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T****u
发帖数: 424 | 6 你得先确保实验没有问题。
否则就是waste your mind on dirty data
1.抗体特异性
2.细胞有没有排除支原体污染
3.GFP-fusion protein也是这样的结果吗？
4.Wildtype是什么样子的？（这一步可以确定样品制备没有问题）
5.ER.Golgi都不是这样的。
6.这个mutant有没有特殊的功能?如果没有，只是为了说明突变之后loss of function
，就没有必要费太大的力气去figure out了。 |
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V******t
发帖数: 444 | 7 楼主我遇到过和你一样的问题，就是一是trypsin消化后，都成细条条、纤维状；二是
上次分过后，长得好好的，轻轻一晃就飘起来，成纤维状。
原因不明。我是重新弄了新的，重新保存。我检测过，没有支原体，也不是冻存的原因
，也不是培养基，也不是trypsin。很奇怪。希望楼主能搞清楚。
有2 |
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V******t
发帖数: 444 | 8 楼主我遇到过和你一样的问题，就是一是trypsin消化后，都成细条条、纤维状；二是
上次分过后，长得好好的，轻轻一晃就飘起来，成纤维状。
原因不明。我是重新弄了新的，重新保存。我检测过，没有支原体，也不是冻存的原因
，也不是培养基，也不是trypsin。很奇怪。希望楼主能搞清楚。
有2 |
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s******s
发帖数: 1584 | 9 买个kit测一下就好咯
不过细胞长不好的原因很多，实验室其他人的呢？ FBS会不会有问题呢？ |
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W****7
发帖数: 426 | 10 花五分钟做个DAPI一眼就看出来了，何必在这费劲问呢。。。。 |
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s******s
发帖数: 1584 | 11 买个kit测一下就好咯
不过细胞长不好的原因很多，实验室其他人的呢？ FBS会不会有问题呢？ |
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W****7
发帖数: 426 | 12 花五分钟做个DAPI一眼就看出来了，何必在这费劲问呢。。。。 |
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p****9
发帖数: 240 | 13 换个培养容器，看能不能减少，如果能减少，就是碎屑。 |
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d******t
发帖数: 27 | 14 韩自己回复搬运如下，他自己也承认图四有难度：槐北路 1
12楼今天 16:22
操作
我目前仍只有一个做实验的小团队，无法做好服务性工作，一天十几个个电话我都是重
复的以下内容：----所谓
高超的技巧，其实也很简单，细胞做好检测，不要有寄生菌污染，不要有支原体污染（
Ago系统对污染特别敏
感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下，单转guid不会影响
GFP表达，假阴性也大多因为细胞污染，假阳性和假阴性我都遇到过，国内买的细胞我
就不吐槽了），转染用的质粒质量要好（可用30ngGFP转细胞，若是均一且效率高表明
质量好，强弱不均一则表明质量差，越不均一表明质量越差），guide磷酸化完全（没
有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果，至于怎么检测，自己跑个PAGE看
看---），特别的，对于Fig4，也是几乎惟一算是有难度的，就是控制转染时的细胞密
度和用血清控制细胞生长，时间稍长，毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着
online method上protocol for genome editing and T7E1做（小经验... 阅读全帖 |
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d******t
发帖数: 27 | 15 http://www.zhihu.com/question/46 ... mp;isappinstalled=0
韩自己回复搬运如下，他自己也承认图四有难度：槐北路 1
12楼今天 16:22
操作
我目前仍只有一个做实验的小团队，无法做好服务性工作，一天十几个个电话我都是重
复的以下内容：----所谓
高超的技巧，其实也很简单，细胞做好检测，不要有寄生菌污染，不要有支原体污染（
Ago系统对污染特别敏
感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下，单转guid不会影响
GFP表达，假阴性也大多因为细胞污染，假阳性和假阴性我都遇到过，国内买的细胞我
就不吐槽了），转染用的质粒质量要好（可用30ngGFP转细胞，若是均一且效率高表明
质量好，强弱不均一则表明质量差，越不均一表明质量越差），guide磷酸化完全（没
有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果，至于怎么检测，自己跑个PAGE看
看---），特别的，对于Fig4，也是几乎惟一算是有难度的，就是控制转染时的细胞密
度和用血清控制细胞生长，时间稍长，毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 16 是谁吃完饭没事干去跟方舟子告状？？
http://fangzhouzi.baijia.baidu.com/article/523403
不久前河北科技大学韩春雨在《自然·生物技术》发表论文报告了一种基因编辑新方法
NgAgo，在国内轰动一时。被《知识分子》作为末流学校土博士也能做世界一流科研的
典型，国内其他媒体随后跟进宣传，甚至称之为“诺贝尔奖级”的研究成果。
这几天我陆续收到几家实验室的研究人员的来信，反映重复不出韩春雨论文中最关键的
图4结果（切割基因组，T7E1和测序），呼吁我关注一下这事。
有些人已在网上生物专业论坛公开讨论此事，报告他们没法重复该实验，询问有谁重复
出来了。目前还未见有人反映重复出了图4结果。有的能够重复论文中的图3结果（FACS
和Western Blot），但那有可能是假阳性。
据听报告的人说，韩春雨在北大和遗传所的报告上都强调，他目前的NgAgo是初级版、
需要高超的实验技巧、等他推出2.0版和Smart版。这些说法跟他在论文里的描述是矛盾
的。因为他描述的只是个并不复杂的转染实验，T7E1和测序也都是现成的技术，并不需
要高超的实验技巧，按照其提供的... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 17 原来高超的实验技巧就是要避免细胞被支原体污染呀。长见识了。
韩春雨每天转进一次：
开始是重复出来的都低调，不站出来；
后来又受了mitbbs的启发，说是磷酸化要自己做，不能公司合成。（公司合成的效率还
不如自己用T4PNK催化？他文章也压根没提，就是顺着别人说。）
现在又是别人的细胞污染了。
这样的理由他还可以继续找下去，比如石家庄雾霾比较严重，国外实验室没有雾霾，雾
霾促进NgAgo活性。真是胡闹够了。当初小保方面对质疑，也是不断用各种细节搪塞的
吧。
记住：他文章里面测试了50个位点切割基因组，每个都work，效率至少20%。这样的效
率要银染才能看到？还有，银染又是什么高超的实验技巧？照着protocol配好buffer，
把胶扔进去，高中生都会做。 |
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发帖数: 1 | 18 质疑是科学研究不断前进的动力
作者：熊丙奇
2016-08-01北京青年报
河北科技大学副教授韩春雨震惊全球学术界的新基因编辑技术NgAgo-gDNA，
正遭遇越来越多的质疑。从5月2日他的论文发布在《自然-生物技术》网络版之
后，到现在为止，全球仍没有一家实验室对外宣布，能够完全成功重复韩春雨的
实验。现在已有多国科学家要求《自然-生物技术》介入调查，并公开韩春雨实
验中的所有原始数据和实验条件。
一项新技术诞生，同行对其可行性进行重复实验，并根据实验效果对技术进
行质疑，这是太正常不过的事。这样的质疑在科学研究中屡见不鲜，有的质疑推
进了技术的完善、进步，而有的质疑，则发现研究者学术造假、伪造数据，不管
是哪一种结果，这都对学术研究有利无弊。前者推进科学研究进步，后者则纯净
学术研究的环境。
韩春雨和其所在学校应该有直面质疑的常识和勇气。据报道，面对质疑，韩
春雨把质粒信息上传到一家全球科学家质粒共享的非盈利组织——addgene，在
协和讲座发放质粒，“对自己实验的重复性还是很有胆气的”，而之前，他还针
对方舟子的质疑文章，进行了较为详细的回应，强调NgAgo系统对污染特别敏感，... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 19 越快越好，因为两年以内说不定CRISPR就拿诺贝尔奖了，
六大门派收了西方CRISPR党的黑钱来阻止Ngago被重复，派人潜入hcy实验室传播支原体
污染！
诺贝尔奖是我们的！绝对不能让他们的阴谋得逞！
lol |
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m****a
发帖数: 270 | 20 恭喜midwestPstD老师！中秋节快乐！
听说过支原体污染，细菌污染，真菌污染，衣原体污染还是第一次听说。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 21 哈哈，你可能是对的。我也不记得中文了-mycoplasma，就是支原体吧。：（。
多谢！ |
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m****a
发帖数: 270 | 22 恭喜midwestPstD老师！中秋节快乐！
听说过支原体污染，细菌污染，真菌污染，衣原体污染还是第一次听说。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 23 哈哈，你可能是对的。我也不记得中文了-mycoplasma，就是支原体吧。：（。
多谢！ |
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j******i
发帖数: 939 | 24 为什么韩春雨一直咬着细胞污染不放呢 难道他还不知道现在测支原体污染只要送一点
培养液去公司两天就有结果了吗 之前澎拜新闻有一篇报道里边的案例已经排除细胞污
染但结果还是没有基因组切割 |
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发帖数: 1 | 25 1 北京大学生命科学学院魏文胜课题组
我们使用了文章中报道的高效ssDNA，同时自己设计了其他2条针对体内其他基因位点的
ssDNA，与NgAgo表达质粒共转HEK293T细胞与HeLa细胞，2天及5天后，用T7E1检测切割
效率，这三条针对2个不同基因的ssDNA，在HEK293T和HeLa两个细胞系中，无论转染一
次还是在8到12小时后再转染一次ssDNA，都没有检测到切割。
针对敲除后能使细胞有表型变化的某特定基因，我们设计了ssDNA，与NgAgo表达质粒共
转HeLa细胞5天后，发现细胞表现出了一定的对应表型，但是把这部分细胞收集起来提
取基因组，对靶位点测序，没有发现基因组序列的任何改变。
我们针对某特定基因设计了6种ssDNA，用特异的荧光报告系统检测是否有靶点DSB产生
，结果显示所有实验组均没有检测到对靶位点DNA序列的切割活性。
2 中科院动物研究所王皓毅课题组
我们在293T细胞中表达带有Flag标签的NgAgo ，在不同时间点检测NgAgo蛋白表达。发
现转染6小时后开始检测到目的蛋白，随着时间的延长蛋白量增加。在人类293T细胞系
中重复原文章中Figure ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 26 能够重复和不能够重复的比例是1:3，并且由20家单位重复出来了
意思就是说，除了20家单位重复出了negative的结果，还有60家单位连negative的结果
也没有重复出来
我的结果基本排除假阳性的可能
废话，连真阳性的可行性都排除，更谈不上假阳性
我近期会有新的回应
你们大家都听错了，人家说的“经期”不是“近期”，只要他一日不来月经就一日不回
应，没有说谎
我的实验需要高超的技术
对！高超的P图技术，不然怎么能骗过NBT？
做不出来是因为支原体感染
因为……，不好意思我实在编不下去了
最后韩主席愿意与学者探讨他们实验失败的原因 |
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j*******1
发帖数: 266 | 27 直到上世纪60 年代，主流进化生物学家认为“几乎全部”生物进化都是有达尔文所说
的“自然选择”产生的，日本群体遗传学家木村资生（Motoo Kimura），对这一观点发
起了强烈挑战。木村认为：在分子水平上，大多数进化改变和物种内的大多数变异，不
是由自然选择引起的，而是通过那些选择上中性或近乎中性的突变等位基因的随机漂变
引起的。他说，能够在一个种群中保持或达到较高出现频率的所有遗传突变，几乎都是
选择中性的，这些突变从适应的角度来说是中性的，谈不到什么有利或有害。在环境中
，基本上无法察觉，它能在一个种群中以不显现的方式传递，这一过程又被称为随机遗
传漂变（genetic drift） (Kimura 1968)。
中性进化学说是一种非达尔文理论的进化模式。木村刚提出中性突变理论时，占主流的
达尔文对这个理论十分反对，两派打的不可开交。到了20世纪80年代，大多数进化遗传
学家，包括达尔文派的理论家都接受了中性进化学说。
木村资生能提出中性进化学说，是和当时分子生物学的进展有直接关系。 1953年JD沃
森（James Watson）和FHC克里克 (Fredrick Click)... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 28 来源：澎湃新闻
北京时间8月3日凌晨，经河北科技大学副教授韩春雨主动申请，其关于新基
因编辑技术NgAgo-gDNA的争议性论文由《自然-生物技术》撤回。
韩春雨团队在撤稿声明中写道：“由于科研界一直无法根据我们论文提供的
实验方案重复出论文图4所示的关键结果，我们决定撤回这项研究。虽然许多实
验室都进行了努力，但是没有独立重复出这些结果的报告。因此，我们现在撤回
我们的最初报告，以维护科学记录的完整性。不过，我们会继续调查该研究缺乏
可重复性的原因，以提供一个优化的实验方案。”
同时，《自然-生物技术》发表题为《是该数据说话的时候了》社论，“现
在，距原论文发表已过去了一年多，我们了解到当初曾报告说初步成功重复出实
验结果的独立研究小组，无法强化初始数据，使其达到可发表的水平。类似的，
在征求专家评审人的反馈意见后，我们判定韩春雨及同事提供的最新数据不足以
反驳大量与其初始发现相悖的证据。我们现在确信韩春雨的撤稿决定是维护已发
表科研记录完整性的最好做法。”
同一日，河北科技大学在其官网刊发《韩春雨团队发布声明》，声明提到：
“鉴于该论文已撤稿，学校决定启动对韩春雨该项研究成果的学术... 阅读全帖 |
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d***n
发帖数: 253 | 29 人体的生命活动是一个矛盾的斗争过程。正常时，机体与外环境之间保持着动态平衡，
处于健康状态。但在一定
的致病因素作用下，打破了原来的平衡与和谐，机体发生损伤与抗损伤之间新的矛盾斗
争过程，则表现出组织器
官机能、代谢和形态结构上的病理变化，出现一系列临床症状和体征。这就是疾病。导
致疾病的因素有内因和外
因两大类。主要有以下几种：
1、生物性因素。包括病原微生物与寄生虫、细菌、病毒、立克次体、螺旋体、真菌及
支原体等。
2、营养性因素。是指维持集体正常代谢和生命活动所需的蛋白质、糖、脂肪、水、无
机盐及维生素的缺乏或过
剩。
3、物理因素。包括各种机械力、温度、电流、光线、声波、电离辐射或放射能、大气
压力改变等。
4、化学因素。包括强酸、强碱等化学物质的直接损伤与汞、铅、磷、砷、镉及聚氯二
酚等经口和呼吸道、皮肤
进入体内引起的中毒。
5、遗传因素。是指遗传物质的异常，如染色体畸变或基因突变等可引起遗传性疾病。
6、内分泌因素。是指内分泌腺功能减退或亢进以及靶细胞反应性的改变。
7、免疫因素。异常免疫反应如变态反应，常引起机体损伤。
8、精神因素。包括喜、怒、忧、思、悲、恐、惊这些情 |
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B*N
发帖数: 455 | 30 支原体衣原体的感染。特点就是痰不多，不发热，干咳不止。细菌感染，痰多，病毒感
染，起烧快，恢复也快。 |
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r*****8
发帖数: 50 | 31 可能是几种情况，
1. 病毒感染后出现的asthma，这个的话医生会给开inhaled albuterol
2. 感冒后咳到吐，有可能是感染了百日咳，这个吃阿奇霉素很有用，我家两宝最近先
后这样，阿奇霉素还挺有效的
3. 支原体感染，这个吃阿奇霉素也管用，但是你们儿医说肺听诊清音，就可能不是这个
不好意思，在中医版上说了西医。可是看你着急就说了两句。 |
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n***8
发帖数: 634 | 32 A.
B, 指麻风;
C, 指支原体;
D,厌氧菌;
E,流感嗜血菌.
不知道对不对? |
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k*****e
发帖数: 372 | 33 我也加一个：
记Gram染色的：
这是KJ：
宋思明上刑场时含泪说到：“蜗居皮薄脂粉厚，不染”
这是解释：
蜗居的是胞内寄生菌，皮薄的是螺旋体和支原体，脂粉厚的是结核分支杆菌。都不能很
好地Gram stain |
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w********b
发帖数: 356 | 34 这个不知道有没有看过，今天从一个同学的空间上看到的，发过来博大伙一笑～
～～～～～～～～～～～～～～
哥当年怎么就选择了学医这条不归路啊！！！！！！！！
不撞南墙不回头啊！！！！！
当初谁给哥宣传学医可以成就神圣的职业啊！！！！！！
啥子救死扶伤，白衣天使啊！！！！
尼玛要毕业了才知道工作不好找啊！！！！！！
谁再给哥讲学医前途一片光明包赚不赔我一口唾液淀粉酶喷死他啊！！！！！
人家本科上四年学医本科上五年有木有！！！！！
入学除了背校训还要背希波克拉底誓言有木有！！！！！
对待病人不分男女贵贱唯德唯仁要求你比圣人还圣人有木有！！！！！
号称是理科比文科死记的内容还多有木有！！！！
还要学数学化学物理微电计算机工程制图有木有！！！！！
尼玛是医学专业还是理科工科大综合啊！！！！
课时比人多作业比人多有木有！！！！！
一本书动则一千页有木有！！！！！
病理病生九死一生有木有！！！！！
生理生化必有一挂有木有！！！！！
人家上大学是浪漫爱情片你是恐怖惊悚片啊！！！！！
蟾蜍开膛破肚做蛙心灌流实验有木有！！！！
兔子动静脉插管气管插管输尿管插管各种插管有木有！！！！
小白鼠脱颈处死断头处死缺... 阅读全帖 |
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P**********e
发帖数: 2964 | 35 《自然》邀专家评价“人造生命”诞生
美国生物学家Craig Venter在实验室中制造出世界首个人造细胞，他将一段人工合成的
基因组进行重塑和修饰后，植入另一种无DNA的细菌壳中，从而人工制造了一种具有自
我复制功能的支原体丝状菌。《自然》杂志邀请了八位不同专业领域的专家，就人造细
胞对其各自领域的影响和意义给出自己的评价和意见。
1. 美国里德学院哲学和人文教授Mark Bedau
Mark Bedau认为，相对于传统的单个基因的基因工程而言，人造细胞的诞生是基因工程
取得重大进展的标志性事件，同时也为人类提出了一些重大的科学和社会议题，它让人
类拥有了前所未有的了解生命的机会。新工程技术的出现呼吁人类必须发展现有的方法
，并且进行完善和创新，以便进行预防性的风险分析。人造细胞的诞生将生命的意义这
一长期存在的问题又提了出来：生命是什么？为什么生命如此重要？人类未来的作用是
什么？
2. 哈弗医学院遗传学家George Church
George Church就管理和预防有害生物的外侵方面给出了两个方案：过失引起的外侵和
有害生物引起的恐怖事件。对于前者，他建议实验室建立起由电脑监控 |
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l*********0
发帖数: 197 | 36 来自主题: Medicalpractice版 - 求助帖 帮转的：拜托各位了、用火箭的速度转发好吗？？？！！！！！各位，我收到朋友转
发的信息，大家帮个忙转一下，举手之劳！
蔡羽翔父母紧急求助，求转发：
我家宝宝5月20日起开始发高烧，至今未退。检查结果是重症肺炎，正在上海儿童医学
中心治疗。目前正在积极寻找病因以便对症下药。可是除支原体呈阳性外，其他检查均
是阴性。所以用药选择阿奇霉素，美平，利福平和甲强龙激素，但是仍无法退烧。现在
宝宝体质一天比一天虚弱，从昨天下午开始已经基本不进食，医生说如果仍找不到对症
的药，宝宝的生命会非常危险！（5月13日在广州手臂被蚊子咬过，肿得非常厉害，直
到18日左右才慢慢消退）
目前我们已经在积极寻找上海和广州的专家，如果你们有见过类似病例并有效得到治疗
的，或者认识这方面的专家，能否尽快联系宝宝家长：蔡鹏13828473209，斯燕跃
13580368816
转后注:希望大家的爱心接力，能挽狂澜于既倒，古人云:救人一命，胜造七级佛屠。
现在，造七级佛屠的机缘就摆在你的面前，不要你花钱，只要你动一动善念！一定转发！
感恩！！！ |
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s********e
发帖数: 1596 | 37 【 以下文字转载自 Parenting 讨论区 】
发信人: luody (wind), 信区: Parenting
标 题: 求助，帮助这位宝宝和他的父母
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jul 4 23:36:26 2013, 美东)
转发：拜托各位了！用飞机的速度转发好吗？各位，我收到朋友转发的信息，大家帮个
忙转一下，举手之劳！或许可以救人一命。
蔡羽翔父母紧急求助！求转发：
我家宝宝5月20日起开始发高烧，至今未退。检查结果是重症肺炎，正在上海儿童医学
中心治疗。目前正在积极寻找病因以便对症下药。可是除支原体呈阳性外，其他检查均
是阴性。所以用药选择阿奇霉素，美平，利福平和甲强龙激素，但是仍无法退烧。现在
宝宝体质一天比一天虚弱，从昨天下午开始已经基本不进食，医生说如果仍找不到对症
的药，宝宝的生命会非常危险！（5月13日在广州手臂被蚊子咬过，肿得非常厉害，直
到18日左右才慢慢消退）
目前我们已经在积极寻找上海和广州的专家，如果你们有见过类似病例并有效得到治疗
的，或者认识这方面的专家，能否尽快联系宝宝家长：蔡鹏13828473209，斯燕跃
135803688... 阅读全帖 |
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c****e
发帖数: 188 | 38 同学圈里转发出来的：
小女3周8个月，9月27日晚发烧39度左右，去上海儿童医院会诊，血象白细胞21，医生
会诊结果为急性咽炎，需挂水，当时为凌晨两点多了，孩子有些困倦就没挂水，医生开
了退烧药和消炎药回家吃了烧退了！第二天白天又发烧，就去离家近的同济医院挂水，
用的是头孢类的，第一天不见好转，还是高烧，第二天又加阿奇霉素，第三天还是高，
基本是退烧药药效过了就会烧起来，医生让拍片子，拍片后说肺部有小块阴影，说是肺
炎，于是住院治疗，住院后一直用头孢类和阿奇霉素治疗，无好转，血象稍降，为17，
仍是高烧，后换青霉素类药阿莫西林和头孢，三天后血象反而升高，高烧期间身体上有
一过性红点，烧退了红点消失，期间怀疑败血症做了血培养，结果一侧阴性一侧阳性，
B超结果部分淋巴结肿大，拍片肺部还是有阴影，医生建议转院，于是转复旦大学附属
儿科医院接受治疗，开始一周仍旧用头孢类和阿奇霉素，无效后建议用静脉丙球蛋白，
用了两天的量，效果不明显，后用万古霉素，四天后仍无效果，又查支气管镜，说有点
支原体感染，用了环丙沙星，仍没有退烧，期间又做了两次血培养，均成阴性，心超正
常，抽血化验各项指标均不能确诊什... 阅读全帖 |
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m****g
发帖数: 530 | 39 美国生物学家Craig Venter在实验室中制造出世界首个人造细胞，他将一段人工合成的
基因组进行重塑和修饰后，植入
另一种无DNA的细菌壳中，从而人工制造了一种具有自我复制功能的支原体丝状菌。《
自然》杂志邀请了八位不同专业
领域的专家，就人造细胞对其各自领域的影响和意义给出自己的评价和意见。
1. 美国里德学院哲学和人文教授Mark Bedau
Mark Bedau认为，相对于传统的单个基因的基因工程而言，人造细胞的诞生是基因工程
取得重大进展的标志性事件，同
时也为人类提出了一些重大的科学和社会议题，它让人类拥有了前所未有的了解生命的
机会。新工程技术的出现呼吁人
类必须发展现有的方法，并且进行完善和创新，以便进行预防性的风险分析。人造细胞
的诞生将生命的意义这一长期存
在的问题又提了出来：生命是什么？为什么生命如此重要？人类未来的作用是什么？
2. 哈弗医学院遗传学家George Church
George Church就管理和预防有害生物的外侵方面给出了两个方案：过失引起的外侵和
有害生物引起的恐怖事件。对于
前者，他建议实验室建立起由电脑监控的认证和监视系统；对于如何避免 |
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m*********k
发帖数: 10521 | 40 成功奖励 20 伪币的用户:
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