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w***n
发帖数: 4358 | 3 ☆─────────────────────────────────────☆
xiaolanchong (小懒虫) 于 (Sat Feb 12 13:44:08 2011, 美东) 提到:
eb1加急，两个礼拜，昨天刚批。已经把最后600转到版上，还愿。
也感谢两年来在湖北版灌水，版友们给我带来的欢声笑语，呵呵
祝各位新年大展宏图，百尺竿头，更进一步
珍重。
感谢版主还是帮忙发一下，每人10个伪币，发完为止。
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monk (猪六戒~版大) 于 (Sat Feb 12 14:10:23 2011, 美东) 提到:
eb1, 太牛了
恭喜恭喜
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whbin (御风~探花) 于 (Sat Feb 12 14:42:54 2011, 美东) 提到:
cong~
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mushroom (海咸河淡 鳞潜羽翔) 于 (Sat Fe... 阅读全帖 |
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d****n
发帖数: 12461 | 4 cm haf 922
nzxt panzerbox
不过这两个比较透也许你不喜欢
gigabyte cupio或者sumo
silverstone这个价位也有。 |
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a***y
发帖数: 19743 | 5 brad pitt的softbank广告很好啊
Sumo |
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b***e
发帖数: 1419 | 6 Scala就是再傻逼还是有几个killer applications (e.g spark)在那挺着, 还是有个
typesafe在那豁搞，还有twitter, sumo logic等知名企业在那站台。Go有啥？啥鸡巴
也木有。Google内部很多人根本就不知道GoLang是什么玩意儿。Go就是个google glass
之类的悲催，就是google有钱请几个闲人娱乐一下。看看dart就知道。 |
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c*******0
发帖数: 5247 | 7
我开什么骂了？“打嘴炮”现在在这个版叫做开骂？
我说京二打嘴炮不是一天两天了，因为他就是典型的不给理由直接说一个语言烂的。他
bash Go不是一天两天了，当初我还耐心回他，现在真是没耐心说长篇大论。我说过，
有些病，没法治。
你不知道我和他争论的历史就跳进来，这也罢了，跳进来之后给的原因全部都是错了，
这个我就不得不lol了。你说的
“Scala就是再傻逼还是有几个killer applications (e.g spark)在那挺着, 还是有个
typesafe在那豁搞，还有twitter, sumo logic等知名企业在那站台。Go有啥？啥鸡巴
也木有。”
这离谱得实在是不止十万八千里。Go的killer app从数量和影响上都比Scala强，用Go
的有名企业从数量到质量上都比Scala强。你要是不信我告诉你出门左转Google了。就
这你还满嘴脏话，真是没兴趣和你讲什么 |
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h**********8
发帖数: 650 | 10 Sumo is around 26kD, I guess it is Ubiquitin. |
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s*******e
发帖数: 1010 | 11 Do u have a cleavable His-tag on you protein? Sometimes protein (esp
membrane protein) has a low yield which can not be found by comparing
induced and non-induced samples.
If your protein is really important for you, try add a Thrombin, TEV or SUMO
protease cutable His-tag and do a simple separation with Nikel beads. Then
check if there is difference between SDS-PAGEs with and without protease
incubation. Good luck.
IPTG), spin |
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v******n
发帖数: 257 | 12 版上有没有人用过ＳＵＭＯ的抗体啊，ｓｕｍｏ１，２，３的都行
我想测试一个蛋白在特定的情况下有没有被ｓｕｍｏｙｌａｔｅ，打算把这个蛋白给IP
下来然后做个ＳＵＭＯ的ｂｌｏｔ
目前买了２个公司的抗体，什么条带都看不到的说
有没有给推荐的呢？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 只有一条带么？如果能看到两条带的话，很可能是mono-ubiquitinylation（18kd)
or SUMO
当然，也不能排除磷酸化 |
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t****p
发帖数: 1504 | 14 我以前也曾看到类似现象，就是一个蛋白有两带，大的用genome sequence怎么解释都
不通，比预计的条带（小带）大20kd左右，后来用sumo，磷酸化啊，糖基化啊一一检测
过去，什么都不是，现在还是不知道什么原因。
还碰到一个情况是把内源蛋白交联，发现有多一条带，大20kd左右，以为交联到了新蛋
白，质谱打了两次，除了这个蛋白序列外没有其它的。问不少人，都说构象的变化导致
20kd的迁移从来没有出现过。迄今为止还没有很让我信服的解释。 |
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s******u
发帖数: 81 | 15 有没有其它Posttranslational modification的可能，比方SUMO？ |
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k****o
发帖数: 589 | 17 个人始终对Santa Cruz的质量不放心。50kDa的蛋白有很多，这个抗体有可能特异性不
好。
如果是post-translational modification的话，似乎只有SUMO能够吻合上两条带分子
量的差异。
公司的图片根本不可信，特别是Santa和Abcam的，为了卖东西什么都做得出来。 |
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g*********d
发帖数: 233 | 18 夏荣辉，李江
上海交通大学医学院，上海（200011）
E-mail：e******[email protected]
摘 要：基因的表观遗传学修饰正越来越受到人们的重视，它包括DNA甲基化和组蛋白修
饰，组蛋白修
饰又包括组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化。基因的表观遗传学改变在基因转录调节方面有
重要作用。最
近研究较多的是多种组蛋白修饰方式和DNA甲基化在基因转录调节方面的共同作用，本
文详述组蛋白
修饰和DNA甲基化的发生机制，并且总结了组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化与DNA甲基化之
间的相互作
用，提示不同位点的组蛋白甲基化与DNA甲基化共同作用于基因转录，并且发挥不同的
作用，具体体
现在组蛋白乙酰化、组蛋白H3K9、H3K27和H4K20甲基化与DNA甲基化协同作用，使基因
发生转录抑
制，而组蛋白H3K4甲基化与基因转录激活有关。
关键词：组蛋白修饰；DNA甲基化；关系
1. 引 言
目前，在研究肿瘤发生发展的过程中，基因的表观遗传学修饰所起的作用日益得到人们
的重视。组蛋
白修饰和DNA甲基化是两种最重要的表观遗传学修饰方式。研究表明，人类几乎所有类
型的肿瘤都存
在组蛋白及DNA甲基化的异常... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 19 未必，Sumo不一定就更meaningful。
it |
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b******y
发帖数: 627 | 20 Don't recommend denature-renature from inclusion body. Not many successful
examples, especially for relatively large proteins. You will have better
chances if putting a good tag, (MBP, Sumo, GB1, .... even GST) in front of
your proteins. |
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p*****e
发帖数: 332 | 23 他来我们学校给过talk，搞笑的是他的炸药奖文章发的时候没人要，最后发到了BBRC那
里，而且pubmed还把他的名字拼错了。 |
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c********r
发帖数: 1125 | 24 要说活跃的必须stefan Jentsch阿,另外caltech的Deshaies，yale的hochstrasser也很
牛... |
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f*****f
发帖数: 195 | 25 这个很正常，最常见的情况是至少有个公司是错的。在极少且特殊的情况，蛋白有不同
的剪切或修饰如sumo化，不同抗体识别不一样结构。 |
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s********9
发帖数: 132 | 26 我后来还真是找到了一个磷酸化激活激酶的这种实验.
不知道有无其他的PTM(Ac,Sumo,Ubi等)有这种solid的生化证据的. |
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l********n
发帖数: 260 | 27 Ubiquitin, SUMO, and Phosphate: How a Trio of Posttranslational Modifiers
Governs Protein Fate. Helle D. Ulrich[1]. [1] Cancer Research UK London
Research
please send to a*************[email protected].
Thanks! |
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O*z
发帖数: 109 | 28 看起来PI很牛的样子，这个PI咋样，nice吗？
还有，请大伙推荐一下做sumo, DNA recombination, aneuploidy方面的中牛 lab。最
近要
desperate离开hell |
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y***y
发帖数: 709 | 29 这个非直接的方法太不靠谱了，我觉得。
有时候酶的活性跟mRNA水平没啥关系，翻译后修饰的成分太大了，比如磷酸化，泛素化
之类的
没有做过没关系，找到protocol跟着做就是了
对于没做过的实验，不要怵，要胆大心细，把人家protocol好好研究，每一步的所以然
都弄明白，然后硬着头皮就去试。几次不成够之后再想他法。
您现在都还没试呢，就琢磨着用非直接的方法。即便是运气好，被您找到了一些证据，
回来发文章的时候，reviewer一句话说，没有IP的证据结果不可信，您还不得一样回来
重新来过？ |
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i*****g
发帖数: 11893 | 31 直接扑向IP，这个又不是什么新锐的东西，仔细阅读3个版本protocol，再问问做过的人
不要做mRNA，RNA的事情和蛋白的可以差很远，这不是闲得发慌么 |
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l**********e
发帖数: 146 | 33 没做过没关系，找个善于做IP的实验室合作。想发文章说这种PTM，IP-WB是逃不掉的。 |
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v********a
发帖数: 646 | 34 这个指教做wb吧，文献太多了。
有in vitro sumoylation kit，可以用来做阳性对照。 |
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K****a
发帖数: 161 | 35 SUMO1 是mouse. 你的蛋白抗体是不是也是mouse？用的什么elution buffer?
lane |
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K****a
发帖数: 161 | 36 你要是担心抗体被elute，你可以把抗体和beads crosslink在一起
lane |
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g*******f
发帖数: 427 | 37 多谢回复，我用的蛋白抗体确实是mouse的，这样会有什么问题吗？
我没有 elute， 就是直接将loading buffer 加在洗过后的bead里，然后煮5min，就跑
western 了。 |
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o**4
发帖数: 35028 | 38 25 kd跟 50 kd附近是会有很强的 IgG的信号的，
需要用true blot的二抗，
ebioscience有卖 |
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b*******0
发帖数: 125 | 39 FGF21-----PPARg SUMOylation ? |
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C**S
发帖数: 522 | 40 sumoylation挺难检测的。你的目的蛋白的sumoylation有没有被报道过？如果有文章发
表过，按照他的实验方法一模一样的重复，用的什么细胞系，哪个公司的抗体，体外还
是体内实验，先IP谁再WB谁，等等很多细节问题都要注意。 |
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z*********s
发帖数: 38 | 41 二硫键做的太多了，SUMO，ISG15，Fat10，Nedd8这些都算在UBL里面。除了这些以外还
有吗？比如两个不同的蛋白质或者蛋白质亚基之间通过K和D，E连接，或者通过K和Q连
接？是生物体内天然的那一种 |
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s******9
发帖数: 283 | 42 NCBI protein database一般都有标注吧。
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..503
/organism="Homo sapiens"
/db_xref="taxon:9606"
gene 1..503
/gene="TGFBR1"
/gene_synonym="ALK5"
/gene_synonym="SKR4"
Protein 1..503
/gene="TGFBR1"
/gene_synonym="ALK5"
/gene_synonym="SKR4"
... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 43 我也正想说这个呢。
可以在N-端放Ubiquitin sequence（和SUMO是一样的道理）, 然后后面放楼主要用的序
列，然后如果在真核里表达的话，Ubiquitin 可以直接被细胞里的酶切除，就露出后面
的氨基酸了，这样就不需要从Met 开始了。而且这种方法在理论上不会影响后面跟着的
多肽的折叠。但是要注意的是这种方法不能做出Pro开头的多肽，因为会切不掉。
如果是在细菌里表达的话，既可以同时表达一个ubiquitin hydrolase,也可以纯化之后
再和ubiquitin hydrolase反应。如果要求纯度更高的话，还可以用anti-ubiquitin 来
除去没有切掉的蛋白。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 44 同意！！
另外有一点，我觉得很多人都觉得上下两条带是alternative translation，其实很可
能是其它Sumo或者Ubiquitin或者磷酸化修饰导致的。alternative translation的可能
性我认为不大。
另一种更常见的情况是下面那条带其实是N-termianl truncation band.
我认为这几种情况都比alternative translation可能性大得多。
在楼主的case里，甚至有可能上下两条带都是Full-Length，只不过Flag antibody
affinity比HA antibody高很多，导致楼主误以为下面没有HA tag.
很多蛋白都有multiple in frame的ATG,通常后面的ATG是不会起作用的(除非有
alternative splicing或者复杂的RNA secondary structure.)
退一万步说，除了in frame的ATG,还有很多非in frame的ATG，设想一下，如果这些ATG
能起作用，细胞早就被junk protein淹没了(当然，非in frame产物如果不在最后的
... 阅读全帖 |
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p****n
发帖数: 18 | 45 感谢sumo的详细回复和鼓励，很受教。
的。
6000 |
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l********n
发帖数: 260 | 46 两年一次的中科院院士增选总是你那么令人瞩目，鉴于2011年和2013年产生的系列“事
件”，本次科学院院士增选选择了直接公布了第二轮名单。何以见得？2011年初步候选
名单77人，进入第二轮30人，最终当选9人（朱玉贤、张学敏、张明杰、李林、赵玉沛
、康乐、黄路生、舒红兵、葛均波）；2013年初步候选名单88人，第二轮没有公布，最
终当选9人（金力、赵继宗、施一公、桂建芳、高福、韩家淮、韩斌、程和平、郝杰）
。从名单上看纯临床医学背景1-2个，作物遗传昆虫~2个，纯生命科学和医学基础5-6个
；2015年实际上是直接进入第二轮名单，候选人30个。
虽然2015年生命学部院士候选人没有首轮名单，但是根据几个一级专业学会（遗传
、生化分子、细胞）推荐的名单约略可以知道部分候选人信息，这部分详见博文2015年
院士增选生命科学领域部分公示名单，不过很遗憾细胞生物学会推荐的董晨教授没能进
入第二轮，国内免疫领域董晨教授的学术水平国内应在Top3（个人觉是No.1^_^），此
次没能进入第二轮可能主要是因为回国时间短。一下是摘录清华官网对董教授的介绍：
董晨教授是世界上著名的免疫学家... 阅读全帖 |
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z********i
发帖数: 610 | 47 补充一点信息，关于SUMO国际会议。就这个小会，开来开去就那么几个人，也没有人愿
意办。大部分都是MD ANDERSON的Yeh主办。他实验室有人回上海了，也算给他减轻一点
负担了。 |
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b****d
发帖数: 240 | 48 Yes, some1 comes to the senses!!!
Let me know what is going on inside, please. sumo!!!!! |
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x*******6
发帖数: 65 | 49 Hi,
SUMO, McQueen,
请查看站内邮箱 |
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