n********k
发帖数: 2818 | 1 Controls are important but more important is to know your systems/stuff well
...Otherwise it could still be problematic even with seemingly right
controls...
况。 |
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J******9
发帖数: 736 | 2 谢谢大家，我可能没说清楚，用该抗体的blocking peptide来处理组织片，作为阴性对
照。 |
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h********n
发帖数: 4079 | 3 blocking peptide, which can bind with the antibody. You can add the
peptide with the antibody to stain a positive sample. If the signal
disappears, it means the antibody has good specificity. My phd boss think
this is very important. |
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g*********5
发帖数: 2533 | 4 搭车问一下；
以前没有作过切片。这个有培训班吗？
准备做老鼠了，想学做些免疫组化的东西
谢谢。 |
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h******u
发帖数: 602 | 5 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM，直接用做免疫组化和
WESTERN。用几次后就扔掉。
现在想节约点，除了分装小体积，避免多次冻溶，是不是还可以加点proteinase
inhibitor？ 别的招呢？ |
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p****a
发帖数: 198 | 6 接了一篇老中的稿子
搜过，没有发现相关文献，感觉内容有点新意
但实验内容不多，动物造模处理，做几个western，免疫组化双染就完了，造模后都没
有验证模型的效果。
更主要的是
通篇，随便拎出一句话来都可能有语法或表达问题，a/an不分、第三人称单数加s乱用
、图3的结果描述的时候说成图4、图中没有scale bar，但在图表说明中说是多少多少
um、部分参考文献不完整。
感觉拒了有点可惜。
想听听大家的意见。
谢谢。 |
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b******n
发帖数: 4225 | 8 你突变体纯合子能被抗体检测，是western还是免疫组化？
突变体纯合子的mRNA可以做primer extension，看看是不是有alternative start
codon
想降低qPCR本底水平，引物可以设计一端priming在exon1，另外一端在别的exon或者5'
-UTR |
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b******n
发帖数: 4225 | 9 如果logic make sense，results are solid to support the conclusion
western多还是少不是一个问题
反而那种看起来花花绿绿，很多免疫组化的结果我看起来有点不太踏实
当然，如果western是伪造的是另外一回事 |
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c***y
发帖数: 615 | 10 切的厚度是5um, xylene, enthanol之后, 探针杂交;结果发现很多paraffin还留在片子
上,可能的原因有哪些?多谢了 |
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t**********y
发帖数: 374 | 12 确实没换. 不过上星期还好好的.
看大家都是re-use xylene的, 我是新人, 不知道什么时候该换一下... |
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c***y
发帖数: 615 | 14 statlab 315+g adhesion corner slide |
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c***y
发帖数: 615 | 17 探针是biotin标记的antisense RNA. 想知道paraffin block sectioning 或
cryosectioning,哪一个会得到更好的结果?技术方面哪个方便些?还有就是endogenous
biotin的背景怎样解决？
第一次做，恳请有经验的能指导一下。多谢了。 |
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t******k
发帖数: 599 | 18 马克一下，想做类似的实验，听说背景会很高。。。。。 |
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c***y
发帖数: 615 | 19 这就是我目前的问题所在.希望有经验的能指点一下 |
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a*****2
发帖数: 175 | 20 paraffin- or cryo- 都做过,cryo的信号好一些,最好切完一个星期以内作.
endogenous的biotin有kit可以inhibit,好像是vectorlab.不过,我用的是DIG labell的
probe.
降低背景,还需要作acetylation.这个步骤也可以替换成0.2NHCL处理10min.
最后最后,target gene的表达量是多少,如果太低,背景都会很高.
endogenous |
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m*******r
发帖数: 202 | 21 好的。谢谢您的提醒。
我用的抗原是一个新克隆鉴定的肿瘤高表达蛋白，功能实验证明它的表达可以显著地促
进肿瘤的生长。免疫组化和荧光标记实验显示它定位在细胞膜上，并且有胞外区。是不
是受体我们还没有实验证明。是否redundency我们也不清楚。我们希望制备的单克隆抗
体是抑制阻断这个肿瘤高表达蛋白的功能的，以此达到抑制肿瘤生长的目的。
谢谢!!!
activation |
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s*********l
发帖数: 204 | 23 她做过老鼠和果蝇，还有血液的处理。会基本分子生物学，免疫组化，PCR,cell
culture. |
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b*******0
发帖数: 48 | 24 最近在做小鼠大脑切片的immunohistochemistry, 大脑是先心脏灌注PFA, 1:1 PFA :
sucrose 过夜，30% sucrose 3h.
OCT embedding. 然后cryostat 切片10um. 想染的蛋白主要是在cytoplasm。 先室温干
燥，然后extraction buffer 10 min, block 30min, Primary Ab 4oC ON. wash.
Secondary Ab . 试过Cy5 anti-rabbit, Alexa fluor 350 anti-rabbit. 好像都没有
荧光。
请问是Primary ab 浓度太低了，还是extraction buffer 不够啊。
谢谢。 |
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w******y
发帖数: 2504 | 25 片子为什么不放在24孔板里染呢？我没有试过这个EXTRACTION BUFFER，不知道是干嘛
用的。一抗一般就是1:1000-- 1:5000吧。实在不行弄个阳性对照的看看。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 26 啥是extraction buffer。
看着觉着是permeablization不够。 |
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b*******0
发帖数: 48 | 27
做的是fixed tissue,不是paraffin-embeded . crystat 切，直接用载玻片贴上的。然
后在humidified chamber里染。 |
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b*******0
发帖数: 48 | 28
其实就是permeabiztion 用的。0.5% triton-X ,后来试了直接加在block buffer里。
incubate 1h.还是不行。 |
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w******y
发帖数: 2504 | 29 我以前一直这么切，然后把脑片子漂在PBS里，然后再染的，没有问题。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 30 他就切了10um，也不一定要做floating staining。
你试试permeabilization时间长一点，包括block的时间也长一点。
或者你可以把你的片子用ice-cold methanol蘸一下看有没有改善。
还有就是你找个positive control确定你的抗体好使，且在脑子上好使。 |
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g*****n
发帖数: 250 | 31 1。不要干燥。組织已经固定，没有必要干燥。
2。Retrieve antigen. 在Citrate buffer里煮几分钟，或其它方法。 |
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u***e
发帖数: 71 | 32 帮朋友问 ，不是这个领域的。 他们主要测了某些蛋白在人肾癌组织中的表达 做了PCR
western 免疫组化 还做了点与预后的分析（生存分析）
请大家推荐个合适的期刊，他对影响因子没有要求，就是要审稿快
谢谢诸位 |
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t*****2
发帖数: 213 | 33 莫名其妙，是不是无理数能解决什么人类的重大问题吗？
who cares？？？你逻辑再强根人没关系，你给生物编辑写数学方程？你怎么不给数学
编辑发几个免疫组化的图啊？ |
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h******u
发帖数: 602 | 34 原先实验室做了一单抗。偶前一阶段发现此抗体在免疫组化中特别好用，可以辅助诊断
某型白血病。
现在想把荧光物连到此单克隆抗体上用于ＦＬＯＷ ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ。虽然连接应
该不会太难，但对此方向一窍不通，平时也没时间，有没有公司专门给做这个的？谢谢
了！包子谢。。。 |
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e******8
发帖数: 319 | 35 会真核原核蛋白表达系统，并会特有的三个月建立单克隆细胞株技术，会大部分化学合
成标记技术用于分子成像，免疫组化，治疗和诊断。生物技能扎实，会建各种原位模型
。 |
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g****d
发帖数: 238 | 36 如果新基因的话你知道他功能吗？知道的话就大概知道是否膜蛋白了，不知道你只能比
对看同源基因看是否是膜蛋白了什么功能，要确定是否膜蛋白可以用荧光定位看具体位
置，是否具有抗原性可以预测的辅助实验证明纯化蛋白动物实验分离抗体测elisa，未
知基因可以外包公司设计制备抗体他们会选用部分序列制备抗体你也用此抗体定位基因
是否表达膜蛋白可以体内也可以免疫组化方法，希望这些对你有帮助 |
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发帖数: 1 | 39 现在发跑胶图都随便裁剪，而且不用跑到一个胶上。完全看不出来到底是真是假。大小
期刊都这样。跟免疫组化用40X镜头截一小点一样，说是小肠组织搞不好是他们实验室
那块平板上长得细菌而已。 |
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c******h
发帖数: 355 | 40 国内表妹刚检查出来，做完手术在化疗，才30多岁，孩子还小，家里人很着急。让我们
帮忙问一下美国的医生有什么好方法治疗。
还有我们有什么能帮忙的吗？比如买OTC的药，或者Dietary supplements.
以下附的是国内的诊断书.
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临床诊断：卵巢子宫内膜异位囊肿
送检材料：大网膜集全子宫组织
检查所见：巨检（右附件）：灰红色胶冻样物一堆，大小16 x 8 x 4 cm，冰余（右附件）：灰红色胶冻样物一堆，大小2 x 1.5 x 0.5 cm;冰送（网膜）：灰红色胶冻样物一堆，大小15 x 8 x 5cm; 冰余（网膜）：灰红色胶冻样物一堆，大小2 x 2 x0。3 cm;送检大网膜：灰黄灰褐色组织一堆，大小18 x15 x 5cm. 其内见大量胶冻样；切除子宫一个，大小10 x 6 x 4cm, 子宫浆膜弥漫分布灰褐色物，颈管长4cm,直径3.5cm,内膜厚0.2cm,宫颈轻度糜烂。（蜡块18
个）
免疫组化染色：CK7(-),CK |
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a*********d
发帖数: 2763 | 41 yeah, 周末了周末了，来灌水。
六区，是甲状腺手术中用的颈部分区，舌骨，颈动脉鞘和无名动脉围成的区域，是分化
型甲状腺癌最容易转移的地方，所以一般都会进行六区淋巴结清除和病理。这个要请外
科的同学们来说了，我就不班门弄斧了。
分化型甲状腺癌的治疗，是根据肿瘤大小，局部转移的程度，病理类型，还有病人的年
龄和家族史来决定的，跟免疫组化的关系不大。
拿这个例子来说，肿瘤大于1cm,是符合术后I131治疗的，术后应该服用高于常剂量的甲
状腺素，抑制TSH，然后follow thyroidglobulin和颈部超声,而不是follow
calcitonin，我觉得这点上我很困惑。如果不是medullary carcinoma，跟本不用查
calcitonin的。是不是有什么特别的原因？
不过呢，说来说去还是这句话，病人我们没有见过，网上传来传去的消息容易出差错，
而且会引起不必要的误解和医患关系紧张。如果真的有疑问不妨去其他医院再看看。你
在上海的话（宝山，新华，所以我assume），瑞金医院的内分泌科是很有名的，可以去
挂个专家门诊咨询一下。
good luck |
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L*****r
发帖数: 722 | 42 那谁谁说了，漏网的往往是共党的大鱼！听口音，象咱东北银？
关于咱表姐夫的术后病理问题，我不是学病理的，只好提些问题请教专家了：
1。光镜下区别髓样癌和其他甲状腺癌，可靠性多大？
2。咱表姐夫的免疫组化：癌细胞CK19+，Galectin3+, HMBE1+, CerbB2+,P53+, Ki67+2
%. 咋分析？能不能除外髓样癌？整两段书：
Immunohistochemical markers of thyroid tumors can be divided into two major
categories: those related to the cell types and those related to the type of
pathology. The most important markers in the first category are
thyroglobulin and TTF-1 for follicular cells, and calcitonin, CEA, and
chromogranin for C cells. Markers in th |
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c******s
发帖数: 48 | 43 我爸爸被诊断为gastric MALT lymphoma，并进行了手术切除，现在在术后放疗。应为
我爸爸有心脏病，不能进行化疗。
当时我们对此病一无所知，手术后才知道应该先检查幽门螺旋杆菌，抗生素根治后再手
术。现在医生说没有办法再检查幽门螺旋杆菌了，应该手术都切掉了。但是我们还是担
心有细菌残留，细菌会不会在手术中进入血液？我们想放疗之后进行抗生素治疗，应该
用普通疗法还是根治疗法？
还有就是手术后半个月多，我爸爸甲状腺出现柔软，无痛的肿块，CT检查为有两个有血
液供给的淋巴结。因为现在在专门的放疗科，人家也不管甲状腺的问题。
请问会不会是MALT Lymphoma转移到Thyroid? 我看网上说这种情况很少。那么会不会是
原发Thyroid Lymphoma? 可是是手术后才出现的。那会不会是gastric MALT lymphoma
已转化为large B cell lymphoma? 照理说手术切除的胃，医院应该好好化验的，结果
他们只做了免疫组化，根本没有检验是否有大B细胞，也没有明确说我爸爸的stage.
我们该怎么办啊？请班上的同胞们帮帮忙。 |
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p*****r
发帖数: 334 | 44 朋友的亲戚，女，32岁，发现是脑胶质细胞瘤，以下是病理诊断：
（小脑蚓部）多坨，工3.5*3*1cm大，镜下见分化好的胶质细胞增生，多灶出血，未见
明显血管瘤成分，经合免疫组化结果：GFAP(++),Syn(+）,CD34少数血管（+），Ki-67
（-），NSE（+），F8（-）,MBP(+),NF(+),CD31(-),血管网织细胞瘤依据不足，结合临
床手术所见较符合分化好的胶质细胞瘤，伴囊性变（WHO II级）。
现在是手术做了，但是医院让上化疗，家属不同意，让我问问美国有什么更先进的手段
。让我去问问美国的医生。如果可以的话，可以送到美国来。
我本人不是做神经放面的，我是不认识一个神经科的医生。所以在这发个贴子问问。
1，有必要做化疗不？
2，还有什么好的办法?
3, 可能送到没国来不？
他们总觉得这边什么都好，我只要随便找个同事聊聊就行了，我们主要是做research的
，对这些方面还不如国内的。唉，不知道怎么向他解释。 |
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s********o
发帖数: 3319 | 45 一般病理的标本会保留几周才扔掉。那个拿来做成病理切片的部分更是保留很多年。你
可以跟你的大夫说你想知道病原体是不是阳性。病理的人会帮你做免疫组化染色。一下
子就能知道答案。 |
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f**********0
发帖数: 142 | 46 40 years female
病理诊断：浸润性导管癌
病理会诊意见：
（右乳）浸润性导管癌，II级。脉管内见癌栓。
乳头未见癌侵犯。淋巴结（0/6）未见癌转移。
免疫组化 （hi12-15669): ER+ (80% 中等)，PR+（80%，中等）
Her2/neu (1+),E-cadherin(+),Ki-67(约5%)；脉管内皮CD34(+)
D2-40(+)
多谢！ 最终还是挺国内医生的， 不过想听不同人的意见。 |
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a******d
发帖数: 1 | 47 来自主题: Pharmaceutical版 - 请教工作定位 实在不知该发到哪个版，希望圈内人给些指点
我属于behavioral neuroscience program, 做过些成瘾以及激素的动物模型研究，但
生理研究都比较浅，就是些最基本的免疫组化染色方法，勉强说和行为药理有点关系。
我现在想硕士毕业，以前只是有人提到听说可以去制药公司，不知道制药公司是否真的
需要这样的人？ 刚才到一些生物类的求职网站看了看，似乎没有什么相关职位，该到
哪里去找到这方面的消息呢？请有类似背景的人多给些建议。
多谢 |
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e******8
发帖数: 319 | 48 会真核原核蛋白表达系统，并会特有的三个月建立单克隆细胞株技术，会大部分化学合
成标记技术用于分子成像，免疫组化，治疗和诊断。生物技能扎实，会建各种原位模型
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e******8
发帖数: 319 | 49 会真核原核蛋白表达系统，并会特有的三个月建立单克隆细胞株技术，会大部分化学合
成标记技术用于分子成像，免疫组化，治疗和诊断。生物技能扎实，会建各种原位模型
。 |
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C*****D
发帖数: 1299 | 50 教授，真服you。p53 免疫组化阳性是最辩不清的。
我觉得教授应主攻精神科或心理科，谁雇了你，保证财源滚滚。因为你能把所有你见的
人，都鼓捣成病人。 |
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