sitting，请大家私下发信联系同州的网友，看是否在同一区。相信大家都是会彼此热
心帮助的。
———————————————————————————————————————
*update* 制作google地图版宠友分布图，链接如下
http://tinyurl.com/2zdype
farasi贡献了这个google宠友分布图，非常便于查询。我现在慢慢把现... 阅读全帖 |
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b******a
发帖数: 12216 | 31 ☆─────────────────────────────────────☆
tennisgirl (tennisgirl2008) 于 (Sun May 8 12:56:40 2011, 美东) 提到:
突然发现我家后院有桑树想起小时候养蚕的事, 想问问大家在美国有没有办法得到蚕籽
养蚕？
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sissicat (sissi) 于 (Sun May 8 13:54:06 2011, 美东) 提到:
我曾经问过我这边的老外，她说她在美国从来没听说有人养蚕的。。。。。。。可是我
一个澳洲的朋友说她们那有卖蚕。。。。。。
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PALA (done) 于 (Sun May 8 14:13:02 2011, 美东) 提到:
local小宠物店有时候有，很多网店也有，ebay啥的，不过都是一般般的常见品种
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araby (Ma... 阅读全帖 |
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A****e
发帖数: 3180 | 32 ☆─────────────────────────────────────☆
YMcDullY (纸包鸡) 于 (Sat Jul 9 02:15:24 2011, 美东) 提到:
发信人: YMcDullY (纸包鸡), 信区: board
标 题: Re: 小星星update (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 9 02:14:56 2011, 美东)
放心没人会删你的，这么精彩的骂街好久没见过了
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benbenma (猪猪) 于 (Sat Jul 9 02:17:17 2011, 美东) 提到:
看看人家后来又回的帖子，人家要请律师呢。而且，要用别人给她捐钱的时候留下的
information来人肉给她捐钱的人！真是牛气啊！
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mooth (破狗臭猫) 于 (Sat Jul 9 02:24:21 2011, 美东) 提到:
泥还不去睡！
☆────────────... 阅读全帖 |
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y*********u
发帖数: 14561 | 33 ☆─────────────────────────────────────☆
KittyKat (兮若妞儿她娘) 于 (Sat Jul 9 15:07:08 2011, 美东) 提到:
版主我建议你把我们三个都封了 不然他回多少我回多少
“我对你对小豆和若溪怎么样，一点意见也没有，我什么时候说过你对他们不好了，你找
出来给我看？？？
贴link是想让你自己来说清楚这些猫一个个来的去的是怎么回事，版面id很多都有疑问
，我那段时间也有禁忌所以尽量不做任何站内信，只能在版面上跟帖。”
【我解释了啊，但是你显然不满意啊，不是回应说我“扯一堆乱七八糟的煽情装纯情博
同情么”】
“我对你关于宠物方面的意见只有一个，就是在别的版三天两头怂恿一点养宠常识都没有
的id去养猫养狗当毛豆。当然，那天我也根本没说这个，你就已经跳脚骂我了。”
【这里有哪位ID被我怂恿养了波斯猫了么？】
器材版那个造谣高楼里，“本来灌水灌得正欢也匆忙回避”，和一堆人一起把楼顶高，
当然，骂人造谣的那些话没你的份，所以我没投诉你，我投诉的是骂人的版四。
【顶楼，我总共也没说两句话吧】
“我和器材版版四不熟，你和器... 阅读全帖 |
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y*********u
发帖数: 14561 | 34 ☆─────────────────────────────────────☆
amazingcat (amazingcat) 于 (Thu Oct 14 14:11:33 2010, 美东) 提到:
给宝儿买了Coolaroo的狗床，挺不错的，狗娃很喜欢，不过就是.....不知道是娃太重
了，还是这个质量不咋地,睡了几个月，这个床就塌陷了.....床面那个纤维布凹下去了
，再也回不来了，看着和吊床一样
当初阿福妈妈推荐了KURANDA，可是宝妈小农，怕宝儿如果不喜欢的话，就浪费银子了
，所以买了个山寨版的Coolaroo
现在事实证明，宝儿是个败家的孩子，就喜欢妈妈花银子，把床睡踏了，要妈妈再给买
一个。
我就想问问，用KURANDA的家长们，你们家的床还都是保持原样么？ 那个中间的布还是
展的么？
如果真的像差这么大，那我就狠狠心买个KURANDA 了~~
☆─────────────────────────────────────☆
xiaochaiyu (真身) 于 (Thu Oct 14 14:13:14 2010, 美东) 提到:
i have 2 Co... 阅读全帖 |
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Y******Y
发帖数: 8753 | 35 这也太强了吧，钢炮的脏嘴也被画进去了，哈哈哈。
btw,包子请给sepharose |
|
s******y
发帖数: 28562 | 36 Just like other gus have already said:
1. Buy another antibody from another specie. (I highly recommend this way)
2. crosslink your antibody to gel particles (CNBr activated Sepharose),
use the gel to pull down your protein,then use high salt(eg., 8M urea) to
seperate your protein.
3. crosslink your antibody to your protein by EDC-NHS method, then your
target will have a higher molecular weight. However, the result can turn out
to be hard to interpreted since the antibody would also bind somethi |
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e****s
发帖数: 1125 | 37 如果不能洗脱下来，你怎么确定结合上去了？用酸、碱或者SDS之类的能洗下来吗？
结合真这么紧，到时候蛋白应该很纯啊。
50
also
. |
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I*****y
发帖数: 6402 | 38 p
50
also
.
the buffer pH to 8.0 after dissolving it in Tris.t be in the buffer
conditions. |
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s******y
发帖数: 28562 | 39 首先，先直接把resin 用2x SDS loading buffer煮一下直接上胶跑，
看看上面到底有没有蛋白.
第二，把resin 转移到小管里面去，加入elution buffer之后摇上10分钟，
然后再离心取上清。
50
also
. |
|
g*****1
发帖数: 666 | 40 Check the pH. Glutathione can drop pH to quite low. And bound protein can
not be eluted. |
|
f*****s
发帖数: 104 | 41 I've run SDS-PAGE so many times. The protein is clearly still on the beads.
I'll check the pH today. I just didn't think 10 mM glutathione can change
the pH of 50 mM Tris significantly. |
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s*******e
发帖数: 1010 | 42 is there protease cutting site between ur proten and GST? if yes u can try
cut it from GST w/o elution. |
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j*****a
发帖数: 658 | 45 10-20ul/reaction, right? Thank you for sharing your info. No, I don't need
25ml, but I know GE health's beads are very good, but they only have 25ml
size.. |
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c*********r
发帖数: 1312 | 46 差不多吧，我用10到50 ul settled resin。
need |
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s******y
发帖数: 28562 | 47 这个很难做，属于我最讨厌的实验之一。最大的误差来源于洗resin的时候损失。
我一般是这么做的：
1. 把放抗体前的sample 调到同样体积， 然后取等量小样留下来分析 (S-0)
2.放抗体，blah blah blah 按照经典方法作。
3.放过量的resin。 可能的话混进等体积的blank sepharose bead 来增加体积。
4.把所有东西都装进mini-column 里面，等柱子成型后收集flow through.
然后把原来的管子用buffer 涮涮之后全部加到柱子上去以保证搜集到所有resin.
5. 洗柱子
6. Eluate：用1 volume 2XSDS-buffer (95oC) 洗脱，重复三次。
然后把柱子装到５０ml conical tube, spin down for 1 minutes, to collect all
the solution stuck in the resin bed. |
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s******y
发帖数: 28562 | 48 50ul 勉强还可以，再小就不好操作了，
所以对于特别小的体积要加适量的blank sepharose beads. |
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s******y
发帖数: 28562 | 49 beads 量太小（少于50uL) 可以加适当的blank sepharose beads来填充体积。
管太多的时候就像你说的那样，挺麻烦的，特别是装那么多column很烦，特别
耗时间。不过装完之后就好了，可以把所有column 都装在那种Qiagen rack 上，
一起洗，其实还蛮方便的。我最多的时候同时做过8管。
另外，你指出这个是对的：在大部分情况下的确是可以用IgG 来做loading control。
用这个矫正体积后再跑胶。
我们实验室经常是做crosslinked IgG, 没有办法用这个loading control，
所以我一下子还真没有想到这一点。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 50 Hi, all,
I am using Rosetta-Gami DE3 pLySs to expression my fusion protein which is
predicted as 91kDa.
I first did the expression assay and found protein expression was induced
after adding IPTG by testing the whole cell lysate. (bacteria at certain
time points, add 2X sample buffer, boil, SDS-PAGE).
Then I moved to culture more and lysed the cells using a sonicator, after
resuspending the pellet with 1x cold PBS/1% PI. After all these, I loaded
the supernatant and pellet side by side and stain... 阅读全帖 |
|
