o******u
发帖数: 117 | 1 现在实验有个问题请教大家：某受体已经知道在所有哺乳动物都表达，现在我比较感兴
趣它在人和老鼠之间表达，或者是对其内源配体的结合活性上有无差异，该如何设计实
验来证明？我自己能想到的是用传统的Western 或FACS来半定量，但问题是如何区分抗
体结合活性的差异？求教大家，谢谢了。 |
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S*******e
发帖数: 94 | 2 真要是你说的做出来的，即什么都是植物内源的，那还有什么不敢吃的？
真要是这么干，那太有良心了。比Monsanto做得干净多了。 |
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j*******n
发帖数: 62 | 3 做的这几个蛋白没有KO mice啊，这几个蛋白都是重组表达和内源纯化的人的血清中的
蛋白，和小鼠同源蛋白序列identity 在80%左右，为什么大鼠和仓鼠就会好一些呢？序
列同源性也不低啊~
integrin也有不少鼠单抗的，这是怎么做出来的呢？
多谢多谢！
generate |
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f*****f
发帖数: 195 | 4 我希望将一个內源蛋白加个tag。
1）假如knockin的话，直接在genomic sequence加tag本身会不会导致alternative
splicing?表达就全乱了。小tag也许没问题，大tag如gfp就基本不行吧。
2）那一般knockin是把外源promoter+cDNA+tag一起knock-in么？这样的话蛋白表达量
可能跟内源有可能差很远？
3）针对2），knockin 到染色体具体哪个区域有讲究么？转基因就随机插入了。
谢谢。 |
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x*********n
发帖数: 43 | 5 终于有人理我了。我检测的是植物的内源蛋白啊，拟南芥的 |
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S*********s
发帖数: 304 | 6 武汉大学生命科学学院宋保亮实验室，主要从事脂质代谢调控机制和代谢性疾病发生机
理的研究。揭示了小肠胆固醇吸收和内源胆固醇合成调控的分子机制。已在Nature
Medicine、Cell Metabolism发表5篇研究论文，因科研需要，拟招聘副教授、Co-PI。
实验室情况介绍请参照：
http://www.bio.whu.edu.cn/News_reads.asp?cid=174&id=2574
应聘要求：
1. 拥有博士学位和2年以上博士后研究经历；
2. 在国际知名刊物上发表过论文；
3. 能独立申请国家科研项目；
4. 有良好的英文写作能力;
5. 有责任心，有团队合作精神；
6. 有海外学习/工作经验；
7. 应符合武汉大学引进副教授和教授的条件。
提供材料：
1. 详细个人简历；
2. 学历、学位证书及任职证明的复印件或扫描件；
3. 近五年发表的论文；
4. 主持和主要参与科研项目清单；
5. 受聘后的工作目标及设想。
岗位待遇：
提供优越的科研条件和稳定的支持，薪酬待遇在武汉大学管理办法的基础之上协商确定。
申请方式：
邮件发送... 阅读全帖 |
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S*********s
发帖数: 304 | 7 主要从事脂质代谢调控机制和代谢性疾病发生机理的研究。揭示了小肠胆固醇吸收和内
源胆固醇合成调控的分子机制。已在Nature Medicine、Cell Metabolism发表5篇研究
论文
参见JobMarket or 扫描二维码即可。
http://www.mitbbs.com/article_t/JobMarket/31212347.html
主要研究领域及兴趣：
主要从事与心脑血管疾病发生密切相关的胆固醇代谢平衡调控的研究。提出并证明
了小肠细胞对饮食胆固醇吸收的分子模型，发现了该途径中的多个蛋白因子；深入探索
了内源胆固醇合成的负反馈调控机制—HMGCR蛋白的受控降解，揭示了肝脏脂质合成与
棕色脂肪能量代谢的联系；构建了基于胆固醇合成负反馈调控途径的筛选体系，并获得
了能同时降低胆固醇和甘油三酯的活性化合物白桦酯醇。这些原创性成果不仅丰富了胆
固醇代谢平衡调控的基础理论，并且对研发新型的降脂药物具有重要意义。
现担任基金委“基于小分子探针的糖脂代谢调控机理研究”集成项目首席科学家，
主持基金委重点项目等10余项。先后获得国家杰出青年科学基金、上海市优秀学科带头
人、首届陈嘉庚... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 8 看来真是个演说的好手！能把生物说的这么激动人心！恕我愚昧，有几个地方不懂。（
1）如果要跟踪protein-protein interation，难道不是用基因编辑的方法在内源蛋白
上加个标记更可行？（2）即使用某种方法把抗体转到细胞质，不是还需要加二抗和底
物吗？（3）我确实有方法将小蛋白转进细胞质，抗体可能太大了（150kd?)，看来成不
了首富了。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 10 1. 内源蛋白表达量不够的话，那就尝试overexpress全长mRNA。
2. 根据理论上可能多出来的这30个aa合成多肽制备抗体。 |
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L****T
发帖数: 169 | 11 你说的有道理，可能只knockin了一个allete，那最多一半的内源蛋白可以被tag。如果
再加上克隆不纯，就更加麻烦了。
可能楼主knockin不光是为了IF，还可以做ChIP、做IP，可以玩很多花样啊。 |
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t*******w
发帖数: 107 | 14 Vit A,脂溶性的，应该 可以 直接从妈妈那里 穿过来 吧 |
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D***a
发帖数: 516 | 15 激光照两秒钟亮度就下降好多。除非那种两个细胞在一张照片上的，比如一个细胞过表
达了某蛋白，另外一个没转进去，然后看另一个内源蛋白的情况。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 17
只能说现代的那些鸡肉没有外源的激素，但是它们的内源激素是否偏高就不好说了。
这个还不完全是营养上或者养殖方式上的问题。因为不同时代的养殖品种放在
同一个环境里来喂养，现代的鸡种的生长速度是早期鸡种的四倍。 |
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A****t
发帖数: 61 | 18 不明白鸟类的激素会对人体有什么影响，而且大多数内源的生长激素， IFG一类的都是
蛋白质，煮煮都变性了，不变性的吃下去也被胃酸灭了。。我觉得这个逻辑就跟国内说
草莓用了激素催大吃了后会引起性早熟blabla一样。虽说到底植物类的激素对人体到底
有什么作用可能不是特别清楚，但是绝非简单到能让草莓变大就会让人变大。
我觉得这都是典型的中医逻辑，随便类比
关于牛类的生长激素，我没做过研究，但是可以问下到底在美国USDA允许给牛用什么激
素？我知道乳牛可以使用重组的牛生长素，但是我猜测这也是跟人类GH一类的东西，吃
下去肯定就被消化了，否则侏儒症也不用天天打针了。我们吃的左右肉类都不允许直接
喂性激素类的类固醇吧。
最后，关于红肉致癌的一个机制hypothesis好像是血红蛋白／肌红蛋白类的铁跟饱和脂
肪酸吧。 |
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A****t
发帖数: 61 | 19 你这个太老了吧，我看到是个UN的文章了，但应该是谈历史问题。比如说DES曾经被认
为可以安胎而大量给孕妇用，后来发现致癌。
1979 FDA bans all use of DES in cattle production.
不过很可能现在还允许在畜牧养殖业里面用一些合成激素，但应该残留量低于内源激素
的方差水平了。
否则比如说胎儿对很多合成性激素非常敏感，要是美国敢随便在超市卖这种肉给孕妇的
话，我觉得太离谱了点 |
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f*****f
发帖数: 195 | 20 细胞本身蛋白就是高度动态的，不同固定，permeabilization方法对蛋白定位本身影响
，以及目标抗原暴露都会有区别，而且IF中，抗体不一定能识别细胞中所有的蛋白pool。
很多膜相关蛋白定位会受到methanol破坏，中心体蛋白结构很致密，methanol
fixation 往往信噪比好些，但不可一概而论。
具体蛋白定位的确定包括内源的抗体，不同tag固定，荧光tag live状态下都可以参考。 |
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g*****n
发帖数: 241 | 21 谢谢回复。我的蛋白分子量175KDa，所以可以排除轻重链。另外我的蛋白是在null
mutant的背景里在另一条染色体上插入一个FLAG tagged gene，所以应该不是和内源蛋
白行程二聚体。
请问还有其他什么可能吗？谢谢 |
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j******i
发帖数: 939 | 22 我也是纳闷呢 fig3c和fig4技术上没有差别 但是fig4才是关键的实验 可能他自己也清
楚1.0版本敲除内源基因效率比较低 需要特别优化
他说2.0版一两个月就能出来 但是这么多人重复不出来 他的第二篇文章应该没那么容
易过review的吧 |
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发帖数: 1 | 23 韩春雨NgAgo基因编辑技术可重复性引质疑
该领域专家认为“不能重复不意味着是假的”
科学网6日讯 近日，有关NgAgo基因编辑技术首篇论文实验的可重复性受到相关研究者
质疑，该论文作者、河北科技大学副教授韩春雨在各类报告上回应这需要“高超的实验
技巧”。对此，《中国科学报》记者在采访该领域专家时了解到，所谓“高超的实验技
巧”实为实验“标准化”，目前多个实验室的重复实验结果即将出炉。
最近一个月，许多研究者在网络平台上声称无法重复韩春雨发表论文中的实验。科学网
上，多名博主转发研究者的评论，参与了对此事的关注。
截至发稿前，韩春雨本人并未就此事细节向媒体进行回应。不过，据《中国科学报》记
者了解，世界范围内有几家实验室正在对NgAgo-gDNA基因编辑技术的几项实验进行重复
，并且已有从未与韩春雨联系过的研究者独立完成了重复实验，即将在学术刊物上发表
论文公布结果。
“韩春雨所说的‘高超的实验技巧’并不准确。”国内一名从事基因技术研究的院士告
诉《中国科学报》记者。他推测，无法重复的原因可能是实验过程的“标准化”出了问
题，“在细胞生物学的历史上，不能重复的实验时有发生，甚至有时候只... 阅读全帖 |
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g****g
发帖数: 74 | 24 但凡有75%数据是真的，那帮做gene engineering人早就能重复出来，即便他的效率比
cas9低很多
目前的问题是根本就没有人能重复出来他的结果，请不要提前面 的那几张图，没人对
前面的几张图感兴趣（14年的nature早发了），大家最感兴趣耶是这篇文章的点睛之笔
就是那种切内源基因组的图。就目前的情况来说，基本上够呛了。
韩老师应该对此有责任性的回复了，与人于己都好。如果是真有技术方面的trick，现
在也应该公布其详细的protocol，不应该让别人继续做trouble shooting 和struggle。
在这方面，他应该向张峰学习。 |
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发帖数: 1 | 25 我来说说ngAgo的局限：
1.ngAGO是否真如文章所述，不和ssRNA结合。我觉得需要通过通过高通量测序进行验证
，电泳胶的灵敏度太低，看不到不代表没有。
2.ngAgo是否和内源ssDNA或ssRNA结合，如果它的结构和TtAgo类似（包含PIWI，PDZ以
及MID domain），那么这些保守的domain也存在于与ngAgo同源的argonautes（Ago2）
中，需要利用灵敏度比较高的手段才能说明这个问题，保不齐ngAgo会对PIWI或RNAi通
路有影响，5‘p-ssDNA以及5’p-ssRNA在细胞中存在，尤其是在germ cell的分化过程
中以及很多种类的癌细胞中，如果ngAgo和它们结合的话，这将大大限制其在此类细胞
中的应用。
3. ssDNA loading 的问题，目前对于ssDNA load到Argonaute形成DNP的机制尚不清楚
，在细胞内ssDNA load到Argonaute是不是需要其他蛋白质（比如伴侣蛋白，热激蛋白
等）的辅助，甚至Argonaute折叠成functional protein是否需要ssDNA的帮助，这些都
不是很清楚。
... 阅读全帖 |
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B*******c
发帖数: 5056 | 26 2016年9月15日，南京大学的周国华研究员、赵庆顺教授和朱敏生教授在《Genome
Biology》杂志上发表了一项重要的研究，一种新DNA编辑工具：结构引导内切酶SGN（
structure-guided endonuclease）。SGN工具与现有的DNA编辑工具不同，最强大之处
就是不受靶序列的限制，能特异性识别和捕获目标，来准确切割任何DNA序列。
而目前，其他DNA编辑技术，如最热门的CRISPR-Cas技术，争议最大的韩春雨发现的
NgAgo技术，还有ZFN、TALEN等技术，都是通过序列识别来实现靶向切割的，会受到序
列偏好的限制。
2016年5月，河北科技大学的韩春雨教授在《Nature Biotechnology》杂志上发布了一
种可以替代CRISPR-Cas的基因组编辑技术：NgAgo技术。因为这样一篇突破性的研究论
文，韩春雨教授从一个学术圈的“泛泛之辈”一跃成为“诺贝尔奖级别的科学家”。然
而，由于实验重复性的问题，很多国内外学者发现实验无法重复，韩春雨的NgAgo技术
，被学术界和媒体引入了强烈的争议风波。
可是，目前SGN工具的出现，让争议不断的NgAgo... 阅读全帖 |
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f****t
发帖数: 22 | 27 中青在线北京10月10日电（中国青年报·中青在线记者 邱晨辉 叶雨婷）10月10日晚
，12位学者站了出来，决定实名公开他们“重复”韩春雨实验方法的结果：“阴性的”
、“不工作”等等。这样结论的通俗表达即是，他们没能“重复”出韩春雨的实验，其
实验方法“让人怀疑”。
这并非第一次有人质疑韩春雨的实验方法，但愿意实名站出来，并接受公共媒体的
采访，却十分罕见。今年5月初，河北科技大学副教授韩春雨在Nature Biotechnology(
《自然·生物技术》)发了一篇论文声称发现了基因编辑的新方法“NgAgo”，后有人质
疑这个所谓的新方法，“实验没法重复”。
今天一早，科技日报在头版刊发报道《韩春雨就“重复实验失败”答科技日报记者
问》，其中提到，“韩春雨（说）：他们（指实验重复失败的科学家，记者注）要是愿
意实名出来，我们就让重复实验成功的人实名出来。”
北京大学生命科学学院研究员魏文胜是12位学者之一，对韩春雨今天的说法，他说
，包括他在内的不少学者认为，“不能再拖了，必须要发声，要让国际科学界看到我们
这个领域（即基因编辑）中国科学家的态度。”
魏... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 28 总结就是无论in vitro还是in vivo，无论质粒还是内源基因，没一个结果能重复出来
。怪不得这么多人实名出来说，这结果比我想象的还糟糕。我还以为他做出体外才编的
体内，这特么从头到尾都是脑补的啊。 |
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发帖数: 1 | 29 如果内源基因没有突变，而只是敲除几个或导入外源基因，而导入的外源基因已经在人
类食物链中的话，我不认为有多大风险。如果引入的基因不在人类食物链，需要严格的
动物实验确认转入的产物的安全性。 |
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f*****e
发帖数: 34 | 30 转自 知乎：
（如何看待武汉大学「千人」专家举报同校「长江学者」李红良涉嫌学术造假，以及当
事人回应不存在造假？）
作者：匿名用户
来源：知乎
Li的Nat. Med文章Biochemistry问题很多，尤其是Western Blot和IP data，不是正常
实验做法。以li最新的2018年Nat Med paper关于CYLD为例: Fig2中外源过表达FLAG-
TRIM47和HA-CYLD验证TRIM47和CYLD相互作用，按照paper中method里面的抗体，FLAG、
HA、Myc和His抗体都是MBL公司mouse来源的抗体，IP完后抗体本身重链和轻链哪去了？
？？这样的例子在li的Nature子刊paper中一大堆。
CYLD和TRIM47内源相互作用：CYLD抗体是CST #8462 或ab153698(abcam)，rabbit抗体
。而TRIM47是ab155549抗体(abcam), rabbit抗体。用CYLD进行IP，IP完抗体重链、轻
链哪去了？？？ |
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z*******o
发帖数: 1794 | 31 PMI酶本身就在自然界大量存在，从细菌到动物都有，用的又是内源promoter，安全上
有什么问题？如果剂量上有担忧，技术上可以通过构建flox序列和携带重组酶植株多代
杂交去除，或者CRISPR敲除。种痘这个东西经历了那么多年可以慢慢改进，转基因作物
就不能慢慢改进，非得一步到位？我支持严格和科学管理，但对于崔永元那种逢转基因
必反的态度相当厌恶。很多时候不是政治问题，是农民的经济问题，东北种的非转基因
大豆怎能拼过转基因的进口大豆？中国农民几千年来只认一样东西：如何在少投入的前
提下更多的生产能够果腹美味和有经济效益的粮食。这个不用政客和公知瞎吵吵，对于
是否种植转基因作物农民自然会有选择，以后作物是转基因的天下还是非转基因的天下
市场也会自己决定。我只是希望学生物的可以用自己学的知识理性分析转基因这个客观
存在，不要人云亦云。 |
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o******e
发帖数: 1761 | 32
疾病分类表象是相同的，内源肯定不同。
中医一向治不好肺结核，那玩艺是寄生细菌所致，由于技术限制，中医就只能调理了。
而人体是干不过这玩艺的。 所以是绝症。
但是西医的抗生素就能解决这个问题。 Okie, 那么中医就要帮忙善后调理。
这就是医学融合的过程。
但是西医滥用抗生素了。 来个感冒都用，只能越玩人越残。 得病越容易。
学药学理论的博士本身都承认越分越细到最后只能把自己绕进去。
中西医谁都不能包治百病也不能长生不老。 这是一开始就反复强调的。
我们医学就是原始阶段。 |
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a*****e
发帖数: 305 | 33 14.11.12 刘志杰老师总群讲药症-附子
http://www.zhongyi999.com.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=20481
(出处: 汉传中医师承论坛)
附子，味辛苦，性热有毒。入少阴、太阴病位。主滞证、饮证。
药症：主治风寒咳逆邪气，温中，金创，破癥坚积聚，血瘕，寒湿踒躄拘挛，膝痛不能
行走。（神农本草经）
附子这味药，是我们经方常用的药。在药物的寒热温凉归类上，属于热药，居于北方玄
武之地，因此真武汤里面，以它为主药，是热性药的代表。
北方属水，病则为寒饮结聚，要用热性药对治才行
附子，目前炮炙手段和工艺各异，导致其毒性含量不一，有的甚至是失去了毒性，失去
了疗效。在临床使用上，很难掌握，常常出现中毒现象，所以，很多医生都不敢使用。
这个药，我们建议使用没有炮炙过的生附子，避免了炮炙工艺不统一的问题。
另外，最关键一点就是，要使用四川江油的附子，而不要用陕西汉中等其它地方的附子。
汉中的附子，不容易掌握，很容易中毒。
江油附子药性淳厚，成人一付药10克起用，口舌以及周身微麻，疗效好。
而汉中附子要是用了10克，那个反应会很大，甚至有... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 34 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: toptip (土翁), 信区: Biology
标 题: 从整型医生到诺贝尔奖-山中伸弥的研究历程
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 17 00:04:30 2012, 美东)
引言
山中伸弥（Shinya Yamanaka）获得诺奖已经有几天了，虽然两年前在听完他的讲座后
我兴致很高地写了两篇文章，这些天我却没有多少动力再写一篇完整的文章来介绍他的
工作。
我一直对中国现在还盛行的规划性科研，应用导向型科研耿耿于怀。这些所谓的重大项
目在立项的当初对目标/前景写得宏大无比，之后却通常草草收场。如果那些重大项目
真的能实现立项当初的用意，那诺贝尔奖早就在中国遍地开花了。广大科研人员都觉得
这种运行模式是一个笑话，饶毅、施一公等大牛也重炮轰击，但是分钱游戏还在进行着
。而公众，包括相当一部分科研人员也并不了解科研的自身规律，总是一再地问做基础
研究有什么用。
Shinya Yamanaka的成功是典型的小实验室自由探索的成功。他的成功再一次提示，有
相当多的科学突破是不可预测的。如果中国有大批优质的小实验室得到稳... 阅读全帖 |
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s******d
发帖数: 795 | 35 摘要：农大召开了全国植物声学研究与应用进展学术研讨会，具体就是琢磨怎么给植物
听声音，让植物增产。说可以使杂交水稻增产5%，棉花增产12%。以后农田里是要放喇
叭了吗。。。。。
下面是《科技日报》的新闻全文
［科技日报］声波装置入农田 庄稼听声能增产
你可能听过奶牛听音乐能产更多奶的事，可是，你听过水稻、小麦、黄瓜、西红柿等作
物听到声波产量也能增高吗？而在一些试验田里，一些作物听到科学家设置好的一定分
贝的声波影响下，不仅能增产，而且能抗病和改善品质。
日前，在中国农业大学召开的全国植物声学研究与应用进展学术研讨会上，学者们
交流了各自不同的做法，并讨论了植物声频反应的生物机理。
科研人员说，发出声波的装置形状各异。有的像音箱，有的像喇叭。根据声波装置
的大小，一般放在田间一至几亩地的范围内。发出的声音有起伏，但比较单调，听起来
有些刺耳。每天放出声来，约有几个小时，研究人员通过仪器观察，监测它的音量不能
过大，也不能太小。
中国对植物声学运用已有千年历史。《梦溪笔谈》上就有“虞美人草闻乐而舞”。
中国农业大学教授侯天侦是在国内较早进行声控对植物研究的专家之一。他认为，“
草木知音”... 阅读全帖 |
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p**i
发帖数: 3525 | 36 类似，但内源的东西当然就健康保险，外源的容易上瘾或其他副作用。咱们的专家漂亮
的尔雅小妹妹别PA我。 |
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h*****3
发帖数: 86 | 37 下面是我早年焦虑的时候写的，不如说是早年我的焦虑写给我的，更贴切，也算原创，头两天才翻出来，贴在了我年后刚开的新浪
博客 http://blog.sina.com.cn/huozhe33 （开博原因是我冒火,忍不住尖酸一下别人）里。当收到阿米的大包子的时候，才想起来，我好久没有在这里帖过东西了，我不是守得住的人，所以经常要跑。我不是谦卑而是自卑的人，所以我又忍不住说，希望我这帖，为地版增加资源，而不是占用资源。---是为序
如果失去理解的能力，阅读的能力，写字的能力，记忆力。
所有的曾自以为有的天才，甚至现有的脑力劳动的资格，立刻幻灭为空的构想，所有想
要说的话，也只剩嘴唇的痉挛，颤动，发出的只是含混的声音，甚至张口无音。
于是，后天的心理性盲聋，就形成了。
于是，未来盲聋的结果---实际上还没有到来---如阴影照进现实：四围凡人无知的歧视
和讪笑，刺不拉叽的忽隐忽现于现实的天空，像被裸身塞进了装满粗糠的麻袋，无论多
么轻微的动作都能感觉到刺痛。
于是，恐慌如心脏内源的毒药，随每一次泵压，渐渐逼近精神的中枢，而这些毒，现在
正由中枢排解，凌乱的落在了纸面。
其实，如果忠于解剖学，所有的... 阅读全帖 |
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h*****3
发帖数: 86 | 38 下面是我早年焦虑的时候写的，不如说是早年我的焦虑写给我的，更贴切，也算原创，头两天才翻出来，贴在了我年后刚开的新浪
博客 http://blog.sina.com.cn/huozhe33 （开博原因是我冒火,忍不住尖酸一下别人）里。当收到阿米的大包子的时候，才想起来，我好久没有在这里帖过东西了，我不是守得住的人，所以经常要跑。我不是谦卑而是自卑的人，所以我又忍不住说，希望我这帖，为地版增加资源，而不是占用资源。---是为序
如果失去理解的能力，阅读的能力，写字的能力，记忆力。
所有的曾自以为有的天才，甚至现有的脑力劳动的资格，立刻幻灭为空的构想，所有想
要说的话，也只剩嘴唇的痉挛，颤动，发出的只是含混的声音，甚至张口无音。
于是，后天的心理性盲聋，就形成了。
于是，未来盲聋的结果---实际上还没有到来---如阴影照进现实：四围凡人无知的歧视
和讪笑，刺不拉叽的忽隐忽现于现实的天空，像被裸身塞进了装满粗糠的麻袋，无论多
么轻微的动作都能感觉到刺痛。
于是，恐慌如心脏内源的毒药，随每一次泵压，渐渐逼近精神的中枢，而这些毒，现在
正由中枢排解，凌乱的落在了纸面。
其实，如果忠于解剖学，所有的... 阅读全帖 |
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