p********6
发帖数: 1339 | 1 原文出处：http://hovering1983.spaces.live.com/
综合以上的情况，我的看法是，生物技术的突飞猛进短时间内不可能出现，而只有当生
物科学发展到一定程度之后才会有真正的突破，而且到那时，生物技术的全面产业化将
是水到渠成的事情。
既然生物技术的突破有赖于生物科学的发展，那么生物科学发展到什么程度才行呢？我
认为应该是生物科学找到更有效率的研究方法，建立更加成熟的研究平台的时候。上个
世纪物理化学知识的大量引入和分子生物学的发展让生物科学在研究方法和手段上有了
极大提高，但是，这些相比于生物学的复杂程度还远远不够，我们仍需要更大程度的改
造。我认为下一次突破的标志将是电子工程，计算机，数学大规模引进生物学领域，使
生物学研究手段再上一个台阶。这方面，生物信息学，生物工程，计算生物学已经在进
行很多有意义的探索。虽然这些交叉学科在急功近利者眼里没有做出多少贡献，甚至有
些生物学家认为这些都是旁门左道，但是这些学科探索的方向是正确的，都是在探索更
高级的研究手段。其实这些学科的贡献现在已经成为推动生物学发展的不可替代的力量
，没有流式细胞仪没有电子显微镜没有基因 |
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p******d
发帖数: 3737 | 2 实验要用siRNA 瞬时knockdown贴壁细胞系老鼠的Notch1和Notch4。有没有人推荐哪个
公司的哪个
产品效率比较好的？
我初步看了一下ambion的产品，不知道买多少比较合适？怎么稀释？有没有前辈有转染
的protocol可
以参考一下。我打算是要做T25的小flask，因为要比较多的细胞跑流式的。 |
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W****C
发帖数: 1937 | 3
便宜的买 贵的租或者合作 有无本万利的帮人写作， 有小本作业的PCR, WESTERN， 有
本钱了也可以买高速离心机， 相差显微镜，流式细胞， 测序。。。。。。要做这个图
的就是自己争口气， 风险当然大 |
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l****o
发帖数: 442 | 4 有人参与讨论是好事情，能提出可能的问题对创业是有百利无一害的。回答上面repair
网友的问题.
竞争力：技术上和genescripts竞争的话那是基本上失败的；但是自己做的优势在于价
格肯定便宜，genescript应该是满足高端客户的，中低端市场并不是genescript覆盖的
范围。还有更重要的是genescript等高端公司目前并没有在我的目的城市开展业务，这
是外部因素。内部因素是我能建立一个比较好的团队，技术力量可以满足基本的业务需
要。
团队和技术：自己的技术比较全面，能满足普通实验的需要。也能网罗到比较好的技术
人才，有合作者供职于比较有名的抗体公司，有建立实验室平台的经验。有
服务：主要做基因克隆（据说这个赚不到钱了），细胞培养，转染及功能学研究，
western blot，realtime PCR，组织切片染色，免疫荧光，另外什么WST/MTT等小实验
也可以开展。待进入良性循环后，可以上流式等高级项目。有可能的话可以开展一些外
围的项目——比如试剂仪器的进口代理等。
渠道：可能就是指客户资源，这个可能是个比较焦点的问题，认识一些人，但是不是教
授/PI，需要慢慢培 |
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w*****a
发帖数: 37 | 5 非常感谢sunnyday啊，欧洲有些学校是有年纪限制的，比如不超过29或30，西班牙说是
不超过35，所以这也是我现在压力很大的地方，再不申请出去以后就更没机会了。至于
主管的头衔，有一个是德国的面试，当时我做完presentation之后有老板找我谈，说不
知道我提这个主管是好事还是坏事，因为老板们还是想找能干活的，他们认为主管是不
参与实验工作的，只是指导工作，很担心我实验操作不熟练。不过我去面的这个医学院
一直就很少招中国人，我看了连续2年没招中国人了，但每年都会邀请中国人去面试，
而且老板名单绝大多数是免疫类的，看了文章全是流式啊，所以当时面试前就有不好的
预感，但觉得这么不匹配也给了面试应该希望很大的，但还是挂了。
我的G太低了，verbal没上400，总分1100+，而且没有文章，基本拿美国奖学金无望，
也有美国老板面过我，但还是希望我有文章会更好些，不然不太相信我的training,唉
，我在公司上哪弄文章，好的挣钱的大公司都在搞外包，也不搞文章这种事情。而且以
我的成绩背景申请美国，只能申请到太太基础的专业，都是蛋白合成，DNA复制的，我
以前是做动物细胞类似于相互作用 |
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w****l
发帖数: 535 | 6 GM是？定量的话用beads最准，能算出来细胞表面有多少分子 |
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c*******y
发帖数: 1657 | 7 GM = Geometric Mean
不想精确定量
只是不知道用GM值比较两组对照是否可信？而且两组差值只有5-10% |
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c*******y
发帖数: 1657 | 8 GM = Geometric Mean是所有细胞的统计平均值 |
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p****l
发帖数: 291 | 9 MFI Mean Fluorescence Intensity
you can assess the statistical significance of your data, and caculate P
value |
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p****l
发帖数: 291 | 10 MFI Mean Fluorescence Intensity
you should analyze P value between two group of data to know whether there
is statistical significance |
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p****l
发帖数: 291 | 11 MFI Mean Fluorescence Intensity
you should caculate P value to know whether here is statistical significance |
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e*r
发帖数: 103 | 12
也就是说高于这个平均值的可能就是强信号？低于的就是弱的？？ 如果想要细胞含强
信号的，可以根据这个平均值调节？ |
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c*******y
发帖数: 1657 | 14 统计平均值就是软件直接给出的MFI
不用自己算 |
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c*******y
发帖数: 1657 | 15 计算出的P值有显著性差异
只是两组差别最多10% |
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p****l
发帖数: 291 | 16 10% is 10%, if here is statistical significance, there is difference of the
expression level, although not so strong |
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p****l
发帖数: 291 | 17 至少每组样品triplicate
然后算表示为mean加减SEM，计算P value
paper上不都是这么show的吗？ |
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w****l
发帖数: 535 | 20 这就是Geometry mean? 那不是和arithmetic mean一样么 |
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w****l
发帖数: 535 | 21 MFI用geometric mean 不是用arithmetric mean? |
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w****l
发帖数: 535 | 22 我一般stimulation和baseline的MFI都是在2倍以上到上百倍的差别
不知道你这个10%差别是比较什么状况 |
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O******e
发帖数: 4845 | 27 统计学意义跟生物学意义是两码事。统计学只能给你个参考，告诉你你的实验结果的
可重复性。10％的差别算不算差别，要看你自己领域的常识了。别人发表的文章总会
告诉你这些吧。 |
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p****l
发帖数: 291 | 29 你所说的10%的区别应该是两组数据的区别比其中一组数据的MFI mean加减标准差吧
两组MFI之间的差不会是10%的 |
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p****l
发帖数: 291 | 30 同意统计学意义和生物学意义是有区别的
但是生物学意义不是正基于统计学的意义吗？
他这个有区别就是有区别，即使区别再微弱，怎么使用和解释数据区别于他要基于这个
数据做什么
如果别人没做过类似的实验比较一个分子在两种细胞的表达情况，那怎么用和解释他就
是第一个了 |
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c*******y
发帖数: 1657 | 31 我相信这10%的差别有生物学意义
有文章发表过了
我只是在前人的基础上发展一小步
现在想要探讨机制有点力不从心
可能的假设很多，验证很费时间还不一定成功
而且有的假设也不知道怎么验证
不知道能不能把现有的这一小步弄个小东西出来 |
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O******e
发帖数: 4845 | 33 如果有人对我说，分子Q在两种细胞里面的mRNA表达量相差１０％，那么即使这
p=1/100000000000000000，对我来说，基本没有什么生物学意义。 |
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e*r
发帖数: 103 | 36 Cell sorting可以筛选信号强弱不同的啊？？？ |
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c*******y
发帖数: 1657 | 38 你最好还是问你们那里专门做FCM的人
能不能做怎样做他们会告诉你的 |
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q**l
发帖数: 2649 | 39 我们这里，起薪4万多，干到快退休了，有6万多.
血库，HLA配型常年有夜班，别的比如流式细胞仪没有，但是轮流带着传呼，一有招唤
就立刻去上班。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 40 我上过流式，24小时之后确实就能检测到，不过信号相对很弱，48小时肯定就没问题了。
这也和细胞系有一定关系 |
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b****r
发帖数: 17995 | 41 再update一下，给我短信电话之类提问的同修起码也有10多个了，但是基本上都是针对
在遗传，而实际上很多同修根本没有什么遗传经历，可以说我觉得希望可能不是很大。
但是大家完全没有必要局限在遗传方面。我刚刚发现一个简单的找你自己相关
fellowship的方法：
google： "american board of" and PhD
比如第一页就出来个 Sleep Medicine就是PhD可以申请的，如果你现在的生物研究和睡
眠/circadian有关，可能就很有机会。我来美国感觉最深一点的就是，这里的行会保护
很厉害，我迄今知道的，只要有个Board，特别是博士以上水准的，怎么每年也能拿到
近10万甚至10多万，而且一般不用担心失业，因为board的管理者自己也是靠这个board
吃饭的，他们会保证新拿到board的人不至于让他们这些老的失业。最近还听说了有放
疗剂量/定位的fellow，做流式细胞仪的bioanalysis fellow都是PhD qualify的。搞不
好咱们生物PhD在美国其实有一片很广阔的天地等待开采。
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&... 阅读全帖 |
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b****r
发帖数: 17995 | 42 再update一下，给我短信电话之类提问的同修起码也有10多个了，但是基本上都是针对
在遗传，而实际上很多同修根本没有什么遗传经历，可以说我觉得希望可能不是很大。
但是大家完全没有必要局限在遗传方面。我刚刚发现一个简单的找你自己相关
fellowship的方法：
google： "american board of" and PhD
比如第一页就出来个 Sleep Medicine就是PhD可以申请的，如果你现在的生物研究和睡
眠/circadian有关，可能就很有机会。我来美国感觉最深一点的就是，这里的行会保护
很厉害，我迄今知道的，只要有个Board，特别是博士以上水准的，怎么每年也能拿到
近10万甚至10多万，而且一般不用担心失业，因为board的管理者自己也是靠这个board
吃饭的，他们会保证新拿到board的人不至于让他们这些老的失业。最近还听说了有放
疗剂量/定位的fellow，做流式细胞仪的bioanalysis fellow都是PhD qualify的。搞不
好咱们生物PhD在美国其实有一片很广阔的天地等待开采。 |
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b****r
发帖数: 17995 | 43 再update一下，给我短信电话之类提问的同修起码也有10多个了，但是基本上都是针对
在遗传，而实际上很多同修根本没有什么遗传经历，可以说我觉得希望可能不是很大。
但是大家完全没有必要局限在遗传方面。我刚刚发现一个简单的找你自己相关
fellowship的方法：
google： "american board of" and PhD
比如第一页就出来个 Sleep Medicine就是PhD可以申请的，如果你现在的生物研究和睡
眠/circadian有关，可能就很有机会。我来美国感觉最深一点的就是，这里的行会保护
很厉害，我迄今知道的，只要有个Board，特别是博士以上水准的，怎么每年也能拿到
近10万甚至10多万，而且一般不用担心失业，因为board的管理者自己也是靠这个board
吃饭的，他们会保证新拿到board的人不至于让他们这些老的失业。最近还听说了有放
疗剂量/定位的fellow，做流式细胞仪的bioanalysis fellow都是PhD qualify的。搞不
好咱们生物PhD在美国其实有一片很广阔的天地等待开采。 |
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h*****t
发帖数: 103 | 44 注册三天了，终于可以发帖子了。无事不登三宝殿，平时我都是只看帖不回帖，保持中
华民族的传统美德，穷则独善其身。
来美国几个月了，但是对于这边的实验室，还是有些心存不甘，来一趟美国不容易，每
一天都当成最后一天，希望能够多学一些，早日学成回国。儿不嫌母丑，狗不嫌家穷，
无论走到哪里，海那边才是我永远的家。
但是现在的问题是，实验室太悠闲了，没有多少活可干。文献也读了一些，堆起来可能
接近一个人高吧，我觉得这可能还是远远不够，所以还在继续读，不过主要还是集中在
免疫、肿瘤和纤维化这块。
很想换一个能让我从早忙到晚，7*24那种的实验室，希望实验室有比较充足的经费，也
有已经获批的protocol（尤其是涉及到动物实验），方向主要在免疫细胞发育与肿瘤。
不知道这样的实验室有没有，大家可以帮忙推荐下吗？
本人会的实验不算太多，常规的实验手段，比如分子克隆（原核、真核表达载体构建与
transduction，或者病毒包装与感染）、蛋白相互作用（Co-IP、Y2H、FRET）、蛋白检
测（WB、IHC、IF和流式）、活细胞工作站（Confocal）、病理学（染色与阅片）、小
鼠尾静脉注射与皮肤移植... 阅读全帖 |
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h*****t
发帖数: 103 | 46 肚子大，看看有没有可能是怀孕，尤其是雌老鼠。老鼠搬到加州4年，你这个是做老鼠
衰老研究的么，活4年什么情况都可以发生哦，4年的老鼠恐怕和80岁的人差不多了吧。
Littman曾比较过Jax和Taconic的老鼠，发现饲养环境对于Th17细胞是有影响的。有没
有考虑环境因素呢？
胃大，有没有梗阻和狭窄？杀一只老鼠，旁边摆一只正常的老鼠，对照着看；胃大的同
时，胃壁的厚度如何，有没有改变？肠变粗，肠内容物如何，老鼠拉的是什么便，干的
还是稀的，大便量上面有没有变化，大便颜色如何，肛门是否通畅？如果是人，可以拿
听诊器听听肠道蠕动情况如何，不过小鼠肠蠕动就不知道如何检测了。肠道厚度如何？
胃肠道有没有做病理检查？有无病理切片，贴几张HE的上来嘛。老鼠的重量如何，和其
他同周龄的老鼠相比，还有什么异常的没？
脾脏是很浅的粉色，这个好像比较少见，老鼠有没有贫血，脾脏大小如何呢，周围淋巴
结有无肿大，肠系膜淋巴结有无变化，骨髓、脾脏、淋巴结可以做下流式检测造血系统
各系细胞的变化情况。
这个基因主要表达在什么地方呢？
只是随便说的，千万别被我误导了，我也期待着高手的回答和最后谜底的揭开哦。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 47 请教问题：facs marker for erythoid differentiation
分化mel细胞，准备流式细胞仪分析。
Ter-113, CD235(Glycophorin A), CD10,
Which one is better? |
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c******r
发帖数: 3778 | 48 可以试试。不过可能用处不大。有些cell lines就是臭名昭著的团结一致，死后打不成
single cell suspension。没办法，只能多准备的cell，多pipette up and down，然
后过个filter，再上flow |
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g*********5
发帖数: 2533 | 49 Ter119可以理解，特异性的
可是CD71 许多细胞都表达的呀？ |
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c********r
发帖数: 1125 | 50
他确实挺出色的。
06年回国，09年还是10年已经有了国内得pnas和自然免疫。
当然cell总是表示上了一个层次。
但是也不算特别惊讶，因为
（1）人家博后老板是beutler啊，大牛。文章送审不会被整太惨。
（2）免疫学科：从大牛实验室出来独立发文来看免疫得档次是最高的，从发育，神经
顶级大牛实验室出来很多发过cns得博后出来自己独立头5年一般就是10分以下水准，
developement,JNI，能发cell子刊级别得已经非常牛。独立5年内就能发cns或者nature子刊得别说国内，国外top得ap
也很难。
然而免疫出来的几乎每个独立后都很快能发很好的文章。
参见flavel最近出来的中国博后，li ming (mskcc), chi hongbo(st jude), wan
yisong(nuc)，几乎都是3年内就有immunity或者自然免疫出炉。同等比较做发育（
elaine fuchs，schier为例），细胞（xiaodong,rapport)和神经（ginty,axel为例)等大牛出来的博后独立得文章，得要
慢得
多。
（3）技术：免疫大多文章技术是体外，细胞，生... 阅读全帖 |
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