n**t
发帖数: 45 | 1 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
【 原文由 royluo 所发表 】
本文献给YL
（十二）Gel filtration的先天缺陷
上一篇讲到核提取物。实验的下一步就是跑Sephacryl S-300 column。
这一步实验是整个课程中第一次跑凝胶过滤色谱(gel filtration chromatography)，
我感觉还是很激动的。Gel filtration 是色谱中及其重要的一个种类。我先来谈谈
原理把。Gel filtration柱的材料是由高分子聚合物做的微珠。这些微珠呢，并不是
实心的，而是有很多孔状结构。当蛋白质样品经过这些微珠的时候，如果蛋白质分
子体积太大，不能通过微珠的孔状结构，就会绕过微珠，很快的被洗脱下来。如果
蛋白质分子体积不是那么大，可以通过微珠的孔状结构，就会迟一些被洗脱下来。
这样，蛋白质分子可以根据大小而被gel filtration column分开。
Gel filtration 和其他色谱方法一个显著的不同是：Gel filtration 并不依赖
蛋白质分子与柱材料的结合来分离蛋白。这个特点的一个好 |
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c********1
发帖数: 517 | 2 这话说的真好。你做了什么，和你操了什么。而最关键的是，要少做多操。
比如我们学校高分子最崇拜的wang JS。郑地有声的发了文章，结果出了高分子这块，
还得是高分子合成这一小块。有些做液晶的，做凝胶的，还真不关心这个。结果一出高
分子，有谁知道wang JS?
在历史的长河中，有哪个瞬间，会定格给一个只做不操的人？就是弯弓射吊的成吉思汗
，也得是在被西夏皇后KJ的时候被咬掉鸡巴才算是大哥大。你说蒙古历史上牛不牛？那
是当然。有谁吊宋朝了？问题是，蒙古留给大家的记忆是什么，除了花赤模子操遍中原
，不让一个结婚的汉人有初夜权。这余下还有什么？可是历史最后定位的是谁？是大宋
，还是蒙古？站在历史的长河，大家都得同意：和操相比，做了什么并不重要。这就是
老毛诗词总结的地方：一代天骄，只识弯弓射大吊。就是说，知道个操字，并且为之奋
斗毕生，就足够在历史上留下身影了。
结果鲤鱼就是老毛思想的实践者。就是有历史观的共产党人哪。
你问他发了什么？屁都没有。
你问他操了什么？人前老婆是名校MBA。西岸知名女士。最后分手，还帮他办了绿卡。
混西岸还搞swap。当时据说有那么一段爆料：说是大概有个有女朋友的 |
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c*******n
发帖数: 1648 | 3 后面能卷的可能是溶胶凝胶法做的有机无机玻璃吗？大饭啦给讲讲
[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com] |
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h*****w
发帖数: 750 | 4 有点像微乳法。不过这怎么可以开发成实际生产呢？我觉得共沉淀，熔胶凝胶和水热反应
还是最好的方法，但是些文献综述总要找点文献参考以下，不知道有没有这方面的专著。
方
成
滴 |
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p*l
发帖数: 1359 | 5 美国卖的魔芋很多是日本产的，叫konyaku，通常是一块凝胶包在塑料带里卖，也有切
成了细丝一袋袋卖的。 |
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e*******8
发帖数: 2101 | 7 茶树精油的作用：茶树油,又名澳大利亚黄金,是澳洲土著传说中著名的神奇肌肤治疗用
品。它是一种无色或浅黄色液体,具有令人愉快的豆蔻气味。品质不断精进，提供更有
效、更温和的极品茶树精油,天然防护强效的茶树精油成为了现代生活中的日用品，您
不需额外添加即可享受天然、安全、珍贵的茶树精油配方日用品，在您的生活周围行成
了天然防护膜，营造一个安全无毒的家！茶树油性质温和,皮肤渗透性好,不刺激皮肤,
毒性低。茶树精油可以对抗细菌、黴菌和病毒等三类微生物感染。茶树精油是强力的免
疫系统激励，当身体受到上述三类微生物侵害时，茶树精油可以提高身体的对抗能力。
茶树精油的作用1. 灰指甲：
直接由指尖指缝滴入，有立竿见影之效。
茶树精油的作用2. 烫伤：
烫伤处直接滴上几滴，约2-3小时擦一次，搭配 “芦荟凝胶” 效果更好。
茶树精油的作用3. 撞伤、肌肉酸痛、轻微扭伤、关节炎、痛风：
肿胀处直接滴上搓揉，可舒缓疼痛。(注意动作要轻)
茶树精油的作用4. 牙痛、牙龈发炎、嘴角发炎、鹅口疮：
可以直接抹上，并配合牙膏、牙线、漱口 |
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a****m
发帖数: 54 | 8 最近越来越喜欢咱们国货产品了，有时候感觉我们老祖宗留下的草本配方对于长期调养
还是功夫更深，废话不说，跟老乡们推荐几个我目前正在使用的并且认为好用的国货产
品吧
佰草集清肌养颜太极泥面膜
佰草集美白嫩肤面膜
靓妃珍珠面膜
靓妃玉脂凝胶（去角质）
相宜本草深层清洁面膜
相宜本草竹碳洁面膏
相宜本草八杯水面霜（适合油皮）
相宜本草滋养紧致眼霜
相宜本草润百滋养面膜（面贴膜，个人觉得比我的美丽日记好用多了）
芊芊草丝瓜水（超保湿阿。。）
另外，新碧的防晒喜欢得不得了，质感比la mer还好，还更清爽
ZA的眉笔和眼线笔个人感觉比EL的好用多了，而且不容易晕开
睫毛膏方面
查明一猫双管FIBER纤长睫毛膏和火烈鸟双管FIBER纤长睫毛膏能够制造假睫毛的效果，
有一次我多涂了几道，睫毛至少长了500%，很夸张的效果，而且不会晕开掉渣，用卸妆
油一洗就掉，喜欢死了，以后再也不买什么LANCOME,EL等睫毛膏了，国产的这两个牌子
简直就是我这种短睫毛丫头的福音阿，哈哈 |
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w***n
发帖数: 4358 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
PINKBULE (PINKBULE) 于 (Wed Oct 7 21:00:24 2009, 美东) 提到:
有些化妆品也会
很奇怪怎么会这样
还有有人知道为什么那些明星们身上的皮肤和脸部的皮肤都那么白啊，一个颜色。是不
是身上也擦粉了？
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aqugem (吉祥) 于 (Wed Oct 7 21:06:02 2009, 美东) 提到:
有几种情况会导致这种现象
1.天然有机高分子化合物（如纤维素、蛋白质、蚕丝、橡胶、淀粉等），它们的相对分
子质量可以从几万直到几百万或更大，往往由无数结构小单元以重复的方式排列而成。
它们在特定环境下可以分解，产生分离变异。
所以
A)凝胶类产品有可能会产生搓泥现象。由于卡波（做GEL类产品的一种材料）是高分子
聚合物的一种-------着哩就属于这种
B)带蛋白质的护肤品可能会产生搓泥现象。例如添加了胶原蛋白的护肤霜等等。。。
2.皮肤老旧角质层太厚，响干燥天气，甘既皮肤 |
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s*********n
发帖数: 1312 | 10 已经有三篇征文了， 这篇就不参加了，把机会让给别人吧。
每次看到小人吃饭的时候，剩下好多菜好多饭，我就会忍不住说，我小的时候，米饭
都吃不饱，你这些肉这些饭要是给小时候的我吃，那我会多么幸福啊。 小人就扯着我
的胳膊，要我讲讲过去。
我会说我小时候爬树掉下来差点摔死，我顺口问，要是我摔死了，就没有你了，你心疼
不心疼我？小人摇摇头，笑着说，不心疼。
我又说我小时候掉河里差点淹死，我说你要学会游泳，可别像我那样差点死了，小人着急
了，大声说，我已经能游一个来回了，我夸奖真是一个能干宝，小人洋洋得意。
我又说我对着河边觅食的老母鸡撒尿，结果老母鸡追着我啄我，小人哈哈大笑，笑得上气
不接下气，每次讲到这里小人都会很配合地大笑，让我也被感染，忍不住要笑。
中学的时候，我的顽皮事已经做得不多了，更多的记忆是饿。
那个时候我离开农村的爹娘，进城里念书。家里的条件虽然一年比一年好，可是上中学的
时候家里的经济还没有好到吃饭畅开了吃的程度。
我住在学校，早上就去食堂门口等开门，食堂有包子馒头花卷卖，花卷是奶黄色的，
柔软而有韧性，里面的小葱花不停向外飘着香味。包子是肉馅的，从手指头捏的绉里
飘出肉香来... 阅读全帖 |
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K****N
发帖数: 10783 | 11 一早晨瞎忙了算，浪费100刀。 装了个凝胶柱，结果样品把柱子堵死了。 |
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z**n
发帖数: 22303 | 12 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
标 题: 兰州拉面的危害！！！为了家人和朋友的健康！
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Feb 5 14:55:59 2011, 美东)
南京的电视台做了一个关于兰州拉面使用拉面剂的专题节目。原来在南京的所有兰州拉
面馆都在使用这些拉面剂，电视台记者用拉面剂来进行实验，结果很惊人。放了拉面剂
的纸水杯竟然出现氧化，而把拉面剂溶液倒在光滑地板上会出现更恐怖的腐蚀现象。
这是佛山一家比较出名的兰州拉面馆，老板自称来自青海，每天能卖出700到1200碗兰
州拉面。在说到为什么兰州拉面会这么好吃，老板大方地介绍是用了一种叫蓬灰的拉面
剂（果然跟南京同行用的是一样的东西）再加盐拉出来的。
问老板拉面剂在佛山能很容易买到吗，老板回答非常容易买到；问老板其他拉面店用这
个吗，老板说所有兰州拉面店都用。
佛山的拉面剂跟南京的拉面剂有区别吗？在城北综合批发市场很容易就买到南京用的白
色包装拉面剂和刚才那佛山拉面店用的蓝色包装拉面剂，同样写着兰州大学力司化工厂
字样，白包装... 阅读全帖 |
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w*****g
发帖数: 16352 | 14 不是那个什么上八洞仙下八洞仙那个, 是个1988年的科幻小说. 有神马美洲探险,
天外飞仙, 长毛野人等等 (我重口味啊). 扫描版的, 质量一般. 但是要的是那个
感觉不是.
有看过这本牛书的同鞋么. 一晃快30年的事情了.
话说年初蛋疼, 想回忆童年一下, 结果到处找不到, 马了隔壁的UCB, STANFORD亚洲藏
书馆倒有, 但是我又不认识那里的女研究僧, 女破丝刀什么的. 自己办证的话至少100刀
起步, 索性花近20刀从国内代购的, 原价只要5人民币啊. 看的时候很小心, 都是轻
拿轻放, 国内老书质量潮点, 我翻页的时候就只用指尖, 生怕我的大汗手腐蚀了纸张.
靠. 老子看PB也没这么多讲究.
今天突然找到了电子版. 顿时内牛满面......一是一个心愿了了, 早想扫描我手里那本
永久保存, 但是有舍不得撕书. 二是真的泥马心疼我那20刀. 放小时候, 那得多少套
煎饼果子啊....
一起享用吧.
联接在此:
http://bbs.weiphone.com/read-htm-tid-5608480.html
这里是豆瓣上抄来的内容简介:
这本书可以说是本历史小说，可是也可... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 15 几个小建议：
(1) 去磷酸化不是那么重要。
(2)换新的连接酶尤其是新的BUFFER。连接反应的BUFFER
非常容易坏，因为里面有ATP，冻融几次就不行了。
(3)载体和插入片段的量要足够。建议插入片段的量越多
越好。我一般让片段的莫尔量是载体的几十倍。
(4)既然你用琼脂糖凝胶纯化你的片段。我估计你用UV照射过
胶来确定位置，然后切下有DNA的部分，是吧？UV照射下，
很容易让DNA形成嘧啶二聚体，急剧降低连接效率。所以你要么
不用gel purification，如果必须分离两个片段，你可以
同时在两条LANE上跑少量的DNA和大量的DNA，切下少量DNA的
胶用UV照射确定所要片段的位置。 |
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r****o
发帖数: 105 | 16 你给的信息不够，至少得说说这两个蛋白的标签是什么吧，比如
Flag, HA, 或者myc什么的。既然你用proteinA/G，你应该还加了一种
抗体可以把两个蛋白中的一个拽下来吧？
背景高倒是很常见，因为非特异性的结合会比较严重。要做得好，
被首先拽下来的蛋白的tag要比较好才行，而且如果用多次串联的TAG
会比较好，比如6XFLAG。也有人用两种不同的TAG串联在一起，通过
两步纯化来增强特异性。另外就是最好直接用抗体共价耦联的琼脂凝胶(
比较贵，1ML可能要五百多刀)。
还有就是，一般的做法是直接把洗过的beads 直接用sample buffer
煮。这样的样品非特异性的成分会不少，但如果用TAG peptide的溶液
冲洗蛋白(比如anti-flag matrix 用flag peptide 来冲洗)，效果会好很多。
没信号也许是因为缓冲液太强，或者是因为两个蛋白结合太弱，
冲洗过程中脱落了。用crosslinker可能会有所帮助。 |
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o*****p
发帖数: 2977 | 17 【 以下文字转载自 Medicine 讨论区 】
发信人: seeoff (greymouse), 信区: Medicine
标 题: 目前SARS实验室诊断技术简介
发信站: BBS 水木清华站 (Wed Apr 23 23:40:32 2003), 转信
目前的SARS检测方法介绍
1． IFA（间接免疫荧光）方法；
荧光标记的抗IgG抗体 为二抗
病人血清为一抗
培养病毒的细胞裂解液做包被抗原
抗体产生通常需要10－14天时间，此方法可以检测发病10天之后的患者标本。
2.PCR方法：
收集病人样本（血清或者含漱液）
超速离心，浓缩病毒(标本采集对医务人员非常危险，超速离心对实验人员也很危险并且
收集的样本可能未必能捕捉到病毒存在或者标本处理不好造成RNA降解，所以此步骤为此
方法的难点，至今未克服)
用常规方法提取病毒RNA
RT-PCR，扩增相应条带（引物一般使用国际通用的7对引物）
凝胶电泳观察，或者引物用标记探针做实时PCR
3.抗原检测
这是最有希望早期诊断的方法
ELISA方法，
底板用病毒蛋白包被（可用细胞裂解液、基因工程方法得到的重组蛋白，或者合成肽）
用鼠或其 |
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f**d
发帖数: 1952 | 18 【 以下文字转载自 Joke 讨论区,原文如下 】
发信人: bibo (清粥小菜), 信区: Joke
标 题: zz一生物系学生写给暗恋的女孩的信
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sat Nov 20 14:38:29 2004) WWW-POST
亲爱的某某: 昨天晚上，偶的脑袋像PCR仪一样在不停的扩增着一个概念：偶爱你，估计
有几百个循环，于是早晨醒来，脑袋里面像吐温100一样满是对爱情憧憬的泡泡! 你在偶
的心中，就像DNA双螺旋一样的美丽，偶愿意化做一个小小的锌指结构，紧紧的依偎在你
怀你。你就像0.5%的琼脂糖凝胶那样纯洁，偶愿意变作像凋亡的细胞，与你一起成就彗星
般的美丽。你就像考马斯亮蓝那样炫目，偶愿意融化成一块SDS-PAGE，让偶们融合成永恒
的画面。 每次你的回眸，都会像振荡器一样，激起偶心中的万千情绪。你那忧郁的眼神
，更是像注射器一样，刺中偶的心疼。而每次见到你与别的男生在一起嘻笑，更是像超声
破碎机一样，把偶脆弱的像细胞壁一样的心房撕个粉碎!!!! |
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r****o
发帖数: 105 | 19 本文献给YL
（十二）Gel filtration的先天缺陷
上一篇讲到核提取物。实验的下一步就是跑Sephacryl S-300 column。
这一步实验是整个课程中第一次跑凝胶过滤色谱(gel filtration chromatography)，
我感觉还是很激动的。Gel filtration 是色谱中及其重要的一个种类。我先来谈谈
原理把。Gel filtration柱的材料是由高分子聚合物做的微珠。这些微珠呢，并不是
实心的，而是有很多孔状结构。当蛋白质样品经过这些微珠的时候，如果蛋白质分
子体积太大，不能通过微珠的孔状结构，就会绕过微珠，很快的被洗脱下来。如果
蛋白质分子体积不是那么大，可以通过微珠的孔状结构，就会迟一些被洗脱下来。
这样，蛋白质分子可以根据大小而被gel filtration column分开。
Gel filtration 和其他色谱方法一个显著的不同是：Gel filtration 并不依赖
蛋白质分子与柱材料的结合来分离蛋白。这个特点的一个好处是，所有的蛋白样品
最后都能被洗脱下来，柱子重复用也不会有什么问题。但是这个特点也给 |
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r****o
发帖数: 105 | 20 本文献给YL
（十五）AP1的活性测定
第二个模块的实验，DNA affinity chromatography之后我们又跑了一个更精细的
Gel filtration，用的是Amersham卖的Superose 6预装柱子。纯化步骤就只有这么多了。
剩下的就是一些活性测定。无论是sephacryl分出来的组分还是DNA affinity column分出
来的组分，我们都测试了AP-1的活性。方法呢就只有两种，一种是凝胶迁移率变动分析
(EMSA)，另一种是DNA水解酶I 足迹分析 (DNase I footprinting assay)，都可以用来分析
蛋白与特定DNA的结合能力。我过去没做过这两种实验，所以感觉很新奇，做的也格外卖
力，结果也还不错。
Gel Mobility-shift assay 原理很简单，把蛋白质样品和P32标记的寡聚核苷酸探针
一起孵育十几分钟, 然后拿去跑一个低浓度acrylamide胶。如果探针结合上蛋白了，速度
会变慢很多，就会停滞在胶的上段；如果没有结合上，探针就会自由的跑到胶的下段去。
然后把胶拿去做放射自显影就行了。跑胶的装置 |
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j*********n
发帖数: 168 | 24 如果对蛋白的纯度还没准确测量，那就分别上5、10、15（加了loading buffer）后的
，大致估一下，下次照此办理……
细胞裂解的上清，杂蛋白比较多，可以稍微少上点样；经过凝胶柱或者离子交换提纯的
，要少上些……
跟做菜一样，放多少盐，你自己嘴巴尝尝就有数了……
当然，你得先会做菜。
你问的好几个蛋白分离，检查的问题都很入门啊，不是入错了行吧…… |
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j*********n
发帖数: 168 | 25 呵呵，用水能封住么？
你配的胶液里没水么？
有水的话，此水和彼水有什么差别么？
我在国内用异丙醇封胶，只加一点，略微能盖过分离胶就好。等加浓缩胶的时候，把异
丙醇倒掉，用蒸馏水冲洗一下，干了就可以加浓缩胶了。
在美国实验室，直接用100%乙醇封，就直接用洗瓶加满，也是等分离胶凝固了，倒掉乙
醇，挥发干净了再加浓缩胶。
凝得快肯定是他妈的（TEMED)加多了，我先后做过DGGE，SDS-PAGE，Urea PAGE,AP的量不是很重要，主要还是他妈的。
你试试减一下量，应该能解决。
又及：查了一下实验室protocol，我们一次配4 pieces，20ML胶液，加了8UL他妈的。
或者你可以参考一下比例。一般不到半小时就可以凝胶了…… |
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b*******H
发帖数: 830 | 26 看来楼主对做凝胶的原理一点都不明白。那就是个链式反应。少用点TEMED什么问题都
解决了。根据个人的操作熟练程度而定。另外用正丁醇封胶是标准方法，去泡，均匀，
其他都是歪门邪道。
俺喜欢自己做，每天八块，想用什么样的随便做。 |
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s*******c
发帖数: 192 | 27 APS量不需要变，量少的话会不凝。最好现配防止降解。
建议认真看一下SDS PAGE的原理。。。。凝胶的化学反应中，APS相当于反应物，TEMED
相当于催化剂
乙醇封？没必要吧。。。加点水封就成了，或者那位介绍下乙醇有什么特别的好处么？
难道是乙醇等胶凝了就挥发了省的吸水？ |
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s*******c
发帖数: 192 | 28 亲身体验，有次APS加少了(后来发现是配溶液水加多了，我一般就看着小离心管刻度加
点，结果刻度看错了...)等了一下午都没凝。。。。
凝胶速度主要是TEMED |
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c****5
发帖数: 77 | 29 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
环保处理。长期一来，溴化乙淀就是各个生物实验室不得不用却叫人头痛的试剂！
最近发现2家美国生物公司出品了溴化乙淀的替代物：
1. EZ Vision是一种无毒无害的溴化乙淀替代物，敏感度高，能够辩别0.25ng浓度的 |
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y***e
发帖数: 6082 | 30 两年前还用EB。。。。现在改用GR了，的确好多了
尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
环保处理。长期一来，溴化乙淀就是各个生物实验室不得不用却叫人头痛的试剂！
最近发现2家美国生物公司出品了溴化乙淀的替代物：
1. EZ Vision是一种无毒无害的溴 |
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s********l
发帖数: 1195 | 31 对，盐浓度对尺寸排组影响不大，但是要保证出来的东西没有杂质会堵凝胶，上样前最
好过滤一下。
column |
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T**********t
发帖数: 1604 | 32 一般来说凝胶浓度越低分辨率也越低。
2kb左右的片段完全可以用1.5%或者2%的agarose胶跑。2.2kb和2kb应该能分开的。 |
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t*****z
发帖数: 1598 | 33 我用一般的琼脂糖凝胶跑RNA电泳，跑出来看着不错的，但是条带的大小和边上的DNA分
子量标准对不起来。我想可能是因为RNA分子的迁移率和DNA不一样，所以不能直接对照
。那么有没有公式可以把DNA分子量标准的条带换算成RNA的分子量呢？如果没有的话，
我是不是非得去买专为RNA设计的分子量标准呢？
另外，用反转录酶（Invitrogen SuperScript III）合成出来的cDNA，用OD260怎样定
量？是像DNA一样乘以50，还是乘以33或者别的什么因子吗？
多谢大家！ |
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W*********n
发帖数: 775 | 34 最近要做一个质谱实验，目的是检测一个信号转导通路上的蛋白被抑制剂抑制（没有抑
制的作为对照组），病原体感染后某个器官的蛋白水平变化, 当然很希望能够看到磷酸
化蛋白的变化。
这个器官是单层细胞的，几个平方毫米大小（取50个左右的个体作为一个样品）；
我的初步实验步骤是：器官细胞在裂解液中裂解---沉淀蛋白--凝胶电泳蛋白---胶上用
胰蛋白酶分解蛋白并收集--MS 分析。
请教做过的朋友：
1）用什么溶液和方法来进行器官细胞裂解能够充分裂解细胞，又能够不影响后面的质
谱分析？
2）在裂解完细胞后，用氯仿甲醇沉淀的方法纯化蛋白两次，并除去裂解液中一些盐和
去垢剂；请问这步操作会不会造成蛋白降解，尤其是磷酸化基团的去磷酸化？
2）质谱一般的上样量为多少？ 每个样品要多少ug, 才能够得到比较理想的检测结果？
20ug蛋白一般需要多少胰蛋白酶来降解？
3）大家一般会加入什么样的磷酸酶抑制剂来抑制磷酸化？
谢谢! |
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s******y
发帖数: 28562 | 35 裂解的时候，先把细胞用dPBS洗一洗
既然你要跑总蛋白的胶，那何必用TCA沉淀呢？直接用8M Urea 裂解然后
直接上胶不更好么？这样还省得你操心phosphotase 的问题。
另外，如果你自己没有做过trpsin digestion, 不如让跑质谱的人帮你做算了。
他们一般都负责这一步的。你要自己做，万一没弄好还更麻烦。
最近要做一个质谱实验，目的是检测一个信号转导通路上的蛋白被抑制剂抑制（没有抑
制的作为对照组），病原体感染后某个器官的蛋白水平变化, 当然很希望能够看到磷酸
化蛋白的变化。
这个器官是单层细胞的，几个平方毫米大小（取50个左右的个体作为一个样品）；
我的初步实验步骤是：器官细胞在裂解液中裂解---沉淀蛋白--凝胶电泳蛋白---胶上用
胰蛋白酶分解蛋白并收集--MS 分析。
请教做过的朋友：
1）用什么溶液和方法来进行器官细胞裂解能够充分裂解细胞，又能够不影响后面的质
谱分析？
2）在裂解完细胞后，用氯仿甲醇沉淀的方法纯化蛋白两次，并除去裂解液中一些盐和
去垢剂；请问这步操作会不会造成蛋白降解，尤其是磷酸化基团的去磷酸化？
2）质谱一般的上样量为多少？ 每个样品... 阅读全帖 |
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s**********e
发帖数: 2888 | 36 我觉得从普通人的角度来看，青蒿素和普通人（中国美国欧洲）根本没有交集，因为几
乎除了非洲和极个别落后地区，没有人得疟疾。而癌症完全不一样，紫杉醇是现在癌症
药物里面销路最好的（或者之一）。
http://www.bioon.com/industry/reviews/363229.shtml
紫杉醇制剂居世界抗癌药首位
据来自美国的最新统计数字，2006年，包括天然原料加工的紫杉醇注射剂和半合成紫杉
醇注射剂在内的紫杉醇制剂的国际市场总销售额已达37亿美元，高居世界抗癌药物之首。
自1992年甫一上市，紫杉醇就受到了医学界的热烈欢迎，当年即创下年销2亿多美元的
惊人业绩，上市第7年全球市场销售额已突破10亿美元。由此，紫杉醇创造了植物抗癌
药单一制剂的销售奇迹，即使是上市较早的长春碱和长春新碱等植物抗癌药，销售额至
今只有2亿多美元。
长期供不应求市场为百时美施贵宝垄断
迄今为止，国际市场上只有2种紫杉醇原料药：一种来自各种红豆杉树皮；另一种是从
欧洲观赏紫杉枝条里提取出“10-浆果赤霉碱”，然后再经半合成而成，即多西他赛（
多烯紫杉醇），其结构与天然提取紫杉醇十分相似。这两种原料药均为... 阅读全帖 |
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t****g
发帖数: 120 | 37 agarose或者agar(for soft agar assay) 凝胶之后用微波炉加热又溶，这样可以反复
多少次？ 会影响什么性质之类的吗？ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 38 +1
另外顺便推荐一下bio-rad家的anyKD胶
没有写具体是什么%
但是比4-20%的还好用
大分子量和小分子量的分离的都很好
最关键是30分钟就跑好了
价钱跟别的pre-cast gradient胶也一样
我们实验室现在全都用这个了
说真的比自己配要省很多时间和精力
（配胶凝胶，1小时，跑胶1.5小时 VS 跑胶30分钟） |
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h******1
发帖数: 16295 | 39 Discovery频道卖的,玻璃盒子里有一块凝胶,寄来九只蚂蚁,收到时死了四只.
实验内容是观察蚂蚁在太空中如何打洞.
失重状态无法模拟,就当看蚂蚁玩了. |
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k******0
发帖数: 1073 | 40 对。
最后凝胶过滤纯化膜蛋白复合体，样品稀释了，需要浓缩但不能用膜浓缩，因为膜会浓
缩detergent影响复合体的稳定性。而且结晶，需要知道确定的溶液组分，如果走离子
梯度，就不知道多少盐在里面。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 41 蛋白样品有俩问题：
1） 蛋白样品在裂解之后就上凝胶电泳分离了，然后储存在4C 在洗脱液（30%甲醇，
10% 醋酸，60%水）。由于仪器室的质谱机器坏了修了一个月，然后那个操作的老师休
假了一个月，我就去做别的，耽搁下来了，现在已经在那里放了7个月了。继续用这个
胶来做，会不会影响实验结果？ （没有任何霉菌之类产生）。
２）当时跑电泳的胶是自己配的，结果配的时候上面的浓缩胶可能是用的丙烯酰胺的浓
度有些大，结果跑出来的胶在浓缩胶里面有一些分子量大的蛋白（只看见一条比较清晰
的条带，其他的基本看不见）， 但是每个样品的蛋白条带还是清晰的。请问，还能不
能用这个胶来做LC/MS/MS? 我一般把每个样品的一条胶切成10片， 然后每片分别处理
来做质谱。
样品比较珍贵，处理也很麻烦；所以如果不影响实验结果，我想继续用它。但是作质谱
的花费也很大，如果样品不用保证出好的结果，我还是想选择去另外准备一份。
谢谢！ |
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q*******8
发帖数: 768 | 42 还有你NI出来的蛋白溶液含有大量的NaCl还有大量imidazole，这些你要是不透析啊或
者过microcon之类直接上凝胶。。。结果都是不太好说的。。。 |
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L*****t
发帖数: 56 | 44 最近准备纯化一个2,500kDa的大蛋白复合体，压箱底的一根superose 6柱子试了一下已
经老得没办法用了。新的预装柱自然买不起，问题是单买这个胶也很贵。Google搜到了
Toyopearl HW-65，分离范围和superose 6差不多但是价格只有五分之一。不知道这个
胶有没有战友用过？分辨率如何？ |
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m********a
发帖数: 239 | 45 I have spent some time there. You can contact me via MITBBS email regarding
these positions.
招聘启事
西南大学位于重庆北碚。西南大学心理学部动物实验中心现有200平方米的实验面积，
拥有高质量和标准化的十万级动物饲养室，先进的动物行为学设备（条件性恐惧箱、听
觉惊跳反应系统、穿梭箱、Noldus行为分析软件及多种常规迷宫设备）、电生理设备（
脑片钳系统）、分子生物学设备（2D蛋白电泳系统、PCR仪、核酸水平电泳系统、荧光
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目前本中心已具规模并处于发展期，特面向全球招聘具有生理心理学、神经科学、动物
行为学研究经验的全职教师（1~2名）。
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应聘者应具有优良的学风和高尚的师德，身体健康，能带领本中心与国际先进水平接轨
，并具有以下基本条件：
1. 心理学、神经科学、神经药理学或者其他神经科学相关学科的博士学位，擅长
神经科学、动物行为学、分子生物... 阅读全帖 |
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p*******1
发帖数: 495 | 46 鄙人不才，做了几次这个东西，怎么考马斯蓝染色后，都看不到条带啊？？？
完全丧失自信了，实在是困惑中？？？
有没有人对这个东西非常了解的朋友，非常需要帮助!!!衷心求教！
另外有没有商品化的非变性胶，可以买来直接用，不需要自己做胶。 |
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y***k
发帖数: 40 | 48 有利于士兵们还是生物学博士们的爆炸性脑损伤研究？
比尔.威廉斯
2013年7月31日
[译者按：比尔.威廉斯是美国退伍军人事务部（VA)的研究课题经费申请书、网页内容
和新闻专题的拟写人。他非常熟悉VA的爆炸性脑损伤研究计划和项目，他在本文中揭露
的爆炸性脑损伤研究中存在的问题非常真实可信。爆炸性脑损伤已经成为伊拉克和阿富
汗反恐战争中的典型创伤。据估计，超过27万从伊拉克和阿富汗回国的退伍美军遭受爆
炸性脑损伤。从2007年开始，美国纳税人已为爆炸性脑损伤研究支付了10多亿美元，然
而，鲜有令人满意的研究结果可以清楚地解释爆炸性脑损伤的发生机理，更没有一例爆
炸性脑损伤病例得到满意的治疗。大部分研究经费支付了生物学博士们的工资，使他们
在美国的经济危机中成为受益人。他们的贡献仅仅是发表的没有任何价值的学术论文和
免费参加夏威夷和欧洲学术会议的旅游。这些生物学博士们连基本的医学知识都不具备
(不清楚人体的解剖机构，不知道人体的生理功能和病理变化)，却自称创伤性脑损伤专
家。他们与那些政客一样，是将自己的幸福建立在普通士兵们痛苦上的无耻之徒。若继
续由他们主导爆炸性脑损伤研究，无论再投入... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 49 最近实验室里很多人克隆时遇到了这个诡异的事情。
1. PCR产物跑胶。大小正确。
2. 切胶回收提纯之后，第二天再跑胶确认，DNA片段居然变小了（不是smear)。
这个怎么解释呢？
1. 细菌污染，DNA降解？那应该得到很多很小的片段才是，而现在确是一条很强的条带
，只是变小了而已。
2. 变成单链DNA了? 倒是解释的通，但是怎么变呢？
各位有何高见呢？ |
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m*********D
发帖数: 1727 | 50 If you use water to dissolve the DNA, you might get single-stranded DNA.
To form DS-DNA, certain salt concentration is necessary. I generally mix the
DNA with TE buffer (1:9), and then load on gel with loading buffer. It will
get back to normal size. |
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