M****o
发帖数: 4860 | 1 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: MVPYao (退役了), 信区: Military
标 题: 北大教授孔庆东曝光莫言1962年春天的照片，称其迷失真我
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 9 04:55:02 2015, 美东)
莫言8岁照片
孔庆东微博截图
你见过诺贝尔文学奖获得者莫言8岁时候的样子吗？今天上午，北京大学中文系教
授孔庆东发布微博：“文学虚构可以改变真实记忆，甚至作家也会迷失真我。某作家常
写自己小时候饥寒交迫，这是他1962年春天的照片。”
没错，照片中的小男孩正是作家莫言。不过，照片一经发出，就引来不少网友质疑
。网友@裸奔的渔父：“这张照片拍得真不是时候！时间：1962年春——‘莫言的童年
正值中国近代史上最悲惨的一段时期，所谓的三年困难时期，全国饿殍遍野，莫言曾在
香港公开大学演讲时回忆道’。年龄：8岁——穷得光着身子到处跑，狗一样把任何能
吃的东西塞进嘴里，十岁前不知道啥是照相！” @天高云淡T01：“都饿成莫小胖了啊
！”
是啊，多次讲述童年时艰辛经历、备受饥饿煎熬、穿不起衣服的莫言看上去跟现在
并没有太大的差... 阅读全帖 |
|
B*D
发帖数: 5016 | 2 我的尺子总没错吧？
matx的标准不是244x244么？
我的gigabyte的785的板，标准尺寸。244x244
但是这个MSI的H55，尺寸是24.4 x 24.0 cm ，官方也是这样写的
所以和标准差了4个毫米
于是靠近主板后部的2个孔悲剧了，和底板的支撑差2个毫米...
我也很奇怪，怎么会有这样的事情，以前只固定前面六个孔，所以没有注意到
这次想把8个孔都固定住...
小。 |
|
Q**********r
发帖数: 75 | 3 我帝众多生医科技公司，生产的试剂盒质量可靠，价格合理。一个96孔板的试剂盒也就
几百刀而已。
我帝众多大学、研究所、公司、官方机构的实验室，拥有无数台扩增机。按照全国指定
100台机器投入疫情监测（平均每个州只有2台机器投入运转），每台机器每天只跑3个
96孔板计算，全国每天也可以检测7500个样本。
不放开检测，是真的心里有底？还是没胆？ |
|
b**********8
发帖数: 349 | 4 有的问题已经在别的帖子里发过了，但是关注度不够，到现在没得到答复，现在贴到这
里归个总，大家一定要帮帮我，凡是看过这个帖子的都给我点意见吧，特别是艳阳天MM
啊，Oncogene版主啊，给点权威的意见吧，小弟先谢谢你们了
问题1，
最近做dual luciferase reporter assay，主要是想看在癌细胞中敲除某一基因A后，
对另一基因B启动子活性的影响。（已经证实敲除A后能下调B的mRNA转录和翻译表达）
。我尝试过两种不同的转染顺序，如下：
1）24 well plate铺板，第二天转染A的siRNA,第三天转染B的启动子报告基因质粒，第
四天收细胞assay，发现siControl和siA的renilla的读数相差很大，有时能达到10倍左
右，出来的ratio也经常是千奇百怪，忽高忽低，难以解释，
2）考虑到可能是先转染siRNA会影响后续质粒的转染效率。于是换方案，先在6孔板中
铺板，第二天转染质粒，过夜后换液，转染24小时候胰酶消化，将细胞铺到24孔板中，
24小时后再分别转染siControl和siA，出来的结果漂亮多了，至少data不像前一种方案
那么难看了。... 阅读全帖 |
|
m*****u
发帖数: 15526 | 5 我没在96孔板铺过。因为体积小，methylcellulose又很粘，很难控制体积精确。我只
用6孔板或35mm培养皿做这个。可以用agar也可以用methylcellulose。
methylcellulose stemcell有专门产品，所以很方便。用agar要自己配，热的时候混合
细胞和多种细胞因子，高温时又得保证不杀死细胞和不使细胞因子失活。并不好操作。 |
|
w********r
发帖数: 1431 | 6 听你的意思是要收mix population,而不是single colony
我的经验是，这种混起来的stable cell通常表达很差，
最好挑好多单个的克隆，然后选几个表达高的，然后每次实验的时候两三个Stable
line 一起用。
我们的策略是在24孔板里做transfection,然后分到6cm开始加药杀，再把细胞分到若干
10cm的盘子里继续杀，关键是密度不能高，要保证最后可以挑到单克隆。调出来的单克
隆放到24孔板里慢慢养，同时做WB检测表达。表达好的就留下，表达不好的就扔掉。
1 |
|
b*******0
发帖数: 125 | 7 想做甲基化的问题，
细胞是 6孔板培养的，估计有1X106细胞，而Kit说适应于10 - 105 cells。并且For
optimal results, the cell number should be from 1 x 103 - 8 x 104 cells。 如
何看来此KIT 不适用于6孔板培养的细胞? 因为细胞太多，bisulfite conversion 不
充分？ 有木有童鞋 有经验？ |
|
I***a
发帖数: 13467 | 8 没什么经验，
细胞是 OKF6／TERT2，表皮细胞系
试了很多条件，
先是用GFP在96孔板上筛选了几个条件，比如不同，细胞密度，感染时间，DNA:
reagent的比率，
找到一个比较合适的条件，
但是再到12孔板上做，然后做q-PCR验证，发现靶基因表达没有变化，
还有什么办法没有？
另外，对qPCR验证的引物，有特别注意的地方吗？ |
|
U*O
发帖数: 99 | 9 想在96孔板里面检测液体中的荧光分子，但浓度非常低，总量在fmol量级或者更低
试了好几种酶标仪都不够灵敏（虽然有些标了可以检测fmol量级，但实际通常达不到）
请问除了用fluoremeter还有什么推荐的方法？目前用的是costar的全黑96孔板，顶读
模式
谢谢！ |
|
b******k
发帖数: 2321 | 10 本来想搭一个荧光显微镜加一个电动步进的平台，用来给96孔板照相，结果几家仪器公
司来推他们带成像功能的microplate reader，比如biotek的cytation3，MD的i3等等，
看照片的话似乎成像质量也不错了，不比一般的荧光显微镜差多少，而且这样的系统能
很好的配高通量系统，比如机器手和liquid handing system，价格也不贵，着实吸引
人。
不知道有没有用过类似系统的说说看到底怎么样？拍出来的照片有发表质量么？能替代
一般的荧光显微镜么？我们主要就是在96孔板里面养zebrafish larvae，看各种荧光标
记的变化，会做一些中小规模的化合物筛选。 |
|
s*****g
发帖数: 7857 | 11 1。在dish里铺很少细胞，长起来后在显微镜下面挑单克隆到96well里养
这得克隆长多大啊，还得肉眼厉害。。。。
2。稀释分散到96孔板
好主意，悬浮细胞我就这么做来着
3。FACS SORT 到96孔板
这得带标记啊。有时GFP啥的未必是好东东。
4。等克隆长大一点，用带大概20ul培养液的枪头搓几下，然后吸上来不就行了吗？
问题是一个平皿里有很多单克隆。如果这样就只能采一个克隆。否则细胞扩散，不就把其
他克隆的细胞搞混了么？
5。C1059 SIGMA sterile cloning cylinders with grease
这是我以前传统用的手法。
现显微镜小标记，然后用cylinders with grease（trypsin)选出来，再放在小dish里
扩增。。。
谢谢各位亲们的宝贵建议！！！ |
|
f*******d
发帖数: 92 | 12 多谢各位前辈指点！
再问一下筛选的方法。是不是平板转化之后两三天换成抗性筛选培养基，然后一个星期
之后细胞死了一大半只剩下稳定转化的了，这个时候就稀释，然后seed 1－2个细胞到
96孔板里养single colony?
这个还是工作量挺大大，显微镜下面96个孔全部看一遍都要好久，如果几个板看下来一
天就不用干其它活了。。。。
大家通常筛选有啥简单有效的好办法呢？ |
|
发帖数: 1 | 13 思路挺好的，我也非常同意通过挑无数克隆再去做genotyping的工作量是非常恐怖的。
我不知道你是在思考这个strategy还是已经付出实践。如果你做的是human ESC，根据
我们实验室以及我一些朋友的经验，通过FACS把单细胞sort到96孔板里，即使全程都加
了ROCKi，存活效率非常之低，低得令人发指，和mouse ESC完全不是一个数量级的。我
的经验是大概一个96孔板能活5个左右，但是还不能确定karyotypes是不是正确的，以
及可能的假阳性。我更倾向于推荐使用drug resistent markers，比如一个puro，一个
neo。虽然neo的假阳性偏高些，但是single cell colony的survival要好非常多。同时
可以像你原本design那样加一个negative selection marker，比如GFP。
还有一个可能对你有用的hint是：可以设计两个gRNA去切除一段genomic DNA，然后只
用一个引入point mutation的donor （带puro）去做homologous recombination。可以
现在293细... 阅读全帖 |
|
m*****r
发帖数: 1164 | 14 看要做的通量以及assay，96孔板的absorbance，luminescence和fluorescence话任何
机器都能handle。384和1536孔板的话只推荐bmg最新的pherastar，以及十几年未更新
的perkin elmer的envison。这俩基本任何assay，包括FP，TRFRET，BRET，都能做的很
好很快。当然价格上这俩也是最贵的。bmg的软件设计很烂，不怎么user friendly。但
听说以为客户complained的太多，软件已经改进了很多。性能上bmg的在慢慢赶超
envision。 |
|
T****i
发帖数: 15191 | 15 计算机属于上游产业，无论什么行业都需要。即使IT业发展这么多年，仍然有很多角落
没有被IT的光芒照耀到。各行各业都有海量数据，维护和分析都是很大挑战，老数据库
老软件的升级换代，都等着人来解决。更别提自动化和人工智能方面的需求，只会越来
越多。比如我工作涉及到的一些数据库管理和数据分析，公司里一直靠半手工，效率低
，效果差，麻烦。我入职后，折腾了一段时间，终于想了个办法，找了几个人准备搞软
件包来自动分析，搞完了，就可以让大家把精力放在其他暂时还不适合自动化但非常重
要的工作上，比如跟客户沟通，产品设计。
生物有一天也会自动化，比如HHMI就有四台机器，自动給果蝇换培养瓶。公司里面，就
是做genotyping, 一般也都想法high throughput了，要么直接sequencing，要么
allele-specific QPCR，Taqman，96孔板或者384孔板，没人跑胶。连western一样半自
动化，原先得雇几个千老跑胶转膜加抗体，现在只需要一个技术员加样就行了。实验记
录也完全电子化，到处barcode。而这些只会降低对只懂生物的千老和学生的需求，增
加对计算机专业的需... 阅读全帖 |
|
a*d
发帖数: 1030 | 16 从回帖就可以看出素质了
，中共重庆市委书记薄熙来在重庆市委三届九次全会上关于共同富裕的讲话，立场坚定
、旗帜鲜明地说出了广大老百姓的担心与忧虑，说出了真正的共产党人坚持走社会主义
道路，践行共产党的宗旨，实现共同富裕的理想与愿望。
话 中共重庆市委三届九次全会精神”专栏中刊登了专访孔庆东的内容。
发展新路，这样的探索与创新，放在全国范围内都具有示范意义。看待重庆实践，还需
要有更宽广的历史视野。如今中国经济发展了，GDP已经达到世界第二，但贫富差距、
城乡差距却急剧扩大，两极分化日趋严重，老百姓能没意见吗？
“任何把政治、经济、文化简单分开来看的做法，都是不可取的。按照一般人的理解，
打黑应该属于政治议题，唱红是文化议题，共同富裕可以算作经济议题。”
害部门，重庆现在能提出共同富裕吗？你提共同富裕，这些黑恶势力肯定不答应，因为
你要把他吃得好好的蛋糕分一部分给普通百姓，这就损害了他们的既得利益。重庆现在
旗帜鲜明地提出共同富裕，还出台了具体的措施，就在于那些阻力被打掉了。正气弘扬
了，老百姓的心声就能充分表达，整个社会才能沿着一条正确的道路前进。”
东表示，作为一名研究文化的学者，他... 阅读全帖 |
|
r*******n
发帖数: 3020 | 17 我老又出来现眼了,要不你们都把我忘了
，中共重庆市委书记薄熙来在重庆市委三届九次全会上关于共同富裕的讲话，立场坚定
、旗帜鲜明地说出了广大老百姓的担心与忧虑，说出了真正的共产党人坚持走社会主义
道路，践行共产党的宗旨，实现共同富裕的理想与愿望。
话 中共重庆市委三届九次全会精神”专栏中刊登了专访孔庆东的内容。
发展新路，这样的探索与创新，放在全国范围内都具有示范意义。看待重庆实践，还需
要有更宽广的历史视野。如今中国经济发展了，GDP已经达到世界第二，但贫富差距、
城乡差距却急剧扩大，两极分化日趋严重，老百姓能没意见吗？
“任何把政治、经济、文化简单分开来看的做法，都是不可取的。按照一般人的理解，
打黑应该属于政治议题，唱红是文化议题，共同富裕可以算作经济议题。”
害部门，重庆现在能提出共同富裕吗？你提共同富裕，这些黑恶势力肯定不答应，因为
你要把他吃得好好的蛋糕分一部分给普通百姓，这就损害了他们的既得利益。重庆现在
旗帜鲜明地提出共同富裕，还出台了具体的措施，就在于那些阻力被打掉了。正气弘扬
了，老百姓的心声就能充分表达，整个社会才能沿着一条正确的道路前进。”
东表示，作为一名研究... 阅读全帖 |
|
c***s
发帖数: 70028 | 18 你见过诺贝尔文学奖获得者莫言8岁时候的样子吗？今天上午，北京大学中文系教授孔庆东发布微博：“文学虚构可以改变真实记忆，甚至作家也会迷失真我。某作家常写自己小时候饥寒交迫，这是他1962年春天的照片。”
莫言8岁照片
没错，照片中的小男孩正是作家莫言。不过，照片一经发出，就引来不少网友质疑。网友@裸奔的渔父：“这张照片拍得真不是时候！时间：1962年春——‘莫言的童年正值中国近代史上最悲惨的一段时期，所谓的三年困难时期，全国饿殍遍野，莫言曾在香港公开大学演讲时回忆道’。年龄：8岁——穷得光着身子到处跑，狗一样把任何能吃的东西塞进嘴里，十岁前不知道啥是照相！” @天高云淡T01：“都饿成莫小胖了啊！”
孔庆东微博截图
是啊，多次讲述童年时艰辛经历、备受饥饿煎熬、穿不起衣服的莫言看上去跟现在并没有太大的差别，算不上白白胖胖，但也没有很消瘦，身上还穿着棉袄。难道莫言自己的记忆出现了差错？
莫言出生于 1955 年 2 月 17 日，农历乙未，正月二十五，属羊。这是山东省高密县河崖乡平安庄的一个普通农民家庭，家庭成分为富裕中农。
莫言在散文《超越故乡》中曾经这样描述自己的诞生：“1955 年春天... 阅读全帖 |
|
j*******n
发帖数: 10868 | 19 我觉得没那么复杂，孔本质上和北美wsn没啥区别，白天被老板欺负了，晚上做梦跟老
板拍桌子，孔和尚当时大概只说了句去他妈的，回头越想越不爽，纠结到最后产生幻觉
于是就在微博上三妈了 |
|
b***l
发帖数: 812 | 20 孔庆东
回复@付哥98:看上去挺文弱的，可有学问了。 //@付哥98:大汉奸，多大 //@孔庆东:环
球时报受到大汉奸的高压，不敢秉公评论。
◆◆
@杜建国微博新浪个人认证 ： 腾讯组织专辑“反对群殴吴法天”，指明“吴法天
不是主动骂人‘鸡婆’，是回骂”，“吴法天不是约打架，而是约辩论”，等等，还算
公道，出乎意料。环球时报社论，对双方各打五十大板，而对“群殴”一事只字不提，
只一句“呼吁警方对‘约架’中真正动手开打的人给予治安处分”，窃以为不太公道。 |
|
M****o
发帖数: 4860 | 21 莫言8岁照片
孔庆东微博截图
你见过诺贝尔文学奖获得者莫言8岁时候的样子吗？今天上午，北京大学中文系教
授孔庆东发布微博：“文学虚构可以改变真实记忆，甚至作家也会迷失真我。某作家常
写自己小时候饥寒交迫，这是他1962年春天的照片。”
没错，照片中的小男孩正是作家莫言。不过，照片一经发出，就引来不少网友质疑
。网友@裸奔的渔父：“这张照片拍得真不是时候！时间：1962年春——‘莫言的童年
正值中国近代史上最悲惨的一段时期，所谓的三年困难时期，全国饿殍遍野，莫言曾在
香港公开大学演讲时回忆道’。年龄：8岁——穷得光着身子到处跑，狗一样把任何能
吃的东西塞进嘴里，十岁前不知道啥是照相！” @天高云淡T01：“都饿成莫小胖了啊
！”
是啊，多次讲述童年时艰辛经历、备受饥饿煎熬、穿不起衣服的莫言看上去跟现在
并没有太大的差别，算不上白白胖胖，但也没有很消瘦，身上还穿着棉袄。难道莫言自
己的记忆出现了差错？
莫言出生于 1955 年 2 月 17 日，农历乙未，正月二十五，属羊。这是山东省高
密县河崖乡平安庄的一个普通农民家庭，家庭成分为富裕中农。
莫言在散文《超越故乡》中曾经这样描述自己的诞生... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 22 孔庆东：文革时期的文艺
2018-03-07 11:24:44 来源：红歌会网 作者：孔庆东
点击：527 评论： 0（查看）
0
样板戏这个词大家都知道，但是关于样板戏的谬论太多了。政治上的我们不管，我
们就管学术上的、事实上的。
第一个谬论是：样板戏只有八个。动不动就说“八个样板戏嘛”。第二个谬论是：
样板戏就是八部现代京戏。第三个谬论是：全盘否定文革时期中国人的精神生活。说：
“文革有什么好的?文革时候中国人的生活特别贫乏。”叫“八亿人民八个戏”。全中
国八亿人民，成天看八个戏。这是流传最广的一个谬论，是对那十年八亿中国人民精神
生活的严重污蔑!等于说我们都不是人，等于说我和我的父辈都在地狱里活了十年。我
们明明在天堂里活了十年，把它污蔑成地狱。
这种谬论不一定是坏人说的，很多好人由于自己不重视历史，不注意读书，自己经
过的历史都记不清楚，也跟着乱说。曾经有个老教授——一个老太太，她对我很好——
她就是全盘否定文革的。她有一次语重心长地对我说：“庆东啊，文革太坏了，那个时
候八亿人民只有八个戏啊。”对这个老太太，我无语，我没办法去打击她的心理，我只
好什么也不说。
前几年... 阅读全帖 |
|
s********n
发帖数: 2939 | 23 我记得96孔板有一种是有滤筛的，一般情况下孔里的液体不会流出，只有在在下方加
vaccum吸才能去除，不知道有没有384孔的，如果有的话可以解决你的问题。 |
|
y**i
发帖数: 1050 | 24 谁要低吸附Ultra-low attachment 96 plate
各位同行大家好，本人现在有两箱 Ultra－low attachment（低吸附）的96孔板，
Corning的，未
拆封，完全新的，由于实验室订的多了，现在由我来出售，具体型号如下，
Costar 96 well plate with lid, flat bottom, ultra-low attachment surface
sterile, polystyrene,
1/PACK, 23/CASE, Lot No: 24210010
Corning No: 3474
Corning Incorporated
Made in USA
原价：Case of 24 for $267.80，现以便宜出售，
该板，我们实验室用来养tumorsphere,干细胞球等，所以如果哪位同行对该板有兴趣，
可以与我联
系，总共两箱，先到先得。可以通过EMAIL与我联系 我会及时和你联系。该板我会邮寄
给您。绝对低于
市场价格。
谢谢 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 25 我的意思是这两种不同浓度的细胞的培养液必须相连同。
反正我的意思就是你得分开到底是细胞浓度还是细胞释放的因子引起的现象。
我记忆中有一种培养皿是中间有坎的，几种不同的细胞可以放在一起培养的，
可以用这个来区分到底是培养的总浓度还是细胞连接的问题。
如果用96孔板。。。每隔一个孔就放一种不同的细胞浓度，
然后把培养液多灌一点，灌到涨出来把所有孔都淹了，或许就可以了。 |
|
f********s
发帖数: 115 | 26 想请教一个实验问题：有没有人尝试过用液体培养基加细胞因子来分化过细胞？
我想做这样一个实验，把MEP用FACS分选出来，然后在每一个96孔板的孔里面放一个细
胞。分化7天以后把这个孔里的细胞cytospin + staining， 然后看每个MEP都能分化成
什么种类的子细胞。用这个实验来比较wt 和mut 的区别。我看到一个protocol， 用
IMDM+ SCF，IL3, IL11, GM-SCF, FLT3-Ligand, TPＯ和EPO 来养细胞。我没有做过液
体培养基，一般用的都是methylcult medium,所以不知道液体培养基的效果好不好。有
没有有经验的人来说一说呢？
不知道在哪里看到说semi-solid的培养基比纯液体好，但是考虑到最后要cytospin,
semi-solid的培养基太粘了，洗一下的话又怕细胞丢失太多，因为本来一个细胞就分化
不出太多细胞。
多谢多谢！！ |
|
s********r
发帖数: 312 | 27 我是biorad的那个loading buffer,950ul+50ul beta-ME,然后用水1:1稀释。直接加到
孔里，一般12孔板一个孔100-250ul，晃一晃等2分钟，然后200ul的tip前面剪掉，刮一
刮收起来，煮沸上样。 |
|
v*******a
发帖数: 759 | 28 稀释后直接养在96孔板，每孔0.5-1个细胞，过一周左右显微镜下标记长单克隆的孔，
然后扩增就好 |
|
c****s
发帖数: 1281 | 29 深圳銀行銅板短缺 超商糖果當零錢找
http://www.nownews.com/2010/02/13/162-2559178.htm
大陸新聞中心／綜合報導
買東西找零錢是正常的交易行為，但在大陸深圳部分地區，卻因為銀行缺少銅板，商店
及超市逼不得已，只能以糖果或果凍來代替找給顧客，形成相當奇特的現象。
記者帶著針孔攝影機走進一家規模不小的超市，買完東西找零錢時，收銀員拿出來的卻
是糖果。收銀員說：「一(角)錢一個。」再走訪了附近好幾家商店，情況都是一樣，找
糖果、找果凍，就是不找零錢。收銀員指出：「每次都被顧客罵得要死，我們也想找錢
啊！就是換不到零錢。」
記者詢問街上一位民眾：「我想請問一下，你剛才是不是在超市買東西，然後找給你糖
了？」民眾回答：「是啊！」記者又問：「是你自己要的嗎？」民眾說：「不是啊！咱
們這的超商個個都這樣。」雖然神情看起來有點不高興，但民眾似乎也習以為常。
這種奇特的現象怎麼會發生呢？記者追蹤調查，發現店家也是不得已，因為問題癥結是
來自銀行。銀行人員表示，「我們現在是一點零錢都沒有，我怎麼給你換，是不是？欠
客戶幾(角)錢也付不了，5(角)以下的我們都付 |
|
i***0
发帖数: 160 | 30 转染48h后，转到100 mm plate上，加药，每三天换一次液，一至两周后去掉药，等细
胞长满，分到新的100 mm 板上， 一千，500， 200 个细胞/板， 观察单克隆， 用灭
菌滤纸（3mm直径）占trypsin用灭过菌的镊子夹着在单克隆上一抹，然后把滤纸放入新
鲜培养液中（24孔板），immunostain，WB，来确认单克隆的表达量和表达均一性。 |
|
l***y
发帖数: 4671 | 31 比如说，有这样一个 hypothesis：两种药的 targets 越不相干，那么这两种药的
synergism 就越好。手头有一两百种药的某几个癌症的 cell line 上的 microarray
数据以及 IC50，那么就要先用图论的工具和几种备选的图模型来两两计算药的相干性
，得出基准分布，进一步算出每对药的组合的大家深恶痛绝的 p-values，然后根据要
使用的统计模型设计抽样方式来保证正交性的同时尽量减少样本量。然后上 384 孔板
，测数据，用事先选的统计模型分析来看哪种图模型最好地符合 hypothesis，同时看
这时 hypothesis 是否靠谱。然后用这种图模型预测最佳和最差的药的组合，重新上
384 板验证。在图上找到最佳组合的关键节点，k/d 或者 inhibit 之，再上 384 板验
证。最后根据经费和信心，要么 in vitro 上病人的细胞，要么 in vivo 在老鼠上种
cell line，再重复一下最佳和最差的药的组合。
做完这个 project 后，把数据给数学家们来做 classification，找出能最好预测
synergism 的图... 阅读全帖 |
|
l***y
发帖数: 4671 | 32 比如说，有这样一个 hypothesis：两种药的 targets 越不相干，那么这两种药的
synergism 就越好。手头有一两百种药的某几个癌症的 cell line 上的 microarray
数据以及 IC50，那么就要先用图论的工具和几种备选的图模型来两两计算药的相干性
，得出基准分布，进一步算出每对药的组合的大家深恶痛绝的 p-values，然后根据要
使用的统计模型设计抽样方式来保证正交性的同时尽量减少样本量。然后上 384 孔板
，测数据，用事先选的统计模型分析来看哪种图模型最好地符合 hypothesis，同时看
这时 hypothesis 是否靠谱。然后用这种图模型预测最佳和最差的药的组合，重新上
384 板验证。在图上找到最佳组合的关键节点，k/d 或者 inhibit 之，再上 384 板验
证。最后根据经费和信心，要么 in vitro 上病人的细胞，要么 in vivo 在老鼠上种
cell line，再重复一下最佳和最差的药的组合。
做完这个 project 后，把数据给数学家们来做 classification，找出能最好预测
synergism 的图... 阅读全帖 |
|
y***u
发帖数: 7039 | 33 孔庆东：国企的钱就是大家的钱，把它改成民企之后，不是我们大家的了，只是老
板的，这个问题大家必须清楚认识到，国企有很多问题存在，但是是不是到了国企真的
就垮了，真的办不下去了吗，真的搬倒了吗? |
|
n*****8
发帖数: 19630 | 34 要是拿老毛出来，你连老毛一块儿骂了。
要是拿孔圣人出来，你连孔圣人一起骂了。
要是拿半仙出来，你不骂了，可是脏了咱菌斑
因此只好拿圣经出来，给你一些做人的智慧：
Luke 6:37 ESV / 1,607 helpful votes
“Judge not, and you will not be judged; condemn not, and you will not be
condemned; forgive, and you will be forgiven;
Romans 2:1-3 ESV / 616 helpful votes
Therefore you have no excuse, O man, every one of you who judges. For in
passing judgment on another you condemn yourself, because you, the judge,
practice the very same things. We know that the judgment of God rightly
falls on... 阅读全帖 |
|
f*****y
发帖数: 142 | 35 去HF买一个center punch可以打出第一个位置，
要那种spring loaded，俺的打折的时候$1.99，原价$3.99吧。
好处在于不用榔头敲，直接用手按住，到力量时候，spring自己一松，
就能瞬间打出非常好的圆坑。
然后钻子一定要钻速低。俺一般用500-800之间，要最好可以控
制速度的那种。选择合适的钻头大小，然后按住给中等的压力。
如果钻不进去，尽量不要overload，防止钻头断裂。
应该检查钻头是否锋利。照道理应该是比较容易钻进去的。
钻头就用那种high speed steel (HSS)就可以了。
如果要好一点，选titanium coating的，那种金黄色的。
钻的中间，注意保持钻子和孔的垂直。尤其是到后面的时候，
防止突然负载消失，折断drill bits。
那些bits不值钱，$4可以买一袋子，20-30个。关键是断了非常危险，
可能会把眼睛弄伤，而且断在孔里也不是什么好事情。
记着尽量带上保护眼镜。 |
|
b*********1
发帖数: 1054 | 36 握手，看来俺们是一类人，就是穷家出身。总有担心的感觉，连二氧化碳罐我都有两个
满的备份，其实一罐能用4个月呢。各种培养皿，96孔，24孔板，人家不要的玻璃仪器
，到处减破烂。
昨天我博士导师发信问我，终于要给别人腾实验室了，清理实验室发现当年我做的200
多化合物，问要不要给我邮寄来。其实我们实验室毕业30多博士，十几个薄厚，积累了
起码上千化合物。我很想弄来。可是导师说没时间了，除非我自己去清理。别人的化合
物比较乱，不象我规整的很清除。很多化合物只有标号，还要对着记录本找结构，没有
两个礼拜别想弄清楚，所以他就扔了。
导师终于要完全退休，清理完了就再不去学校了。哎，我这拣破烂的习惯他都记着，要
不马上就联系我。
这可能都是小时候留下的印记吧！家里的面粉，大米经常都是两袋，一种备战备荒的赶
脚！油也是经常两大桶，更不用说牙膏，牙刷，厕所纸等， |
|
w*********o
发帖数: 830 | 37 偶是一个刚开始工作的新人，最近碰上一件事向大家征求意见：
现在做的一个project跟同组的一个女同事（硕士，在这个部门工作3年了）合作，但是
这个同事做事情特别马虎，接连犯各
种各样的低级错误，归咎到底就是做事情不认真。给大家举个例子吧：我们是做细胞培
养的，有次她给细胞换培养基（培养
基就是给细胞提供吃的），结果这个大姐把旧的培养基从培养器中取走后，竟然把新的
培养基加到别的地方去了（用的是
24孔板，只用了两个孔养细胞，结果这个大姐就把培养基加错地方了，如果是学生物的
这样说比较好懂）。如果里面只有
细胞，你看错了好说，但是里面明显还有其他东西，即使个高度近视的人，只要看一眼
就知道啊。结果细胞被饿了至少4个
小时，直到我想重新看细胞才发现，但是已经晚了。这样低级的错误她在不到3个月的
时间里，不知道已经犯了多少次了，
我都会替她cover一下，并且已经照顾了大部分的细胞。
但是最近她养的一种细胞出问题了（不是第一次，以前我跟另外一个人替她补救过），
结果lab manager就知道了。今天她
跟lab manager聊了，然后lab manager来找我，问情况，我说了一点她的... 阅读全帖 |
|
|
Y********3
发帖数: 2551 | 39 孔卡本来本场登场就是板上定钉的事，烟雾弹而已。 |
|
D***e
发帖数: 48486 | 40 名气比孔卡大不一定，徐老板现在要合理出价
得是艾尔克森模式了 |
|
V********n
发帖数: 3061 | 41 孔庆东就是个猪头，他讲的话向来荒腔走板的。他应该早生几十年，让他生活在他的偶
像毛泽东的时代，要么给毛擦鞋舔腚，或者被毛整死，就遂了他的愿了！ |
|
s********r
发帖数: 2308 | 42 所以说一开始断章取义曲解孔和尚成为群骂的煞笔媒体最该挨板子，该打1200板 |
|
p****n
发帖数: 9263 | 43 钱未必付了吧？
技术进步还真快，杨矮子起家时候就两台测序仪，每天能做20来块96孔板，每孔能读出
400来个碱基，
就敢揽那1%的活，牛逼啊 |
|
s******s
发帖数: 13035 | 44 RNA和Protein的corellation当然没那么强，不过不管是精度还是效率上
来说， FISH强太多了。想想药厂做screen, 几万个drug也就是100片384孔
板养的细胞，每个孔同时检测五六个marker的表达，就算要换一组基因看
也就换点probe, 多方便啊。 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 45 Northern for genome-wide, no way!
花2年的时候做这个screening，浪费的时间和人力成本远高过于其他方法，这个道理你
老板不会不懂，他可能只是不在乎而已。高通量的方法初筛然后结合Northern来确认，
相信这是理性的PI会做的选择。现在的现实是，如果PI不在乎学生的这两年时间而更在
乎钱的话，你也没有必要违心去迎合他。
既然老板都提到如果不喜欢就换题，我想你也没必要想的太多了，move on。其实他心
知肚明这是个不讨人喜欢的项目，拒绝是自然的事情。如果因此而嫉恨，呵呵，这人的
rp有问题尽快闪吧。
其实，现在无论是基于芯片还是qPCR的高通量方法，成本早就下降很多了。芯片不说了
，qPCR目前发展到384孔甚至1536孔板都渐渐成为常规方法了，3万个基因筛下来成本没
多少，不是吗？ |
|
h******y
发帖数: 351 | 46 Panomics/Affymetrix的QuantiGene® Plex 2.0 Assay - Multiplex Gene
Expression Analysis说是可以在96孔板的一个孔里同时检测3-36个基因的mRNA表达水
平。
有没有用过的同学介绍一下经验？这个Assay是不是象宣称的那么灵敏？费用贵吗？
多谢！ |
|
a******7
发帖数: 7936 | 47 单细胞都怎么抓的？
是单克隆么？
我用trypsin消化了数一下浓度，然后0.2cell/well种到96孔板里，过一天检查，只留
有一个细胞的孔。 |
|
f********s
发帖数: 115 | 48 96孔板每一个孔就是200ul 培养基，最后把这200ul全部吸出来，细胞全部离心到slide
上面，然后染色就可以看到子细胞的形态。在这种情况下，不靠细胞集落的形态分析，
直接看每一个细胞的形态，根据形态可以判断子细胞的类型。
根据细胞集落的形态，颜色，大小来判断progenitor的分化对于wildtype还比较可靠，
对于mutant来说不可靠，各种不正常都可能发生。最后还是需要挑单克隆，看细胞来进
一步验证。 |
|
T****i
发帖数: 15191 | 49 （还是老话，我写本文的目的就是希望大家读完了出门右转进生物转行，早点奔向幸福
生活。希望年轻人不要辜负了我的苦心。）
1. 新生
在旧金山街头和“帐篷城”流浪了几个月之后，Ted渐渐适应了无家可归的生活。其实
也没有那么坏。每个周末还可以去shelter去吃点免费餐再洗个澡。流浪者们大多没文
化，但是都满热心。有一个女流浪者，还挺喜欢他的，大约他显示了和绝大多数流浪汉
不一样的“高贵”气质，毕竟是Ph.D是不是？
一天傍晚，天气很闷热。Ted一天无精打采的，看讨的钱够晚餐和第二天的，就收起钱
打盹了。刚睡了没多久，就被人踢了一脚给弄醒了。“Ted, it’s you? What’s up
doc?” 是原来实验室的另一个博士后Paul。Ted没什么好声气，又讪讪的，“Eh… I
am taking a break。What are you doing here?”Paul轻轻地笑了笑，说：“I just
moved here. It’s a great city, isn’t it? I got a position in UCSF….”Ted
没听到他后面说什么，他只是忿忿不平为什么... 阅读全帖 |
|
