c***r
发帖数: 1132 | 1 这个是专门针对血液sample优化过的，测血液样品最好了。但是别的样品也能测。
优点：维护简单，费用低，操作也很容易。如果搭配sampler，可以实现自动测试（比
如用96孔板stain的sample什么的，还自带一个24孔的rack，可以连续自动测24个用
flow tube stain的sample）。四色激光，一般的sample也够用了。
缺点：参数（激光电压、area/height什么的）都不可调。只有很有限的几个选项可以
选（流速只有快/中/慢三种）。分析软件功能也比较单一（相对BD FACSDiva而言）。 |
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a*******g
发帖数: 2813 | 2
没做转染，一共12个孔，三个一组，其中一半污染一半健康，96孔板上的 |
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s******s
发帖数: 13035 | 3 这个和calibration一点关系都没有，就算都不准，只要consistent
就应该一样。有可能是有气泡了，还一个可能是machine加热不均匀。
有钱的用一样的样品铺满96孔板三次，看一下每个孔的差别多大 |
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l*********2
发帖数: 247 | 4 目标蛋白不是内源的，在293T里不表达。我用六孔板转染的，每孔转了1ug质粒。只能
多上样或者先做immunoprecipitation浓缩后再做western了。谢谢！ |
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L*********g
发帖数: 3001 | 7 问一个蛋白磷酸化的问题
要从6孔板里提蛋白，检测磷酸化，由于细胞密度比较低，能否直接把大约200 ul的2 X
laemmli buffer加到孔里，迅速刮下来，然后煮5分钟？整个过程很快，从加buffer到
放到heat block上，在1分钟内完成。
请问，这样做可以么？会不会导致磷酸化消失？
如果这样做不好，还有别的什么办法？
谢谢。 |
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m****p
发帖数: 122 | 8 最近在做利用lentivirus表达sgRNA KO一个基因，转染第一步就出现问题。
针对两个位点病毒是sigma定制的，寄给我的滴度是5*10^6/ml和1*10^6/ml，我用它们
转了两个细胞（12孔板，每个孔10微升病毒），该病毒正常应该有GFP及puro抗性基因
表达的，我在转染24小时和48小时居然没有看到任何荧光。
我原来用过santa cruze的shRNA病毒，转染后用puromycin筛选，转染效果还是可以的
，最后也筛选出了我要的单克隆细胞。
有人遇到过我现在这个情况吗？怎么解决？
谢啦 |
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i*****i
发帖数: 154 | 9 准备4个六孔板，每个个孔转一个质粒，第二天混在一起就OK了。
不要告诉我20个质粒已经混合好了。 |
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发帖数: 1 | 10 比如一个384孔板，一个sample至少要6个孔（3 replicates for target gene and 3
for gapdh control）
这样最多能同时做64个样本
但如果超过64个样本怎么办呢？那就只能分两批做，可是这样会有batch effect，就是
每一“锅”的qpcr都是不太一样的，两“锅”data直接拼到一起比较，是不是有问题？
有没有啥好办法remove batch effect呢 |
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l*********r
发帖数: 695 | 11 小分子药物，有库。只要能在体外阻止病毒复制感染细胞就行。把药物筛一遍也没啥难
度啊。用96孔板，一百个板就能筛一万种小分子，这有啥难得？？？ |
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S*******B
发帖数: 14 | 12 刚拿到一份心仪已久的工作， 这次找工算告一段落。以往每次找工作，都从版上获得
了很多宝贵的信息，但是过去一直很懒，主要潜水，这次正好利用空闲时间，把自己的
几次找工的经历加以整理总结，算是回馈一下版面，也希望对版上诸位朋友有所帮助。
在这系列文章里，我尽量不谈具体公司的面试题，一个原因是签了协议, 另一个原因
是已有的资料已经很全面。 career cup, leetcode, glassdoor, 和本版题目包罗了
市面上绝大部分技术类题目。本来我想做一个总结面试题的网站，后来发现leetcode
已经在那儿了，而且比我想做的还要好，遂作罢。我会把我的一点的练习编程和准备技
术面试的要点整理以后换一种方式来给大家分享。
用马甲发贴是想主id以后还可以去各版随心所欲胡喷，也希望生活中认识的朋友不要点
破。
我会尽量比较客观的描述，因为对大多数人来说，找工作就如小马过河，老牛们自不用
发愁，想去哪里去哪里，反过来，能一路G，T，出国的网友们，就算不是人中龙凤，也
绝对不是小松鼠。 所以作为一个摸着石头过了几次河的小马，提供一些客观参数和装
备供大家参考。我会说的尽量详细一些，请大家不... 阅读全帖 |
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U******u
发帖数: 5829 | 13 你得烦恼，我估计还有球风相克得因素－－如果黑导和鲑鱼俩认为确实你和他俩水平实
际差别没那末大的话。
这大概除了针对性练技术－－如黑导指出的你ＳＬＩＣＥ只能算３／１０成。以我ＰＵ
ＳＨＥＲ打法得经历和经验，你本身暴力不及他俩，若ＳＬＩＣＥ再只能让他认为３／
１０，发球６／１０，那当然会输得很憋屈没脾气了，似乎根本无从着手了。
无它，多跟他俩打，另外，加强反手ＳＬＩＣＥ那是你抵抗的最重要手段了，若仍是显
著短板，那肯定要被打得很惨。再就是我一直和坚持得观点：没有好发球，绝对是最大
短版。我和比我强得对打，肯定拿不到ＧＡＭＥ但偷局分全靠发球局。自己得发球局若
都不能保或抓几分，那肯定是孔老夫子搬家－－尽是输“书”了。在一场球里，破发<<
保发这是肯定的！
up |
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h*****s
发帖数: 12833 | 14 呵呵。。。。
96孔板一天P五到六板。。。。
嘿嘿。。。。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 15 筛一个带tag外源蛋白的over expression stable cell line 用于纯化complex。
挑的colony在6孔板里做wb，有好几个阳性克隆。
我选了一个克隆，现在扩增到两个10cm 板了，再做wb，没有表达了（我wb没问题，有
阳性对照。）
一直都是加药的（puro）。
这是怎么回事啊？已经建好的stable cell line还会消失吗？ |
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m***o
发帖数: 272 | 16 对照组是wt老鼠，在wt组内有1-3倍差别。在run另一块96孔板时，又有另一组的wt老鼠
，怎么可以把这两块板上的数据放一起统计呢？是不是下次再跑realtime PCR的时候加
一组以前做过的wt老鼠，就有一个对照了？
另外同一个cDNA，已经跑过normalization gene，需要测别的target gene，可以把上
次的normaliztion gene的ct值直接拿过来跟这次的target gene 做delta deltaCT 计
算吗？
请指教，谢谢！ |
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L*****t
发帖数: 56 | 17 没刷过试管，离心管和摇瓶天天刷
我收集器上用的是深孔板，用起来很方便，一块板相当于96个管子。洗起来就相当恶心
，价格又处在微妙的可洗可不洗的边界上，结果经常是洗两个扔两个 |
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S*******B
发帖数: 14 | 18 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: ShowMeRMB (ShowMeRMB), 信区: JobHunting
标 题: 码工找工经验1-转行篇-当断则断
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jun 24 00:51:52 2012, 美东)
刚拿到一份心仪已久的工作， 这次找工算告一段落。以往每次找工作，都从版上获得
了很多宝贵的信息，但是过去一直很懒，主要潜水，这次正好利用空闲时间，把自己的
几次找工的经历加以整理总结，算是回馈一下版面，也希望对版上诸位朋友有所帮助。
在这系列文章里，我尽量不谈具体公司的面试题，一个原因是签了协议, 另一个原因
是已有的资料已经很全面。 career cup, leetcode, glassdoor, 和本版题目包罗了
市面上绝大部分技术类题目。本来我想做一个总结面试题的网站，后来发现leetcode
已经在那儿了，而且比我想做的还要好，遂作罢。我会把我的一点的练习编程和准备技
术面试的要点整理以后换一种方式来给大家分享。
用马甲发贴是想主id以后还可以去各版随心所欲胡喷，也希望生活中认识的朋友不要点
破。
我... 阅读全帖 |
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a******7
发帖数: 7936 | 19 是一个96孔板只能做一个样品么？
老板给我的盒子里就两个板啊，一个做control一个做处理的，就没了。。。。没有重复
实验室只有abcam的Sybr Green，能用么？还是要另外定 SYBR Green mastermix?
cDNA的浓度有没有要求？mRNA reverse transcript以后一般是稀释10倍就可以了么？
谢谢！~ |
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m*****r
发帖数: 1164 | 20 推荐molecular device ImageXpress Micro XLS Widefield High-Content Analysis
System. 基本满足从六孔板到1536板的screening。当然价格比较贵。 |
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v**********8
发帖数: 1685 | 21 是要一个一个突变往WT上叠加，还是只是在WT上做很多点突变？如果是后者，为啥要一
个一个做一年才能做完？就算用最老土的办法，96孔板一板不就能做96个。。。 |
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l*********2
发帖数: 247 | 22 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
已重配过培养液，不是培养液的原因。
请问板上高手这是什么原因？谢谢！ |
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b******n
发帖数: 4225 | 24 这个确实比较奇怪，按传说玫瑰河是北京网管大妈
言论口径应该跟中央一致
具体到常委就是李长春
薄熙来这事情他们那伙应该是不反对不赞成
所以我觉得在军版删贴应该是玫瑰河自己的主张
我们这刚走一个北京来的访问学者，也是痛骂温家宝力挺薄熙来王立军的
当然他从来没看到过薄瓜瓜的享受资本主义腐朽的照片
也不知道薄熙来到底私底下做了些啥事情
那理由就是不管他薄熙来是不是贪官
只要为老百姓做了好事就是好官
感觉以前确实孔和尚司马南这批人占据了舆论阵地
让很大一部分人认为薄熙来是青天大老爷 |
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s****r
发帖数: 31686 | 26 接， 你丫就进去说借机子打几个孔， 估计不要钱 |
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c***s
发帖数: 70028 | 27 事故现场
今天上午8时45分，浙江奉化市一居民楼发生坍塌。截至今晚17时53分，事故中被埋的7人已全部救出，其中一68岁老人因伤势过重抢救无效死亡。其他6人正在医院救治。
坍塌的房屋位于奉化市锦屏街道居敬小区，是一幢5层的居民住宅楼，为小区29幢，坍塌发生在楼的西侧。
记者中午赶到现场时看到，事故现场断壁残垣，一片狼藉。楼的西边，一个半单元如被刀整体切削掉一般。62岁的孙先生住在这个小区的另一幢楼，他说自己正在附近散步，当时只听到很大的声响，瞬间就看到整个楼倒了下来。
据奉化市政府新闻办今天下午通报，坍塌的居敬小区29幢居民楼，竣工于1994年7月，由奉化市房地产公司开发有限公司开发，象山第一建筑公司施工，奉化市建筑设计院设计，砖混结构，共有40户。坍塌的是西边一个半单元，共15户。
记者看到，砖混结构的坍塌楼房属典型的旧式砖混预制板建筑。这种建筑结构简单、造价低廉，也就是俗称五孔板的预制板，简单地搁在用水泥、砖砌起的墙体上。此类建筑在我国上个世纪七、八十年代大量建造，由于抗震能力差，如今早已被淘汰。它也是中国计划经济年代物资短缺的代表性民居建筑。在目前，不少城市的旧城区还有不少这样的... 阅读全帖 |
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r******y
发帖数: 9892 | 28 断章取义，环球明明是各打五十大板。
有报纸甚至把带“妈”的脏话放到大标题上。
——就是说的南方周末。 |
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q******e
发帖数: 960 | 29 日本的第一个机械化师团190师团是板huan师团.
又在做你美国爷爷日本爸爸的扯蛋梦了？
毛主席是你日本爸爸代言人人？
毛主席收回旅顺＝日本人占领驴顺？ |
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m******t
发帖数: 3041 | 31 真的。
板上的聪明人，我们每个人能做些什么呢？ |
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C**o
发帖数: 10373 | 33 【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 求助！实在是走投无路了！
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Dec 28 04:35:31 2012, 美东)
本人千老一名。最近实在是被折腾的走投无路了，想借助大家的思路，看看我这个情况
怎么办。最近几个月的实验总是出问题。我培养的细胞前一段时间总是被污染，好了一
段时间后最近开始大批的死亡，而且死得很怪异。比如一盘24孔板的细胞，有的死有的
长得很好。要是说是技术问题的话，一样的细胞一样的培养液怎么会有的死掉有的好好
的，还有就是基本上比较耗时间的实验的细胞全死光了，而且就是在关键的时间点上。
最主要的是细胞大批连续发生2次了，我和我们实验室的technichian们还有几个要好的
薄厚们讨论了一下都觉得不可能是我的实验技术有问题。我们一致怀疑是有人搞破坏，
因为不光是细胞大批死亡，还有就是westernblot也被人搞破坏，具体就不说明怎么被
破坏的了。我们怀疑的那个人是去年刚招的薄厚，是个中国人。他刚来实验室的时候我
帮了他不少，还把自己的... 阅读全帖 |
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g*********s
发帖数: 350 | 34 我的一点建议。
用Prafilm包扎瓶口， 对于24孔板可以横向包扎1，2圈， 然后画数到横线，或签名跨
过Parafilm。 如果有人动了Parafilm。 在放回去，那横线肯定对不齐了。 总之用
Parafilm，你可以设陷阱， 看有没有人动过。 你自己在想想看。 如果想抓人可以用
微型摄像头，好像网上也有卖。 在实验室是有这种高破坏人，也见过， 也常听说。 |
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d**e
发帖数: 2420 | 35 中国为什么没有孟山都？
作者：土摩托
孟山都的豪赌
“中国最多时曾经有8700家种子公司，但它们的销售额加起来也远远不如孟
山都一家公司，双方实力相差太大了。”张启发教授忧心忡忡地对本刊记者说，
“我早在1996年就注意到了这家公司，那时候国内还没有什么人听说过孟山都。
我当时就建议中国应该成立一个像孟山都一样的公司和它抗衡，否则国内种子市
场必然被外国公司全面占领。当时的人们，包括政府部门都不知道我在说什么，
但今天再来看，我当初的预言都已经变成了现实。”
张启发是华中农业大学生命科学技术学院院长，中科院和美国国家科学院双
料院士，他还有一个头衔是国家农作物分子技术育种中心主任，该中心是在张启
发的倡议下，于2000年经农业部批准在武汉成立的。张启发希望将其打造成中国
的孟山都，可惜由于种种原因，这个中心至今在产业方面没有什么太大的作为。
与此同时，孟山都却从一家专门生产化学品的公司摇身一变，成了全世界种
子行业的领军者。
孟山都（Monsanto）成立于1901年，总部位于美国的密苏里州。这家公司最
初的主业是化工产品，曾经生产过DDT和橙剂，后者是一种高效除草剂，“越战”
时曾经... 阅读全帖 |
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k*******u
发帖数: 1427 | 36 转载, 注意关键词.
本周周二是个值得纪念的日子。第一次操刀切了鼠脑，然后颤抖着去分离海马和皮质。
那一丁点儿脑组织漂在hibernate medium里让我想到了味增汤里漂的嫩豆腐碎片。正值
临近午饭时分，我不争气的咽了下口水。一旦肚子饿了，那么看什么都像食物，也想和
别人讨论食物。我问旁边在分离同一只老鼠的DRG的美国同事，美国人吃不吃动物的脑
子。她大吃一惊，咧了下嘴，然后摇了摇头。我试图和她解释我们中国人“吃啥补啥”
的传统文化精髓，但是她一副不太愿意听的样子。算了算了，我也就吃过一次火锅里的
猪脑，说心里话那并不好吃，从此再没吃过。打消了吃脑子的想法，我开始专心试图按
照hellozero的指示来做实验。
我觉得自己平时做事儿还是挺麻利的，可是在hood用两把不锈钢超尖镊子翻动那丁点儿
大的脑组织，还要做剥离软脑膜，分离血管，切割碎块等等动作，就好象一个单身汉在
摆弄一个刚刚出生的小娃娃，觉得手脚搁在那里都特多余，特别扭，特不对劲，特不自
在。加上眼镜度数不够深，根本就看不清那些精细的结构，下次得记着戴开车用的眼镜
，而不是读书用的眼镜。。。我一边想着，一边眯起眼睛，恨不得把... 阅读全帖 |
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j********p
发帖数: 9680 | 37 上海同胞每次见我都问,你是北京的,有北京城市户口吗?我回答,是的,就OK了.很难想象
我要
是回答,NO,是什么结局.
香港人,见到我是大陆的,一半比较客气,另一半很没礼貌.
他们把所有大陆人都当成到香港讨生活的广东湖南农民偷渡人士了.
多伦多是个香港人来的早的地方,
所以碰见香港人的机会比较多.
一般是公司的中层.见了洋人就摇尾巴,见了大陆人就板着脸.
所有多伦多也有缺陷. |
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t********t
发帖数: 1070 | 38 别装你妈屄的清纯了，你个2屄自己的鸡巴都拖在地上三尺长，还自以为别人看不到，
就跟你个2屄天天在这里小丑跳梁还以为自己很聪明。你个2屄叫兽懂不懂什么叫IP
tracking，懂不懂什么叫network security，懂不懂什么叫security social
analysis。你个2屄叫兽在爷眼里就像一个在显微镜下被放大了一万倍的艾滋病病毒，
你有几根鸡巴毛老子都能给你个傻屄数出来。
都你妈逼快60已经黄土埋脖子的人了，还你妈屄的这么幼稚，还为老不尊地天天在这里
拉尿喷屎装疯卖傻。在中国受中学大学教育，现在仍然回中国骗吃骗喝，可仍然对中国
一切人和事恨之如骨。你个吃里爬外的2屄猪头样，倒是跟你的傻屄头像有的一拼，老
子看一眼都恶心地想吐。学生给你所有课程的评价是1.0，跟你在本板的脑残表演完全
相符，教书教成这个屌样，你怎么还不去死。
纽约州立大学石溪分校叫兽：
菌版马甲： Math1978, zhonghangyue
http://site.6park.com/military/index.php?app=forum&act=threadvi |
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v****g
发帖数: 11080 | 40 戚本禹回忆录说，挖坟是曲阜造反派提出来，谭厚兰他们去支持，山东省委向央文革请
示，陈伯达（中央文革小组组长，也是红旗主编）说支持革命，但明代以前的牌匾不能
砸，庙和坟可以改造，但要考古人员在场，由总理拍的板，但最后是当地贫下中农造反
派动手挖了坟。 |
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x*****8
发帖数: 10683 | 42 我读博士时就有了。
96个加样头对着96孔板，机械臂平移。 |
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发帖数: 1 | 44 对
小屁孩肯定乐翻天了，手套一带，给他几把枪，然后一堆枪头盒让他随便戳，随便玩，
玩了不过瘾，给他排枪，插96孔板，移液器当水枪用，一天玩的不要太high |
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k*******a
发帖数: 1574 | 45 abt 这个一台机器一天也就测100个。 普通的pcr 仪一天都能测好几千，有384孔板。
大量测还要靠roche 高通量 |
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i**e
发帖数: 6810 | 46 想在房间装smoke detector，youtube上都是在墙上drill一个hole，
放一个塑料wall plug进去，然后把base plate screw上。我的问题是，
没有drill的话，这个活能不能干？比如直接用螺丝拧出一个孔再放进去wall
plug？请handy的同学指点一下 |
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o********t
发帖数: 1655 | 47 中文英文来回切累不累？说钻一个孔会引起歧义么? |
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m*******3
发帖数: 14 | 48 WSN见到美女都会紧张不知道说啥，云老师摘眼镜是个好办法！话说万一你看不清但是
女学生以为你在对她放电咋办？算了别问太多，今天这帖上十大了，云夫人把云老师弄
去跪96孔板就不好了。 |
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f****6
发帖数: 365 | 49 这个版上很多人都是高智商的高人，有个问题代朋友请教大家：
朋友免疫学土博，今年 10月份进了一家私人生物小公司。
这家公司目前有关于肿瘤治疗的产品进入临床一期，所以每周都有肿瘤病人的血样送入
公司检测。
关于病人血样的免疫细胞的检测这一块，公司里有一个20多年前毕业的美国PhD （ 西
男），带着一个印度女技术员在做。
此西男PhD毕业之后就进入这家公司，他设计实验，印度女操作。在朋友进入公司之前
，公司只有此西男是免疫专业PhD.
不知是因为进入临床试验的病人将会愈来愈多还是公司CEO对西男及印度女工作不满意
，总之今年10月份公司将朋友招入，和以上两人一起工作。
朋友进入公司后发现，西男和印度女从每个病人血样里只能分离出1-2个million的外周
血细胞，他们用其中1个million的细胞检测B细胞（细胞数够了），剩下的一个million
细胞，分为5组，一组0.2个million的外周血细胞,培养7天，到第7天将每组细胞收集起
来后，4/5 过柱富集IFN-gamma阳性的肿瘤抗原特异性的T细胞，1/5不过柱检测IFN-
gamma阳性的肿瘤抗原特异性的T细胞（用流式细胞仪检测... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 50 蟹肉棒基本是我们吃火锅的必点菜品之一，但是，大家对于这个蟹肉棒却有着不同的看
法。因为蟹肉棒外表有着一层塑料套包裹着。争议就出现在这，到底是先将塑料套取下
来再下锅煮，还是下锅煮熟后才去掉塑料套。这是大家没法统一的问题！
大部分人觉得一定要先把塑料套拆掉才下锅煮，虽然会散掉，但是塑料放下锅去高温煮
肯定是不好的啊。
针对这个问题，有网友专门咨询了蟹肉棒的制造商。制造商表示：蟹肉棒外表的塑料套
是耐高温材质制造的，最高能承受120度的高温，而我们的火锅最高也才100度。所以直
接放下锅去煮是没问题的，但是吃之前一定要记得将塑料套取出来。
知道这个后大家以后吃起蟹肉棒是不是可以放心了呢，毕竟有塑料套包裹着的蟹肉棒煮
起来更容易用筷子夹呀。
但是，仍有部分网友不放心，觉得商家会以次充好，用劣质材料，根本不能承受这么高
的温度。对于这种担心就没必要啦，真要有质量问题会有相关部门处置的。咱就安心的
吃火锅，做个安静的吃货吧。
蟹肉棒的制作工艺
1、生产设备：绞肉机、打浆机、成型机、水煮槽、速冻库等。
2、原材料：鱼糜、肉丸强力增脆素、卡拉胶、蟹粉、蟹香精、香辛料、淀粉、红曲色
素、蛋青、植物油、... 阅读全帖 |
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