由买买提看人间百态

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全部话题 - 话题: 传代
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p*********n
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1
来自主题: NJU版 - 【应景小作】蚂蚁情结
夏天一到,小小的蚂蚁开始络绎不绝地登门拜访来了,多到我晚上睡
上眼它们还在眼前不尽地走动著,活动著…… 多次观察后,不知不觉地产生了很多好
奇,想想,蚂蚁会不会是我们的祖先呢?去年夏天看蚂蚁竟然象犯了啥病似的,给一对
在水池边追逐嬉戏的蚂蚁儿拍摄并配上了一段《波斯市场》的音乐,制作了个小小蚂蚁
的“MTV”,宝贝儿子每次看都乐翻了,站在沙发上一个劲地跳。
我观察蚂蚁的“人口”之多人类是没法比,它们繁衍传代之快,其辈份
、亲族、远戚、和种类之多,人类也是没法相比的。上过生物课后对它们有所了解,原
来蚂蚁具有社会昆虫的显著特徵,诸如同种个体间能互相照顾幼体,具体明确的劳动分
工。但有一个基本的原则,既老蚂蚁不断产生了新蚂蚁,而年轻蚂蚁照顾年老的蚂蚁。
蚂蚁的寿命周期、生活规律、杂食性、食肉性、,有巢哺育后代、抵御外部不良环境、
天敌捕食、品级社会分工的精细等,象蚁王,蚁后、工蚁、雌蚁、家蚁、客蚁,除了表
现的特徵外,所做的事情可谓也有粗细和责职之分的。
蚂蚁有一个共同点,就真的都象“蚁公”一样会“移山”,
o******e
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2
【方舟子按:把别人研究兔子的实验数据拿来当人的数据用,这不仅是剽窃,更
是伪造数据】
“兔子大变活人”——山东大学内分泌专业“博士”孙宇学位论文严重剽窃
山东大学内分泌专业2007年毕业“博士”孙宇学位论文严重剽窃,论文题目
是“糖尿病患者骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究”,剽
窃的是同一单位低温医学研究室2006年出站博士后李某的出站报告“干细胞定向
治疗研究”。
原来山东大学“博士”可以这样“培养”?可以这样轻松毕业、获得学位?
山东大学等有关单位将如何处理?公众将拭目以待。
在“博士”论文首页赫然出现孙宇的原创性声明签字及其导师签字,声明
“本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内
容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。” 整
个论文分为两个部分(万方学位论文全文数据库www.shwanfangdata.com),仅第
一部分 “糖尿病患者骨髓间充质干细胞体外分离培养、扩增及鉴定”图片共13
张,剔除不能说明问题、滥竽充数的4张原代及传代BMSCs图片外,其余8张图片
均为剽窃同一单位低温医学研究室2006年
c*********d
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3
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: chinabbsdad (张果老他爹), 信区: Military
标 题: 厦大一副院长博士论文涉抄袭学生论文:连致谢也抄
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 10 07:38:06 2017, 美东)
http://news.163.com/17/0810/00/CREGTGSO0001875P.html
2017-08-10 00:16:36 来源:中国青年报(北京)
(原标题:中山医院院长博士论文被指抄袭学生硕士论文:连致谢也抄)
蔡建春
拥有厦门大学附属中山医院院长、党委副书记、厦门大学医学院常务副院长等多个头衔
,蔡建春近日再次被举报:其申请厦门大学博士学位的论文涉嫌抄袭。
被“抄袭”的文章来自于他的两名硕士生。中国青年报?中青在线记者将蔡建春的博士
论文和这两名硕士生的毕业论文进行比对,发现蔡建春的论文内容与后两者内容大面积
重合。其中,正文近一半与一名学生的毕业论文雷同,就连致谢也部分一致。
据两名学生的硕士毕业论文记载,他们的论文指导老师皆为蔡建春。蔡建春在致谢中提
到,“特别感谢两位同学... 阅读全帖
c*********d
发帖数: 9770
4
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: chinabbsdad (张果老他爹), 信区: Military
标 题: 厦大一副院长博士论文涉抄袭学生论文:连致谢也抄
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 10 07:38:06 2017, 美东)
http://news.163.com/17/0810/00/CREGTGSO0001875P.html
2017-08-10 00:16:36 来源:中国青年报(北京)
(原标题:中山医院院长博士论文被指抄袭学生硕士论文:连致谢也抄)
蔡建春
拥有厦门大学附属中山医院院长、党委副书记、厦门大学医学院常务副院长等多个头衔
,蔡建春近日再次被举报:其申请厦门大学博士学位的论文涉嫌抄袭。
被“抄袭”的文章来自于他的两名硕士生。中国青年报?中青在线记者将蔡建春的博士
论文和这两名硕士生的毕业论文进行比对,发现蔡建春的论文内容与后两者内容大面积
重合。其中,正文近一半与一名学生的毕业论文雷同,就连致谢也部分一致。
据两名学生的硕士毕业论文记载,他们的论文指导老师皆为蔡建春。蔡建春在致谢中提
到,“特别感谢两位同学... 阅读全帖
b**d
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5
来自主题: ZJU版 - 八十年代(ZZ)
家有留声机,虽陈旧但依然能放出声音,扫房收拾出许多老唱片来,挑出几张少年时代常
听的歌曲,“排球女将”,“霍元甲”,“杜丘之歌”,“小城故事”。插上电源,缓缓
放上音针,随着嘶嘶噪音,旋律响起,时间刹那间凝固,仿若打开了时空隧道,一下子拉
到了那晴朗的八十年代。
八十年代天高云淡,空气始终清新,尤其是夏天雨后积有水洼的街道,清澈如镜,中午上
学的孩子们都爱穿着凉鞋趟水走,树郁郁葱葱花园里的孩子也在嬉笑奔跑着,吹过凉爽的
风夹带着雨丝,吃着两分钱一颗的水果冰棍,谁买了五分的奶油冰棍也要让旁边孩子轮流
咬上一口,孩子们游戏并不如现在丰富,几个弹球,毛片就能玩上半天,大的项目就是去
体育场用扫帚扑蜻蜓,爬房子摘树种,踢罐头盒的逮人游戏。
学生学过很多传代的歌,勇敢的俄伦春,什么高高的兴安岭一片大森林,里面住着一帮勇
敢的俄伦春,还有什么生产队里来了一批小鸭子,还有什么小熊跳舞一二一,老师凄厉的
眼神我记忆尤新,我没懂五线谱可能同这眼神有关。我会唱整段雪染的风采,数学老师得
知把我叫到办公室,让我给她唱了一遍一遍整一节课,唱的我快唾沫染风采了。
城有条河,河有码头,经常能捞到虾,偶尔能捉到螃蟹
p*********n
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6
来自主题: HuNan版 - 【应景小作】蚂蚁情结
夏天一到,小小的蚂蚁开始络绎不绝地登门拜访来了,多到我晚上睡
上眼它们还在眼前不尽地走动著,活动著…… 多次观察后,不知不觉地产生了很多好
奇,想想,蚂蚁会不会是我们的祖先呢?去年夏天看蚂蚁竟然象犯了啥病似的,给一对
在水池边追逐嬉戏的蚂蚁儿拍摄并配上了一段《波斯市场》的音乐,制作了个小小蚂蚁
的“MTV”,宝贝儿子每次看都乐翻了,站在沙发上一个劲地跳。
我观察蚂蚁的“人口”之多人类是没法比,它们繁衍传代之快,其辈份
、亲族、远戚、和种类之多,人类也是没法相比的。上过生物课后对它们有所了解,原
来蚂蚁具有社会昆虫的显著特徵,诸如同种个体间能互相照顾幼体,具体明确的劳动分
工。但有一个基本的原则,既老蚂蚁不断产生了新蚂蚁,而年轻蚂蚁照顾年老的蚂蚁。
蚂蚁的寿命周期、生活规律、杂食性、食肉性、,有巢哺育后代、抵御外部不良环境、
天敌捕食、品级社会分工的精细等,象蚁王,蚁后、工蚁、雌蚁、家蚁、客蚁,除了表
现的特徵外,所做的事情可谓也有粗细和责职之分的。
蚂蚁有一个共同点,就真的都象“蚁公”一样会“移山”,
p*********n
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7
来自主题: Shanxi版 - 【应景小作】蚂蚁情结
夏天一到,小小的蚂蚁开始络绎不绝地登门拜访来了,多到我晚上睡
上眼它们还在眼前不尽地走动著,活动著…… 多次观察后,不知不觉地产生了很多好
奇,想想,蚂蚁会不会是我们的祖先呢?去年夏天看蚂蚁竟然象犯了啥病似的,给一对
在水池边追逐嬉戏的蚂蚁儿拍摄并配上了一段《波斯市场》的音乐,制作了个小小蚂蚁
的“MTV”,宝贝儿子每次看都乐翻了,站在沙发上一个劲地跳。
我观察蚂蚁的“人口”之多人类是没法比,它们繁衍传代之快,其辈份
、亲族、远戚、和种类之多,人类也是没法相比的。上过生物课后对它们有所了解,原
来蚂蚁具有社会昆虫的显著特徵,诸如同种个体间能互相照顾幼体,具体明确的劳动分
工。但有一个基本的原则,既老蚂蚁不断产生了新蚂蚁,而年轻蚂蚁照顾年老的蚂蚁。
蚂蚁的寿命周期、生活规律、杂食性、食肉性、,有巢哺育后代、抵御外部不良环境、
天敌捕食、品级社会分工的精细等,象蚁王,蚁后、工蚁、雌蚁、家蚁、客蚁,除了表
现的特徵外,所做的事情可谓也有粗细和责职之分的。
蚂蚁有一个共同点,就真的都象“蚁公”一样会“移山”,
j****n
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8
来自主题: Zhejiang版 - 周末跟小街九斤等读点妇性奴性
我今天扫了几眼他的散文,当然我依然很仰慕他的文风和理想,欣赏他的深刻和锐利,
他的理想世界也是我的理想世界,但我觉得他对革命的憧憬有些太理想主义。他要是多
活几年,看到后来发生了什么,要是再多活几十年,看到阿拉伯的春天之后发生了什么
,会不会看法有所改变呢。一个缺乏独立精神太久的民族,不是靠一次铺天盖地的革命
就能拯救的。就像我看到的一些人,即使想改变自己不好的习惯或者不想让坏习惯传到
后代的身上,但是自己却不会其他的更好的模式,所以不好的习惯太容易保持和传代了。
j****n
发帖数: 1263
9
来自主题: Zhejiang版 - 忆一位黑人朋友
那是来美国的第一年,在洛杉矶求学。最怀念这样的城市,文化多元,美食诸多,容易
让人找到自己的归属。一次去银行开通信用卡的时候,冷不丁坐在边上的一个黑人和我
搭讪。我就友好的和他聊了几句。他说自己叫Andrew,是医院的护工。印象特别深的谈
话内容是他说有一回,一个重症的病人跳窗自杀,令他感叹生命的无奈和自己所为的有
限。想不起来他长什么样子了,大致是一副敦厚壮实的模样。后来大约是留了电子邮件
,偶尔的联系一下。直到圣诞节的时候他请我到他的朋友家里去吃午饭。
对美国文化充满好奇的我便不假思索的去了。我当时的住处离市中心比较近,属于不太
安全的区域。而Andrew带我去的地方,是更偏南的位置,各种案件的高发区域。彼时真
是没有什么安全意识,经常在学校凌晨两三点做完实验,骑着自行车悠哉悠哉的往家赶
。回想起来直冒冷汗,没有遭遇什么不幸真是人生的大幸。然而又感谢这样的神经大条
,让我体验了美国黑人家庭的圣诞传统。
主厨的是一位黑妈妈。做了不少菜。多用大锅或者大盘盛着。那时我来美国还不到半年
,还是比较纯粹的中国胃。一看到那些炖的稀巴烂的就没了胃口。要换了现在八成还能
说出名字,还能品出好坏。那... 阅读全帖
y*k
发帖数: 90
10
来自主题: Biology版 - Re: purpose of DMSO in cell freezing
(三)、组织细胞的保存:
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现
变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,最佳的
策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深
低温保存法(-70℃—-196C)的特点。
细胞深低温保存的基本原理是:在-79C以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于
完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0C-20C阶段的处理过
程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。用电镜观察,可见细胞
的核膜上有大量针尖样小孔。
生化研究发现,在此温度范围内,钾离子和钠离子集聚在细胞两侧,具有细胞毒性。因
此,为了避免0C——20C冰晶的形成和细胞膜两侧离子平衡的破坏,需要加保护剂。目前
常用的保护剂有甘油和二甲基亚矾(DM50),它们可降低冰点,在缓慢的冻结条件下,能
使细胞内水分在冻结前透出
细胞外。贮存在-130C以下低温中能减少冰晶形成,DMSO和甘油对细胞无毒性,分子量小
,溶解度大,易穿透细胞,使用浓度范围为5%—15%,
d***e
发帖数: 243
11
来自主题: Biology版 - Re: 细胞传代求助
Trypsin, pepsin 等对LH receptor影响不大{Gospodarowicz 1973}. 所以也可能是其它
的一些原因:cells condition, monolayer overlapping之类的问题.当然commercial
trypsin function本身就比较复杂,有时有些人就用较纯化或重组的trypsin和胶原酶之
类成份确定的混合物去消化。
我的感觉是你是否让你的宝贝细胞刚长得90%confluence后,hanks washing triple,再用
0.05%trypsin在不同温度(Rm, 36)消化一下看有没有提高。
实在不行就定些Cell Dissociation Buffer or Enzyme Free Dissociation
Reagents(60% confluence),但我总认为是花拳秀腿,但也许就对你的实验管用。
另外培养界面,polypropylene, glass, teflon-coated 都是option,但我对这些不熟悉
。可能还有几个较流氓的方法,冰水超声,内置tiny cover slides, 瞬时低渗
l**********n
发帖数: 240
12
我在这方面是新手,先谢大伙帮忙。
用pGIPZ shRNA plasmid 转染细胞后,用puromycin select, 刚开始细胞有GFP表达,但是传代几
次后,细胞就没有GFP荧光了。但是仍然对puromycin 抵抗。
这种情况下 shRNA 还表达吗?
plasmid contains: CMV promotor followed by GFP, IRES, PuroResistance, and
shRNA.
http://www.openbiosystems.com/RNAi/shRNAmirLibraries/GIPZLentiviralshRNAmir/
是不是因为有IRES,PuromycinResistance 蛋白被高效翻译,而影响GFP的翻译?
l**********n
发帖数: 240
13
自己顶。

,但是传代几
s******y
发帖数: 28562
14
很多细胞会变异而产生对puro的抵抗力的,尤其如果你用的是癌细胞的话
我做类似试验的时候,都是在用药一个星期后必须用荧光sorting
一此

,但是传代几
d****h
发帖数: 46
15
来自主题: Biology版 - U87MG cell
上周从ATCC寄来的U87MG,
Eagle's MEM+1.2g/L sodium Pyruvate+10% FBS, 37C 5%CO2 培养
细胞呈长梭状,长得很慢,而且长到20%confluent 就基本停止生长了(如图),传代后
也只能长到20%左右。
请问
培养基, 培养条件是不是不理想?我也试了DMEM
U87MG本身就是这样, 或者还有其他我没注意的问题。
我养其他细胞M059j,BHK,Huh7都没问题。
谢谢指教
h**********r
发帖数: 671
16
来自主题: Biology版 - 整合质粒的疑问
还有一个疑问,如果我筛选到了之发生一次crossover的转化子之后.这种细胞在传代之
后稳定否?会不会自己发生丢失呢?
K****a
发帖数: 161
17
我在目的基因CDS 3'端加了一个Flag-tag,然后转化Arabidopsis野生型,用的是35S
promoter。转化植株的第一代RNA水平高的株系挑选出来传代,第二代出现表型分离,
而且符合3:1的比率。用Northern检测第二代植株的RNA水平,发现出现特殊表型的植
株中RNA水平很高,但是用western检测不到蛋白表达。所以我设计了三段探针,分别用
目的基因CDS的前,中,后三部分,Northern结果发现前段和中段探针能检测到高表达
,但是最后一段却没有信号。
现在我想的是高表达的RNA不是全长,所以用Anti-Flag抗体检测不到蛋白表达。但是我
不知道为什么会出现这种情况。构建的用的是CDS,不含任何intron,按理说不会出现
alternative splicing。我现在想的是在5'端再加上一个HA-tag,转化得到过表达植株
,看看会不会出现相同表型,如果有的话,RNA是不是truncated,如果是的话,用Anti
-HA抗体检测看看有没有truncated protein存在。
遇到过这种现象的同学能不能指导一下,我想破脑袋也没想通。多谢!
s******y
发帖数: 28562
18
我们做的实验和你们的不一样,我们并不关心颜色所以我没有比较过用a-MSH后
细胞是不是变黑了。
B16我们是在别的实验室要来的。一直在split,没有什么问题。反正这个细胞是
癌细胞,理论上是可以没完没了的传代的。

treat的细胞,也就是control组颜色更黑?假如是的话,α-MSH或IBMX 这一组的
medium 颜色不是黑的吧也就是说没有细胞死吧?
K*o
发帖数: 96
19
来自主题: Biology版 - 请教一下关于Lentivirus Packaging
我正在做Lentivirus,但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
公司的Plat-A细胞,他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
胞。
我的做法是:第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好,然后转染,我直接把
Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
Transfection以后,第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死,但是就黏在
一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后,我把所有的液体收集起来后离心,
然后用上清infect breast cancer cells,效果很差。我觉得应该是Transfection的问
题。版上有人碰过类此的问题么?这到底是怎么回事呀?为什么我的细胞总是转染后漂
起来呢?平常传代的时候它们看着都挺正常的。
有没有其他的办法?或者大家用什么细胞或Reagent做Lentivirus Packaging效果好的
,分享一下?
f********n
发帖数: 6465
20
来自主题: Biology版 - 果果同学这两天很闲呀。
交友面窄啊.
原来别人总还找我出去玩.
我能去吗?
周末啊,晚上啊,也要去传代一下细胞啊.
人都没有自由,被困死在实验室了.
再过不久,我都要成灭绝了..哈哈.
O******e
发帖数: 4845
21
来自主题: Biology版 - 有的研究者怎么这么mean?
别人给你从头开始复苏细胞传代加运输,光材料成本就不老少了,再算上人力成本,
收个250刀也不算太过分。

持久
K**********e
发帖数: 188
22
来自主题: Biology版 - 有的研究者怎么这么mean?
运输不都是对方付费的吗
复苏细胞,再传两个dishe,再冻起来,最多就用个30ml培养基,也要计算钱吗?
人力,第一天复苏细胞10min,第三天传代10min,第5天冻起来10min。
一共半个小时。
如果连这样举手之劳都要斤斤计较,我觉得只能用mean来形容。
a*m
发帖数: 1217
23
来自主题: Biology版 - HCV infecton
第2轮感染的时候,有没有可能Huh7.5长的太满了或者传代次数太高?
p******d
发帖数: 3737
24
来自主题: Biology版 - GFP 稳转 荧光变弱 问题求助
什么promoter?是一直就弱还是传代以后变弱了?
l*****i
发帖数: 1163
25
想重编程?
嘿嘿,我貌似刚好听说过,如果感染之后传代,细胞不错。如果work,给我包子吧。
如果不work,只有建议你调整病毒滴度了。
s******s
发帖数: 13035
26
同意你不是学生物的。
开个玩笑。文章里说是取代DNA里面的磷了,剩下的磷是trace amount,
根据DNA结构的重复性,大量取代和完全取代没有区别;倒是有可能有
部分蛋白质仍然用磷,这个需要更长时间的传代来说明

这些本来含磷的活性物质的活性比一般生物体高。比方说一般生物体里面需要1ppm的
ATP,它只需要1ppb。
s******s
发帖数: 13035
27
基本上都是质谱啥的。多次传代只剩trace amount的磷。
C*******e
发帖数: 4348
28
希望他们二月份的paper会有更直接的证据在里面
不过不管怎么样,这个细菌在含40 mM AsO4(3-),5 uM PO4(3-)的培养基里能传代
还是挺unique的
K**********e
发帖数: 188
29
来自主题: Biology版 - 请教养小鼠干细胞的问题
mouse E14 细胞。
用.1%的gelatin处理培养皿,需要放置多久?有的protocol说室温1分钟,有的说至少
30分钟。
处理时间过久了会有影响吗,比如在incubator里面放过夜了?
要传代,用trypsin消化下来细胞,是不是原来的培养皿就不能用了?
谢谢!
C*******e
发帖数: 4348
30
那谁给个总结
到底现在所谓synthetic living things有多少东西是artificial的有多少东西还是借
助现有的生
命体的?是不是完完全全都是合成来的东西,从细胞膜到蛋白到染色体,并且可以分裂
传代的,现在还
没有?
B******o
发帖数: 496
31
来自主题: Biology版 - 悬浮细胞stable 转染
你这是suspension的细胞?
如果是的话,有两种方法,快点的,FACS sorting
慢点的,多传代几次,基本上死细胞都没了
s*****g
发帖数: 7857
32
来自主题: Biology版 - 悬浮细胞stable 转染
在细胞量大而死细胞多时用Ficoll centrifuge分离.得到悬浮的活细胞.
而量少时就要耐心等待.慢慢长多了,再传代.否则有限的活细胞会丢失很多.
c******r
发帖数: 3778
33
来自主题: Biology版 - 请教有关cell line的基本概念
唉,这确实是个概念问题。
首先,现在认为从正常细胞变成cancer cell需要经过multiple steps。所以每一个不
同的stage都可以有细胞系。
1. 正常细胞。最常见的,比如我们的PBMC,fibroblast等,还有很多其他的细胞。当
然这样的正常细胞难以成为细胞系。因为会senescense,不能长期繁殖。不同species
的细胞能够繁殖的代数不同,人类的好像多数在10-20代左右(看donor的年龄等),但
是都不能无限繁殖。我们买到的,一般是经过几次传代扩展的low passage cell。不同
batch可能是不同的donor。
2. immortalized。正常细胞经过一些处理可以成为immortalized cell line。最简单
的,比如我们的PBMC用EBV感染一下,可以immortalize B cells。其他还有很多方法,
比如用chemical筛选等。immortalized cells不会senescense,可以无限繁殖,但是仍
保留部分正常细胞的性状。具体是那些,跟正常细胞区别有多大,要看具体的细胞系,
和处理方法。这样的细胞系... 阅读全帖
j****x
发帖数: 1704
34
1. 方案2显然更合理,因为你没有设置标定转染效率的内参(如果我没有理解错的话)
,那么先6-well再seed到24well plate实际上是一种标准的近似normalization的处理。
2. Lipo转染过程中毒性物质的效应会被放大,也就是为什么连抗生素都不推荐加。既
然已经stable transfected,自然一般就没那么容易丢,别说就是转染这几个小时,一
个星期不加问题也不大。我手头的一个细胞系,平时传代的时候加G418,真正到了做实
验的时候,都是提前把G418撤掉,免得对assay有不良影响。
g**********t
发帖数: 475
35
来自主题: Biology版 - 学生物的你伤不起啊zz
搞bioinformatics的确稍微轻松一点,至少不用卡着点做实验。想写程序的时候写一写
,不想弄了就买杯咖啡看看paper查查邮件,反正程序也不会像细胞一样因为没有传代
而死翘翘。
R******d
发帖数: 1436
36
来自主题: Biology版 - natural selection on epigenetics
有没有可能自然选择作用到epigenetics上来?
epigenetics本是可遗传的意思,那么有理由假设对这个特性可能有自然选择。
但是,epigenetics的信息在传代中会被抹去,并在zygote中重新建立。那么直接对
epigenetics的选择似乎不会存在?
有没有可能是因为mutation的差异,所以有epigenetics的差异。对epigenetics的选择
其实是对mutation的选择?
多谢了。
i*********0
发帖数: 915
37
来自主题: Biology版 - 如何immortalize MEFs?
用shARF可以。
或者3t3, senescence以后,3天换medium一次,等到clonal expansion以后,在传代
l******g
发帖数: 1623
38
这东西早就有了, 自动换液, 传代, plate assay plates, 收集培养液, 纯化特定蛋白
, 测蛋白浓度, 都是在机器里面完成. 可以去TAP biosystem看看, 大大小小的还有选
择. 公司里面早就用了; 学校里面估计比较难推广, 用机器肯定比雇人要贵.
q****2
发帖数: 208
39
最近看了一些文章, 感觉大部分似乎认为10A不表达ER,可是也少在文章里面说检测到
了表达? 是不是因为不停的传代,久了之后某些就开始表达了? 有没有朋友有做过这
个的?
c*t
发帖数: 1063
40
新手请教,看到有个问题原文是这样:
What are potential problems, which can arise as a result of repetitive
replating of immortalized cells and how to deal with them?
请教大家,谢谢了!
o*****l
发帖数: 172
41
来自主题: Biology版 - anyone used HL-1 cell line
好像确实在高档杂志上很少见人用这种细胞系
不过在cardiovascular diseases领域比如什么ischemia reperfusion injury,
arrthymia等方向还是有些实验室在用的吧。
这个细胞系好像没有卖的把,然后培养液比较贵,伺候起来又麻烦点,感觉好像就算千
辛万苦作出实验来,reviewer们也不会给很多credit,因为虽说好像这是现在唯一的可
以传代的cardiomyocytes cell line但是有不少人认为这个不是真正的cardiomyocytes
cell line
r*****s
发帖数: 95
42
传代次数太多,细胞停止分裂了吧
f**u
发帖数: 346
43
来自主题: Biology版 - 见到了传说中的牛人
不是很理解你为什么会像在yeast里面重复这个试验。
Lenski是从1980年代末期开始的传代,每天一传,风雨无阻。
这种long term lab evolution最近似乎热起来了,我知道有用果蝇做的,结果挺有意
思。
果蝇跟细菌最大的不同是他是二倍体有性生殖,这个对进化的影响太大了。
所以用果蝇在做一次又很大意义。我觉得你如果用yeast再做一遍,意义恐怕有限。
当然如果坚持五年,一片Nature文章估计还是肯定的。
还有我觉得这样的实验很可能有人在搞了。

this
D*a
发帖数: 6830
44
来自主题: Biology版 - 问个关于老鼠遗传背景的问题
同意前面的但是对最后一段不赞同。
如果回交造成了penetrance的改变,最有可能的是这个background的位点对此基因作用
有很大的影响,而不是因为交过几代之后老鼠适应了Tg 蛋白质。
Tg老鼠回交可以适应这种说法,如果真能实验证明了,拉马克学说基本上也就是被证实
了。而且Tg老鼠改变penetrance直到减小到没有如果是因为传代次数而不是因为
遗传背景,哭的应该是Jax了吧。

see
phenotype
of
O******e
发帖数: 4845
45
来自主题: Biology版 - 问个关于老鼠遗传背景的问题
我觉得他想表达的不是适应,而是在传代的过程中此转基因的表达可能会被改变。这个
虽然是小概率事件,但毕竟是可能发生的。
b**********8
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来自主题: Biology版 - 请教关于肿瘤研究的学术问题
对这个领域不是太了解,请问有没有稳定传代培养的stroma细胞株?特别是人肝脏特异
的,

stroma
E*****s
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不是lentivirus,但也不是transient,只是转染48小时后,细胞重新稀释传代,换含
有puromycin的培养基筛选。
现在真是头痛阿,之前用试过三种siRNA,也是没用,真是郁闷。
s******y
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来自主题: Biology版 - 日本福岛发现畸形 蝴蝶
爆发核危机的日本福岛县蝴蝶出现严重基因突变,而且突变已经积累和传代。
昆虫类由于繁殖快而且对环境毒素敏感,是测量环境污染的重要指标之一。
其他比较大型动物的影响则需要更多时间才能看出来,科学家们目前对此仍
无结论。
http://blogs.discovermagazine.com/80beats/2012/08/15/mutant-but
Japanese authorities may have cleared out the human population around the
ruined Fukushima Daiichi nuclear power plant, but the native wildlife is
still there. A month after the accident, scientists who study the pale grass
blue butterfly collected 144 near the plant, and found that they had begun
to show mutations like dented... 阅读全帖
l****j
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MEF cell,第一代长的很好,
第二代就长的乱七八糟了,形态都不太规则,有大有小,还有多核的,有的都不像
fibroblast了
我完全照着protocol做的,medium里都加mercaptoethanol了
Current Protocols in Molecular Biology (2005) 28.1.1-28.1.8
UNIT 28.1
Preparation, Culture, and Immortalization of Mouse Embryonic Fibroblasts
有人有类似情况吗?
MEF cell怎么能长得好?
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