q**w
发帖数: 782 | 1 http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2013/12/286867.shtm
三中全会部署深化科技体制改革
11月9日至12日，党的十八届三中全会召开，会议把深化科技体制改革作为全面深化改
革的重要内容进行系统部署。会议通过的《中共中央关于全面深化改革若干重大问题的
决定》明确提出深化科技体制改革、加强知识产权运用和保护、整合科技规划和资源、
改革院士遴选和管理体制等。
三中全会关于科技体制改革的部署，既体现了与以往改革思路的继承发展，对实践中先
行先试的经验予以肯定，又结合经济领域改革的大方向，突出了今后一个时期改革的重
点领域和环节，为实施创新驱动发展战略、建设创新型国家提供了重要的制度设计。
“嫦娥三号”实现月面软着陆
12月14日21时11分，“嫦娥三号”在月球正面的虹湾以东地区实现软着陆。这将开创人
类月球探测史的多项“首次”。月面软着陆就位探测与月球车巡视勘察二者同时进行并
有机结合，将获得比以前更有意义的探测成果；在国际上首次利用测月雷达实测月壤厚
度和月壳岩石结构；首次在软着陆地点利用数据转发器精确测定地月间距离，进行月球
动力学研究；首... 阅读全帖 |
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l***d
发帖数: 1828 | 2 2008 国家自然科学基金 武汉大学
total：207项
面上项目：127项
青年科学基金：65项
重大研究计划：3项
自科重大项目：7项
－－－－－－－－－－－－－－－－－
重大研究计划：
周翔 化学小分子探针对染色体端粒DNA结构、生物学活性及相关信号转导的干预和
影响 吴燕 脱落酸诱导的保卫细胞运动过程中小G蛋白作用机理的研究
陈子林 茉莉酸类激素高效分离与高灵敏度检测及其在水稻颖花开放机理研究中的应用
－－－－－－－－－－－－－－－－－
自科重大项目
负责人 项目名称 批准金额（w）
周创兵 暴雨诱发滑坡致灾机理、风险评估与减灾方法研究 185
王红 生物体系中一氧化氮高效分离检测与三维成像新方法及其作用机制的基础研
究188
汪晖 胎海马GR介导外源物所致HPA轴发育异常的表观遗传机制 160
马费成 基于生命周期理论的数字信息资源深度开发与管理机制研究 115
卢欣 青藏高原特有物种地山雀的合作繁殖系统及其时空变异 175
李清泉 基于 |
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j***h
发帖数: 4412 | 3 深中通道变数背后的广深分歧 2011-03-23 20:56:36 南都 王莹\任笑一
民间呼吁快建深中通道 深圳交委回应
不应将深中与深茂机械性捆绑 省发改委改口表示不便回应
南都讯 深中通道筹备8年后，真的会被公示公铁合一的深茂铁路取代吗？昨日这一
民间呼声得到
深圳官方的回应。深圳市交通运输委员会发展计划处相关人士接受媒体采访时表示，深
茂铁路中的公
路桥不具备或不完全具备深中通道的功能，两者交通主流向不同，应分址建设，对于深
茂铁路公示，
则仅意味着立项，从实际需要来看，不应将其与原深中通道机械性捆绑在一起建设，希
望能够“从战略
高度合理确定深中通道路线”。
省发改委：不方便回应
本报昨日跟踪报道了深茂铁路公示在民间引发的广泛讨论，而“挺深”派与“挺
广”派在论坛上大
打口水战，深圳新闻网、新华网城市论坛等该主题非常火暴。“挺广”派担心深中通道
边缘化广
州，“广东的铁路网、公路网都是以广州为中心的，一旦深中通道通了，且不说东岸，
西岸从江门、中
山、阳江到深圳的宝安机场远远便利过白云机场，去香港也更便捷。”但挺深派则认为
应两条通道不存
在矛盾，“深中通道可以缓解虎门大桥... 阅读全帖 |
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p****x
发帖数: 643 | 4 ZZ
上海市政府新闻办公室召开“11.15”特别重大火灾第二次专题新闻发布会，上海市静
安区区长张仁良表示，非本市户籍遇难人员和本市户籍遇难人员按同样标准处理。
每位遇难人员将获得约96万元赔偿和救助金。其中按《中华人民共和国侵权责任法
》一次性死亡赔偿约65万元、政府综合帮扶和社会爱心捐助等31万元。
上海市政府新闻办召开“11.15”特别重大火灾第二次专题新闻发布会，上海市静安区
区长张仁良表示，对胶州路728号事故大楼赔偿救治政策，依法依规制订，每位遇难人
员将获得约96万元赔偿和救助金，其中包括一次性死亡赔偿65万元。
上海市静安区区长张仁良表示，胶州路火灾事件让我们非常悲痛，在这一事故中，
我们负有不可推卸的责任我们一直沉浸在极度悲痛中。胶州路 11.15特大火灾善后工作
在市委、市政府的领导下，正在积极有序的推进中。对于胶州路728号失火大楼的赔偿
救助政策根据事故性质，依法依规制定。
张仁良表示，每位遇难人员将获得约96万元赔偿和救助金。其中按《中华人民共和
国侵权责任法》一次性死亡赔偿约65万元、政府综合帮扶和社会爱心捐助等31万元。非
本市户籍遇难人员和本市户籍遇难人... 阅读全帖 |
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p********i
发帖数: 12365 | 5 待评估后再决定大楼用途
ZZ
上海市政府新闻办公室召开“11.15”特别重大火灾第二次专题新闻发布会，上海市静
安区区长张仁良表示，非本市户籍遇难人员和本市户籍遇难人员按同样标准处理。
每位遇难人员将获得约96万元赔偿和救助金。其中按《中华人民共和国侵权责任法
》一次性死亡赔偿约65万元、政府综合帮扶和社会爱心捐助等31万元。
上海市政府新闻办召开“11.15”特别重大火灾第二次专题新闻发布会，上海市静安区
区长张仁良表示，对胶州路728号事故大楼赔偿救治政策，依法依规制订，每位遇难人
员将获得约96万元赔偿和救助金，其中包括一次性死亡赔偿65万元。
上海市静安区区长张仁良表示，胶州路火灾事件让我们非常悲痛，在这一事故中，
我们负有不可推卸的责任我们一直沉浸在极度悲痛中。胶州路 11.15特大火灾善后工作
在市委、市政府的领导下，正在积极有序的推进中。对于胶州路728号失火大楼的赔偿
救助政策根据事故性质，依法依规制定。
张仁良表示，每位遇难人员将获得约96万元赔偿和救助金。其中按《中华人民共和
国侵权责任法》一次性死亡赔偿约65万元、政府综合帮扶和社会爱心捐助等31万元。非
本市户... 阅读全帖 |
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p*********n
发帖数: 7788 | 6 英国牛津纳米孔技术公司研制出似U盘大小便携式基因组测序仪
英国牛津纳米孔技术公司在佛罗里达州基因组生物学与技术会议上宣布了一个爆炸
性消息，即推出GridION和MinION两款基于新一代DNA测序技术的便携式基因组测序仪，
后者仅有U盘大小，可插入电脑USB端口完成测序，价格仅900美元。
英国牛津纳米孔技术公司研制出似U盘大小便携式基因组测序仪
图为牛津纳米孔技术公司推出的MinION高效基因组测序仪。
两个仪器都是基于纳米孔测序技术，采用一种特殊的蛋白在薄膜结构上打出纳米级
小洞或小孔，在膜的一侧施加电压将单条DNA链（带负电）拉进纳米孔。当DNA的化学碱
基通过时，引起细微的电流变化，测量这种变化即可识别出不同的碱基（T、C、G和A）
组成顺序，然后通过电脑将每一部分的结果编织在一起呈现。人类基因组包含大约30亿
个碱基，DNA测序就是将这些碱基的顺序识读出来。
该消息令投资者大为振奋，而对于牛津纳米孔技术公司的竞争对手美国Illumina公
司和生命科技公司来说犹如一记重创。生命科技公司于今年初推出的最新台式离子质子
序列发生器测序需要24小时，价格约15... 阅读全帖 |
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w***a
发帖数: 432 | 7 不用外源程序的话，只能使用latex的包了。这样是很受限制的。
Excel2latex是在tex文件里导入Excel数据还是转换完成后再拷贝到tex文件里的？ |
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w***a
发帖数: 432 | 8 不用外源程序的话，只能使用latex的包了。这样是很受限制的。
Excel2latex是在tex文件里导入Excel数据还是转换完成后再拷贝到tex文件里的？ |
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w********y
发帖数: 359 | 9 在生物学上，衰老与老化是两个完全不同的概念。衰老是有序的主动过程，是由内源因子
调控的细胞程序化死亡（programmed cell death）。而老化则是一个主要受外源因子影
响的非程序化的被动事件。间而言之，衰老也由基因控制的性状之一。
所有的高等生命在某个阶段都只有15%的基因表达，另外的部分处于休眠状态。某些特殊
的外界条件可激发部分休眠基因的表达，甚至产生变异，经典遗传学认为只有改变了遗传
物质的变异才能够传递给后代。米丘林学说则认为，遗传性传递的并不是性状，而只是一
定的发育可能性，是生命为了正常的生长发育对外界作一定反应的特性，既有继承上一代
的一面，又在每一世代中重新形成。基因物质的发现以及基因克隆技术的发展彻底否定了
米丘林学说。如果某物种不具备某基因，无论外界条件怎么刺激也不会产生某性状的表达
。就好象没有音乐细胞的人，无论怎样熏陶也于事无补。
生老病死，一切的一切，造物者本来早有安排。但基因图谱的完成，以及技术的发展使得
克
隆一切基因成为可能。也许某一天，花一点钱就可以转一个“不死”基因到身体里。实在
是喜欢音乐而熏陶许久未果的人也有机会成为莫扎特了。是不是这 |
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d***e
发帖数: 243 | 10 我来补充一下,不是查google的,是三年前在北医帮导师写教材时我的一些理解.
Transfect一般是指各种artificial的手段给动物细胞内导入外源的基因片段.
Transduction ,conjugation涉及的是细菌间的基因转移,不关真核细胞的事.
1. 转化(Transformation).受体菌直接摄取供体菌游离DNA片段,转化的DNA片段可以是细
菌溶解 释放,也可以是人工提取. 摄取能力称为感受态 competence.应用吗,可以讲是最
早证实了DNA是遗传物质的Griffith的肺炎球菌实验.
2.转导 (Transduction). 温和噬菌体介导的遗传物质从供体菌到受体菌的转移.这里强调
的是temperate phage, 不是指溶原性噬菌体lysogenic phage.作用是细菌自发获得一些
新的protein,eg. toxin or antigen.
3.接合(Conjugation). 是plasmids介导的细胞间接触,是供体菌遗传物质进入受体菌.供
体菌遗传物质不一定就非是供体菌的gene,也可能只是供体菌的质粒transfer到rece |
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r****o
发帖数: 105 | 11 本文献给YL
（十七）不可能完成的任务
输卵管冲洗（oviduct flushing）是第二天实验课中的第一个实验。用这种办
法分离了0.5dpc到3.5dpc胚胎之后，下一个问题就是怎么把这些胚胎放回到小鼠体内，
使它们正常发育下去。事实上有两种办法，一种是体外培养，让胚胎自己长到囊胚的阶
段，然后放回到小鼠的子宫里，也就是胚胎子宫转移的方法（Uterine Transfer）。这
种方法比较简单，但是胚胎在体外培养的条件下最后不一定能正常发育，所以最好的办
法是把这些胚胎转移到输卵管里面。这种方法叫做胚胎输卵管转移（Oviduct Transfer
）。输卵管转移是胚胎发育学最难做的一个手术，非常需要技巧。但是这个技巧又很重
要，比如要做转基因小鼠，把注射了外源DNA受精卵放回到假孕的小鼠体内发育，就需
要用这个技术。第二天以及接下来的几天中，我反复试了多次，都没有做出来。沮丧之
余，我向Anne McLauren老奶奶讨教，结果她人家说，实在是没有什么窍门，反复练习
很多次自然就会了。 |
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l***d
发帖数: 1828 | 12 转自丁香园
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=7195189&sty=1&tpg=1&age=0
RNAi－－从理论到实践，再到诺贝尔医学和生理学奖
RNAi早期研究
RNAi（RNA interference）是一古老的机制，最初来源于1990年Napoli在牵牛花Napoli
et al. Plant Cell, 1990和Cogoni在脉孢菌Cogoni C and Macino G. Proc Natl
Acad Sci U S A. 1997中的发现，即转基因的共抑制现象。早期认为基因共抑制是基因
副突变的范畴，但是靶基因序列具有明显不同的特征，前者是遗传下来不表达的序列，
是在等位基因作用下基因发生的表遗传沉默；后者在引入抑制基因前却是可以表达的序
列。此外，基因共抑制是发生在转录水平还是转录后水平在一段时间内引起了争论：
van der krol认为共抑制是外源基因引入细胞后，目标基因过渡转录，从而产生负反馈
van der Krol AR, et al. Plant Cell. 1990.；Grierson认为共抑制是不 |
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a***e
发帖数: 1010 | 13 现在的转基因技术和几千年前的选育，杂交没什么本质区别，都是对某个已知物种引入
外源基因来改变
该物种的性状，以达到改良物种的目的，所以也没什么值得大惊小怪的。
但是，有几个问题需要考虑：
（1）早期的杂交技术主要在几个相似相近的物种间进行，他们之间的遗传，生化，分
子机制都非常类
似，因此它们的后代性状在一定程度上变化没那么大。 而现代的转基因技术已经可以
做到对相距非常元
的物种属进行操作，甚至包括植物与动物之间。尽管现在技术还没有做到大规模地将一
条复杂的生化通
路从一个高等物种完全移植到另外一个高等物种，在微生物里已经证明是可行的。这种
移植带来的变化
不仅仅在于多表达了几个可以被降解成氨基酸的蛋白质，而在于是否会产生新的不可降
解的小分子，而
这种小分子的性质可能是我们不知道的。
（2）早期的选育杂交技术往往通过了几十，几百，甚至上千年，在这些时间里，物种
的扩散是个相对较
慢的过程，因此人类有较多的时间来控制危害。随着交通和运输的进步，现代物种的传
播是个相对比较
快的过程。当然虽然人类的管理和控制技术也有了很大提高，这种快速传播还是给环境
的安全考量带来
了很大挑战。
（3 |
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x*****7
发帖数: 7326 | 14 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: xiaxie7 (xiaxie), 信区: Military
标 题: 不要盲目反对转基因食品
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Feb 28 12:02:27 2010, 美东)
无论什么外源核酸和蛋白质，经过胃肠消化以后，都变成基本的核苷和氨基酸。所以健
康人吃了以后不
会有什么问题。
本虾正在考虑哪些同学不宜吃转基因食品。
1）免疫系统超级敏感的。
2）胃肠道有破损的。
其实1）和 2）有密切的联系，互为因果。大家如果有不明白之处，本虾可以讲解。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 正常/自然情况下是在姐妹染色体之间（因为姐妹染色体才有足够多的相似基因），
在实验室里面经常故意引入有相似序列的外源DNA来进行染色体上的突变 |
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n****y
发帖数: 819 | 17 算semi-synthetic把， because the recipient cell already exists. 而且这个好像
对recipient cell 有很多要求吧， 很可能外源dna会被降解什么的， 而且现在也只是
bacterium to bacterium transplantation. |
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m*****n
发帖数: 760 | 18 本人对siRNA的设计和应用几乎无知，问题比较菜，请大家不要见笑。
需要用siRNA来knockdown一个外源表达的fusion protein(GFP-GOI)，
因为不想影响endogenous GOI，所以想请教能不能设计siRNA只针对GFP，而不是GOI？
这样的siRNA会有效果吗？
另外大家都用什么program来设计siRNA，另外在哪家公司买siRNA啊？
谢谢了。 |
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H****H
发帖数: 11039 | 19 外源表达的干嘛需要knockdown啊？
你不转到细胞里不就行了么？
要用siRNA knockdown GFP-GOI而不影响GOI表达当然可以做到，设计target GFP序列的
siRNA就可以了。 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 20 ☆─────────────────────────────────────☆
coarsening (草枯鹰眼疾，雪尽马蹄轻) 于 (Sun Sep 19 01:05:54 2010, 美东) 提到:
就是最近那个关于老鼠的。下面的西西河link你得login才能看到。
http://www.here4news.com/article/3075164
我赞同直言了先生的观点，PH4CV是转基因育种得到的自交系玉米系。
美国专利US6897363（先锋公司的专利，下面谈到）中，在发明背景详细谈到， 控制玉
米雄性生育是提高育种的可靠方法， 这一方法就是去雄（第一部分55-58行）。 为什
么要用去雄的方法呢？ 这是因为玉米可以同株自花传粉（玉米株顶端的雄穗，传粉给
同株的玉米的雌穗），异株同系传粉，异系传粉。 为了把不同品性集中到一个品种上
，就需要异系传粉，去雄的玉米，作为母体，只能接受外源系的花粉，从而保证育种成
功。
去雄的四个方法，其中三个（手功去雄穗，施杀雄剂，和使用胞浆去雄玉米自交系），
由于繁琐费力，受效果和其它局限，专利中，除杀雄剂提供一篇专利参考外，都是仅仅 |
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e*******c
发帖数: 1479 | 21 最近课题卡在一个病毒表达体系上，我想利用一个病毒体系在我的肿瘤细胞中高表达一
个蛋白，我选择的是Clontech的pLHCX系统，但是利用几个细胞的方法去包装感染细胞
都不出任何稳定细胞系，比如PT67, phoenix 细胞等，请教各位如果有经验的提供点信
息。谢谢 |
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t******y
发帖数: 716 | 23 传统的杂交育种比转基因安全了不知道多少倍。传统的杂交育种都是属于种内杂交，基
本上就是相当于把某些相同蛋白的功能做一些提高或降低的调控，没有涉及到外源蛋白
的表达。而转基因的则完全是机械地，野蛮的，不考虑后果得把其他物种的蛋白，譬如
微生物的bt蛋白，直接安插到作物中。
虽然转入的成分明确，但是引起的后果完全不明确。而杂交育种，只要对亲本和后代做
全基因组测序就可以完全明确差异的来源，因为杂交育种改变的只是蛋白的某个氨基酸
，所以其实质上变化微乎其微，和转基因的盲目和混乱完全不能比较。 |
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o********r
发帖数: 775 | 24 绝大多数外源蛋白未经消化直接进入体内都是强抗原 |
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o********r
发帖数: 775 | 25 你说的长期安全性没有确认这个问题我同意，但是是否因为这个就要完全反对转基因水
稻呢？首先，这个外源蛋白表达本身在食用部分就不多，其次这个蛋白是否对人体有害
也是未知，那么科学的态度是使用，同时加强监测，一旦出现不良反应立即采取措施。
话说手机对人体的危害早就有实验证实，大家也没这么反对啊？前一阵子有paper说
nanoparticle对人体有害，也没见大家蜂拥而入，抵制nano技术，为啥有这样的选择性？ |
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p****n
发帖数: 9263 | 26 受民科影响，现在俺也觉得没有个三十代连续跟踪是没法排除任何东西的长期副作用的
。俺现在宣布大力反对玉米土豆西红柿在中国的种植跟销售。这些由居心不良的传教士
带入中国的外源作物，很可能是针对中国人民的基因武器。虽然中国人已经吃了10几代
了，但这远不足以排除长期食用可能导致的生育力下降导致灭族等可能的副作用。
我再重复一下，我不是要反对吃玉米土豆西红柿，只是在看到证实这些作物长期毒理反
应的证据发表之前 (你们谁见过这样的证据发表过？），提倡一定要推迟大规模种植，
毕竟，这关系到十几亿人跟后代的健康啊，啊啊~~
其实，俺又想了想，民科太保守了，30代也未必就能证明这些作物不会在吃100代或者
1000代以后才开始发病啊。大米在人工种植后人类才食用了不到500代。毕竟，人类的
认知是有限的，迷信科学是变态的，你们谁能测出番茄土豆大米小麦里边所有化学成分
的含量跟毒理特性？在相关数据发表之前，俺代表绿和组织跟乌有之乡，强烈建议人类
暂时只喝西北风过日子，嗯。
一样
Bt |
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s*****o
发帖数: 2490 | 27 赞同你就事论事的态度，虽然我们的观点不同。
关于bt的积累毒性我想说说。蛋白类的toxin一般来说是不符合积累毒性的标准的，因
为他们在体内的代谢非常快，不会造成chronic exposure，也就不会造成chronic
toxicity。据我所知，没有那种蛋白toxin会造成chronic toxicity（如果有，请告知
）。具体到bt toxin，消化模拟有人做过，不过如你所说，这个试验有缺陷，不过即使
bt蛋白不会被降解，也会随着粪便排出体外，不会进入内环境造成chronic exposure；
退一步说即使bt蛋白会被完整的吸收入血液，免疫系统也会清除这些外源蛋白，这个也
是有人做过的（三种途径，口服，呼吸，静脉注射).
所以说对bt蛋白来说，积累毒性的可能性非常非常低。毒理学工作者根据这些毒理学常
识没有做bt的积累毒性试验是可以理解的，就好比在文献上不会看到水的积累毒性一样
，这是个常识问题。
另外，在现在的数据库中还是有bt的积累毒性数据的，不过我没有看到那个参考文献的
原文，所以也没有冒然提出来，链接在这
http://npic.orst.edu/factsheet... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 28 这篇文章从头到尾都是在消化道中检测啊，而且不光是transgenicDNA，还有植物内源
DNA
文章主旨就是说外源DNA会survive到消化道尾端，并且被肠上皮吸收和消化
而这种消化方式 ‘was with no evidence to suggest that recombinant DNA would
be processed in the gut in any manner different from endogenous feed-
ingested genetic material’
民科们能不能花钱请人把文章读懂了再出来吠啊 |
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s*****3
发帖数: 41 | 29 最近在用293T表达外源蛋白,然后用抗体检测蛋白表达水平。 不知道为什么细胞的
viability非常低，我用7-AAD 染色，viability只有50%。请教实验室前辈这可能是什
么原因导致的呢？
我通常 seed 293T cells the day before transfection at the density of 0.5
million/well (6-well plate).
In the afternoon next day transfect 293T cells with plasmids using FugeneHD.
About 36 hours later, detach cells with trypsin and then stain with the
primary antibody on ice for 30 minutes and then incubate with PE-conjugated
secondary antibodies on ice for 30 minutes. FACS analysis is done
immediate... 阅读全帖 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 30 这个很难讲。stable clone 如果只有1个，那你看到的有可能是插入了某个重要区域后
的表型。相反的结果也有可能。stable clone 是真的，你的pool里面可能这个稳定的
外源基因占少数，被掩盖了。估计你要多弄几个stable clone, 然后比较一下。
stable |
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m******5
发帖数: 1383 | 31 HSPB9这个蛋白是不是都激活了
我正在做统计，顺手把这个蛋白排除掉了，我认为这是过表达任何外源蛋白都会引起的
毒性反应
另外，如果是用transient express做表达的话，是否增加1.5倍已经可以视为普通定义
下的3倍以上了？（除以转染效率） |
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C*******e
发帖数: 4348 | 32 也不是所有时候都能把某种方法下不可溶的蛋白变成另一种方法下可溶的
还是要看蛋白的
我只是举个例子说明，所谓“包涵体”不能跟“蛋白不可溶”画等号
我觉得大量过表达外源蛋白的时候
E.coli要那么些蛋白也没有用
也不知道该把它们怎么办
结果就都堆在一起
局部浓度很高
电镜下看就成了“包涵体” |
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i*****g
发帖数: 11893 | 33 我是有人用genetic deletion 清理了外源表达，才开始信iPS
这个retroviral iPS 本身就含有强制表达的基因，有问题很正常
这个EiPS 可能是incomplete reprogramming，
前面还有CNS文献，说retro iPS含有很多gene deletion/duplication，这个也好理解
，细胞是被强制进入cell cycle
iPS是个很有前途的领域，对我而言，最重要的意义不只是ESC- iPS，更重要的意义是
：某种细胞可以用外来表达强制变成另外一种细胞，而且在撤出外来控制之后，能稳定
维持那个‘态’。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 34 你是想要表达外源的ICAM-1？ 还是你想要那个悬浮细胞本身就表达ICAM-1？
如果是前者，你可以用HEK 293T, 如果是后者，那我不知道 |
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s******u
发帖数: 81 | 35 大概筛了多久开始挑克隆？时间太短有太多假阳性，比如2-3周。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 36 汗，就是2周多点。细胞都死光了呀，只留下细胞团克隆了，我就挑了。
为什么会有假阳性啊？是说慢慢的，那些表达蛋白的细胞又会死掉吗？ |
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B******o
发帖数: 496 | 37 你质粒转染前切成单链了么？如果没切过，质粒在整合到染色体上前会随机的断在某个
位置，如果正好在你的目标蛋白coding sequence里蛋白就挂了，所以是可能出现假阳
性的 |
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H****s
发帖数: 301 | 38 对于puromycin抗性的克隆筛选来说，这种情况是非常普遍的。看看你的载体吧，如果
标靶基因和puromycin抗性是由不同的启动子驱动的，那么你运气不太好，需要多筛选
克隆。主要有两种解释：（1）lentiviral/retroviral载体介导的异源表达，很普遍的
一个现象是整合到基因组的序列被flanking genomic sequences灭活。具体怎么回事，
现在还不太好解释。（2）低表达或者是不表达的细胞outgrow表达标靶蛋白的细胞，所
以，几代以后，你基本上丧失标靶蛋白的表达。
有两个建议：
（1）。使用抗性基因和标靶基因被同一启动子驱动的载体。标靶基因和抗性基因中间
有IRES。这样，产生抗性的细胞系必然表达标靶蛋白。如果被flanking genomic
sequences灭活的话，细胞会死亡，因为抗性丢失。
（2）。如果筛选到合适的细胞系，在前面几代要多冻存细胞。这样在后面的实验中你
不会丢失辛辛苦苦得来的细胞系。 |
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j******i
发帖数: 939 | 40 It's not surprising that transgene is silenced after two weeks or longer
time. The reason could be inserted into heterochromatin, or methylation.
However, those colonies might still be resistant to puro because of high
density. |
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a********p
发帖数: 94 | 41 在Hela之类的比较好养的细胞中表达一个酶，用CMV之类的质粒，如果wt中有这个酶的
表达，但是
不高，那么转染筛选之后能得到一个比较高的表达么，比如10fold或者100fold higher
？ 还是说
这个问题要具体情况具体分析，如果这个酶的高表达对细胞生长或者生存不利，那么很
可能就得不
到比较高表达的细胞株？
新手诚心请教 |
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o*****r
发帖数: 156 | 42 May I ask what't the purpose of the expression of your recombinant protein?
If you want to use some mammalian cell line (such as Hela) to produce and
purify protein to mg quantity,
(assume you can not get it from E coli, yeast, insect cells, or the protein
has some post-translation
modification that only occurs in mammalian cells) you'd better have the
protein secreted into the medium, so
that 1) yield will be higher; 2) less toxic to the cells.
If you just want to see how the cells behave/react... 阅读全帖 |
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g*********d
发帖数: 233 | 43 MicroRNA 和病毒
作者：王磊
上海交通大学生命学院研究生
摘要：
microRNA(miRNA)是真核生物体内一组内源性的 21—25nt 长的非编码蛋白质的短序列
RNA，它们能通过碱基配对的方式与生物体中的 mRNA 分子相结合来参与调节基因的表
达。自 2000 年至今，miRNA 的研究发展的速度极快并且影响的范围也非常的广泛，而
且分别在2002年和2003年度中miRNA入选了Science杂志年度十大科技突破。因此，
miRNA是 RNA 研究的又一个突破，被称为 RNA 的第二次革命。目前的研究已发现
miRNA 参与了很多重要的生命活动过程涵盖了发育、凋亡、代谢、人类疾病以及病毒侵
染等方面。在病毒侵染宿主和宿主抵抗病毒的过程中病毒编码的 miRNAs 和宿主编码的
miRNAs 均发挥了重要的作用。这无疑为病毒的侵染以及宿主抵抗病毒的侵染的研究提
供了新的思路和新的领域。因此，本文的主要目的在于阐述 miRNA 的一些基本概况以
及在病毒中主要的研究方向和进展，最后对这个具有跨时代意义的小分子进行展望。
关键词：miRNA vmiRNA 功能 宿主的 miR... 阅读全帖 |
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g*********d
发帖数: 233 | 44 RNA干扰及其在动物繁殖中的应用
2009-12-28
RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是生物进化过程中遗留下来的一种在转录后通
过 RNA 调控基因表达的机制, 它是指在真核细胞中引入双链 RNA分子从而导致具有序
列同源性的基因产生特异性基因沉默 (gene silencing)的现象 。由于 RNA干扰可以阻
断特定的基因表达, 具有超越疫苗和抗病毒药物的诸多优点, 因此在阐述基因功能以及
蛋白质相互作用等方面, 表现出诱人的前景。近年来随着分子生物学的发展, RNAi 的
机制也不断被阐明, 同时国内外研究也证实 RNAi 技术可以为动物繁殖过程中所涉及的
基因功能提供一条新的思路, 这在科研和生产实践上都具有重要的意义。
1 RNAi的发现
Matzke 等于 1989 年报道了启动子介导的序列同源性基因共转染烟草可引起转
基因表达发生沉默。 1990 年, Napoli 和 Van der Krol 等为了让矮牵牛花的颜色更
加鲜艳, 把与紫色相关的查尔酮(chalcone)基因转染到牵牛花内, 结果意外发现, 植物
体的颜色... 阅读全帖 |
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o*****r
发帖数: 156 | 45 这个很难吧？什么时候诱导呢？ 12h之后喷雾？
关键是就算诱导表达了，也不好检测吧。
不知到你有多少个克隆。 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 46 不能直接加到Agar里面吗？我做蓝白斑就是直接配平板的时候加IPTG的 |
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h**********r
发帖数: 671 | 47 IPTG不能直接加到agar里，如果加的话阳性克隆会不长，这是鉴定阳性克隆（例如T7
promoter）的方法之一。
好像液体生长有一种类似于lactose诱导的混合培养基，等glucose用完之后自动诱导，
不记得了，不知道用到agar里可行不。挺麻烦的吧。
另外考虑用非诱的启动子。
我要做个directed evolution，有了一个比较好的筛选assay。看别人动不动就Liquid
Handling/Robotic Lab Automation，所以心里没底。故此一问，想先平板初筛一下。
没有这方面的经验，心里发毛。
谢谢！ |
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s*******e
发帖数: 1010 | 48 F. William Studier有一篇“Protein Production by Auto-Induction in High-
Density Shaking Cultures”就是做的自动诱导，你可以借鉴一下看看能不能用到Agar
上面
Liquid |
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