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- [合集] 双酶切连接转化一问,谢谢!
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p*****n
发帖数: 981
1
☆─────────────────────────────────────☆
sixtn (人在天地间如风中飞絮!!!) 于 (Mon Jan 29 00:24:15 2007) 提到:
最近,我在做一个双酶切的连接。最开始,在已经联入T simple vector的A段DNA序列
的一端有相隔四个碱基的两个酶切位点(XbaI和BamHI),然后用双酶切的方法把B段
DNA序列(两端带有相同的两个酶切位点)连进去。跑胶和回收都没有问题,大小也对
。但用T4酶或其它连接试剂盒连接后,再转化,总是长不出来。但其它同学用相同的试
剂做其它连接却能够轻而易举的长出来。已经做了三次了。对于原因百思不得其解,回
想实验过程是再简单不过,加液体这些也很难出错呀。化转也是很简单的步骤。不知道
哪里可能出问题了。
各位ggjj帮我分析一下可能原因好吗?多谢!
☆─────────────────────────────────────☆
goooo1111 (i!) 于 (Mon Jan 29 00:33:53 2007) 提到:
相隔四个碱基是不是少了一点?有些酶不切DNA尾巴,
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