u******a
发帖数: 7843 | 1 用键盘膜的人大概很少吧. 不是很理解键盘膜有什么用. 防泼水么? 小心点就行了啊... |
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M********t
发帖数: 5032 | 2 硬膜屏幕容易摔坏。
因为它太厚，本来套子边缘突出，保护屏幕，贴了硬膜后，基本齐平了。 |
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M********t
发帖数: 5032 | 3 硬膜屏幕容易摔坏。
因为它太厚，本来套子边缘突出，保护屏幕，贴了硬膜后，基本齐平了。 |
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a****3
发帖数: 115 | 4 是不是玻璃膜能抗摔啊？大家能推荐一款吗？
还是说没什么用，上普通膜就可以了？谢谢 |
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n******7
发帖数: 12463 | 5 一个7寸小pad
最近开始给小孩看片用
屏幕摔了一道小裂痕
不仔细看看不出来
一直是裸用的，想找个软的什么膜贴上
防止裂的更厉害
有这样的膜吗？
准备再买个大套防摔 |
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c***c
发帖数: 2721 | 6 我想在这次演讲中描述一个激动人心的新机制，它可能改变我们关于宇宙和实在本身的观
点。这个观念是说，我们可能生活在一个更大空间的膜或者面上。
膜这个字拼写为BRANE，是由我的同事保罗·汤森为了表达薄膜在高维的推广而提出
的。它和头脑是同一双关语，我怀疑他是故意这么做的。我们自以为生活在三维的空间中
，也就是说我们可以用三个数来标明物体在屋子里的位置，它们可以是离开北墙五英尺离
开东墙三英尺还比地板高两英尺，或者在大尺度下，它们可以是纬度、经度和海拔。在更
大的尺度下，我们可以用三个数来指明星系中恒星的位置，那就是星系纬度、星系经度以
及和星系中心的距离。和原来标明位置的三个数一样，我们可以用第四个数来标明时间。
这样，我们就可以这样把自己描述成生活在四维时空中，在四维时空中可以用四个数来标
明一个事件，其中三个是标明事件的位置，第四个是标明时间
爱因斯坦意识到时空不是平坦的，时空中的物质和能量把它弯曲甚至翘曲，这真是他
的天才之举。根据广义相对论，物体例如行星企图沿着直线穿越时空运动，但是因为时空
是弯曲的，所以它们的路径似乎被一个引力场弯折了。这就像你把重物代表一个恒星放在
一个橡皮 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 7 取决于设备，而不是电流电压参数。
我们用的湿转设备，有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer，电压
50v，电流0.2A，半小时-1小时，转500kD的蛋白完全没有问题。
如果用传统biorad的小盒子，面积也就1.5倍于膜。即使电压100，电流0.5，也很难在2
小时内将200kd蛋白转完全。 |
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m****m
发帖数: 395 | 8 做好的膜蛋白脂质体样品，需要用extruder过滤一下，该膜蛋白有疏水部分，也有一半
以上亲水部分，请问那个滤膜会不会吸附蛋白呢？很担心损失样品。
在用透析方法做脂质体的时候，还发现一半蛋白进入不了磷脂形成脂质体，而是溶在缓
冲液里，造成大量浪费，这是什么原因呢？该怎么样解决一下啊？想听听大家的意见想
法 |
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t*d
发帖数: 1290 | 9 有多少癌细胞有已知的特异的膜蛋白？
对这些有特异膜蛋白的癌细胞，是不是可以利用抗体把药物（比如简单的砒霜）带过去
，特异性杀死癌细胞？ |
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t*d
发帖数: 1290 | 10 EGFR 是如雷贯耳。不过不知道是这么重要的药物靶点。多谢！
去google了一下，EGFR 是个膜蛋白，在很多癌细胞中高表达。大部分 EGFR 的
inhibitors 直接就抑制癌细胞的生长了。我的一个想法是，利用癌细胞特异表达的膜
蛋白来帮助给药。EGFR 之类的蛋白当然是个很好的目标，也确实有人利用它设计给药
系统。不过如果我们只把条件定为在癌细胞膜特异表达（但不一定和癌细胞的生长直接
相关），应该可以找到更多的潜在靶点。这些靶点可以不是药物的直接target，但是可
以帮助设计更好的给药系统，比如 Mark Davis 的nanoparticle。
我想建一个癌细胞膜表面特异表达的数据库。也许能混一篇文章在NAR的database 专刊。 |
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b****o
发帖数: 193 | 11 用的是尼龙膜，Kit是DIG-high prime random labeling and detection starter kit
II (Roche).膜成像后想留一段时间，应该如何保存。谢谢! |
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h**********d
发帖数: 30 | 12 好的，我也只好一个一个条件慢慢尝试了。
我是让colony在2YT里长到饱和（1.5到两天）后转入M63培养基的，这个以前也是成功
的，并
且是参照文献上类似工作做的。我一般都是从板上挑最大的几个菌落开始长，当然它们
也是长
得最快的。开始诱导都是在E.COLI进入600纳米吸收值0.6到0.7之间（我个人觉得OD高
一些有
利于细胞内低GLUCOSE，高cAMP两个条件满足引发表达，是这样么？）。
我从来没尝试过降低温度表达，因为实验室用的E.COLI C43是专门优化表达细胞色素氧
化酶这
类的膜蛋白的，我这次打算用37，30，25都尝试一下？
诱导后一半长菌4个小时，久了会形成干扰的杂质蛋白CYTOCHROME OO3,大概1，两个小
时黄色
的E.COLI就会开始变红，意味着蛋白已经积累到可以目测的程度了。
蛋白的纯化我到不担心，这个在组里已经是很常规的步骤了，首先它都在膜里的，不会
在清液
中，其次有没有蛋白从颜色就可以看出来，棕红的细胞膜就对了，呵呵。 |
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C**S
发帖数: 522 | 13 你这个跟我前不久遇到的问题一样。膜蛋白N端都含有一个signal peptide，表达到膜
上以后会被切掉。tag如果装到signal peptide之前，会一同被切掉。要装在N端就得装
在signal peptide之后。
你的蛋白的确成功表达了，但tag被切掉了，所以WB检测不到。
FLAG
胞系. |
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s********x
发帖数: 472 | 14 俺有一个蛋白，必须是N端定位到质膜上，一般的CAAX定位和mcd8定位好像都是C端，请
问有否可能用于N端呢？有没有什么通用的其他方法把这个蛋白的N端定位到膜上？
非常感谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 我觉得是。
除非是膜蛋白被回收降解的时候，没有降解完全的细胞外片断不小心又通过
lysosome 的膜跑进细胞液内部了。 |
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V********n
发帖数: 305 | 16 多谢。
这个蛋白一般情况下在膜上均匀分布。刺激后聚集。我尝试过刺激前后的细胞抽提膜蛋
白，然后IP，跑电泳，银染色。可惜没有特异性东西出来。如果CROSSLINK，不知道能有多大改善。
IF图片里现象很明显。每次我和老板都对着图片感慨，要是能一刀把聚集区切出来就好
了。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 17 可能是接触不良。电流300mA，你留意一下你的电压是多高？开始应该是90－100V，之
后逐渐下降到60V或者稍低。
三明治夹的紧不？膜和胶紧不？每铺一层，要用滚轴轻轻压一次。膜和胶贴的不紧也转
不过去。
缓冲液发热大不？如果太热（手伸进去感觉温或者烫）也转不好。要埋在冰里面或者加
上冰盒。
如果解决了，记得回来报告下啊。
题, |
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s******y
发帖数: 28562 | 18 哦，是和spectrin 有关啊？
spectrin 经常会在膜旁边晃悠。貌似和某些膜蛋白应该有关系。
就看你们老板乐不乐意往下做了。 |
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C**S
发帖数: 522 | 19 我们老板对什么都感兴趣，除了技术上难做的。所以我们实验室通常也就拿个siRNA干
扰，测个信号通路之类的。到处捡别人剩下的渣吃。
如果是真的，该怎么接下来做？我唯一能想到的就是说这个膜蛋白和spectrin结合，来
控制tumorigenesis。我已经有了这个膜蛋白胞内段不同deletion，在肿瘤细胞
overexpression后肿瘤大小不同的结果。 |
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v*********d
发帖数: 382 | 20 1 膜蛋白在ER里合成，golgi里修饰 最后运到目的地。
2 细胞内到处都是膜
3 抗体只有少数1部分能用来染色，还有特异性的问题。最好通过比较文献和
overexpress tagged protein 来确定抗体是不是可靠好用
nuclear |
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b*********8
发帖数: 44 | 21 转完膜后用Ponceau S 染膜会不会影响后续的杂交？
Y |
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l**x
发帖数: 52 | 22 以前western转膜最大的蛋白也就150KD左右，对于utrophin这种接近400KD的蛋白对转
膜有什么特殊要求吗？先谢过了 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 23 SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
assembly
Nature 2012 doi:10.1038/nature11155
里面提到的这个nanobody就是camelid single chain antibody （heavy chain)
这个方法最初发表于去年
Nanobody stabilization of G protein-coupled receptor conformational states
Current Opinion in Structural Biology
Volume 21, Issue 4, August 2011, Pages 567–572
他们的做法是把目标蛋白打到驼羊身上
从血液里分离淋巴细胞，然后提RNA，做RT，得到antibody mRNA的pool
然后克隆到phage display vector里面
做粗筛
筛出只跟非变性目标蛋白结合的heavy chain antibody
然后跟目标蛋白共表达，做结晶，解结构
我的问... 阅读全帖 |
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b***n
发帖数: 36 | 24 请问版上有玩ＧＰＣＲ尤其是dopamine receptor的兄弟姐妹不
我现在在做DR internalization, 试了好几种办法，
不管是Membrane biotinylation,
或者是用Flag M2在没有fix之前去label外膜上的receptor
或者是用Radio ligand来做，
都不是很成功，最近试了一下用Sucrose gradient (35%)来分heavy membrane 和light
vesicle, 应该是有看到了一些internalization.
不过最大的问题是用ＦＬＡＧ Ｍ２做完ＷＢ后看到的并不是一条单一的带，而是一片
的smear,
应该是某些地方没做好，所以Ｄ２Ｒ都聚集了
用的是Biorad的ＳＤＳ loading dye 配方直接溶解膜
或者也试过ＲＩＰＡ和ＴＢＳ＋１０％甘油＋１％triton
效果都不是太好
但是看了不少ｐａｐｅｒ貌似人家都是做得出来了
这个事情搞了大半年，一直没能搞定，老板又特别楞，从来不给些建设性的意见，每隔
一段时间都要威胁一下做不出来就开除，已经被威胁了十数次，真是有点窘境穷途了,,
,,还能不能接着... 阅读全帖 |
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l*********1
发帖数: 351 | 25 谢谢
我想我的问题可能应该更加具体点
最好是这样的膜蛋白：
癌症细胞表面overexpression。同时该膜蛋白的胞外区可以存在于细胞质中，胞外区发
挥重要生物学功能（酶/蛋白质相互作用）。 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 26 估计人家想问的是怎么不用detergent就纯化到了膜蛋白，潜台词是你怎么保证膜蛋白
在无detergent体系中保留了正常功能和天然构象。 |
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i***l
发帖数: 1656 | 27 “不用Detergent，还是可溶的细菌膜蛋白”？
这会是每个人的都有疑问--为什么没有Detergent就能提纯？还有活性？
（你也没说怎么破碎的 哪里表达的，Assuming是大肠，超声波。）
我估计，可能极少数穿莫蛋白和细胞膜在破碎过程中形成MICELLS，然后过柱子时候被你
拿到了。如果NTA柱子挂了蛋白后变成黄色，或者你的Elute是浅黄色，就很有可能是有
膜成分共同被结合，洗脱了。当然如果及少量，也可能看不到颜色变黄。
不怕麻烦的话，可以挑个简单的实验 加温和的Detergent （OG，DM，等等温和但是CMC
大点儿的），看看结果是不是一样。
Pierce的手册里有很好的关于Detergent的介绍 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 28 这个不太具有说服力，一个典型的7-10跨膜的蛋白分子的维度也就七八个纳米，即使结
合磷脂形成微囊也不一定会达到足以被220nm的膜截留的尺度。
我觉得可以考虑对你的蛋白洗脱液进行定磷，估算一下蛋白和磷脂的摩尔比率。
BTW，你跑电泳的时候会有一片弥散带在染料前沿附近吗？那个一般是磷脂或去垢剂。 |
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q******g
发帖数: 3858 | 29 做MS时， 是否能看到脂类的峰呢？ 或者有什么脂的标记物， 可以证明你的蛋白是和
膜上的脂一起洗脱下来。或者找个文献，看看是否有人用类似的方法纯化出膜蛋白。 |
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