Re: 有没有人碰到过转质粒入BL21PlysS效率很低的情况？ - Biology版

本页内容为未名空间相应帖子的节选和存档，一周内的贴子最多显示50字，超过一周显示500字访问原贴

Biology版 - Re: 有没有人碰到过转质粒入BL21PlysS效率很低的情况？

相关主题
● A silly question	● 请教一个测序问题
● 关于protein kinase subclone 的问题	● Re: why this E.Coli grow so slow?
● 问个cloning 的问题	● Re: 请教E.coli competent cells
● [合集] 为什么转化后的菌落,提不出质粒DNA	● 请教E. coli 表达的蛋白90% 以上被degrade的掉，怎么避免？
● PCR的小女孩——原著安徒生 ZT	● 请教基因克隆纯化蛋白后蛋白质分子量不对的问题。
● 求助，单酶切连接全部反向怎么办？急求！！！	● 再问基因克隆纯化蛋白后蛋白质分子量不对的问题。
● Re: recombinant蛋白质表达问题	● question about T7 promoter-directed gene expression
● 请教如何保持transgene mice。	● Question about T7 promoter (Bao Zi)

相关话题的讨论汇总
话题: bl21plyss话题: 过转话题: bl21话题: de3话题: 质粒

进入Biology版参与讨论

(共1页)

r****o
发帖数: 105

你这个问题我也碰到过。我是表达一个酶的一部分，用的是pET20b,
宿主菌柱是BL21(DE3). 表达出来的蛋白是包涵体，量很大，估计对细菌很
toxic.所以我transform BL21(DE3)的时候在板上硬是只长出了一个colony.
幸运的是可以表达蛋白。
所以你这个问题很正常，mutant之所以比wt更糟糕，也许是因为形成了包涵
体之类的东西。
我提不出什么更好的建议，只能建议你降低一下amp的浓度，说不定会有帮助。
pET系统的origin属于低拷贝，amp的浓度太高可能是菌落无法生长。
第二点比较麻烦一些。建议你先做一个阳性对照，扩增一个常见基因，证明
你的genomic DNA 没有问题。如果这个成功了，试一下touch down PCR好了。

(共1页)

进入Biology版参与讨论

相关主题
● Question about T7 promoter (Bao Zi)	● PCR的小女孩——原著安徒生 ZT
● 帮忙troubleshooting一下我的culture contamination问题	● 求助，单酶切连接全部反向怎么办？急求！！！
● 问个ＩＰＴＧ诱导蛋白表达问题	● Re: recombinant蛋白质表达问题
● 原核表达蛋白的毒性问题	● 请教如何保持transgene mice。
● A silly question	● 请教一个测序问题
● 关于protein kinase subclone 的问题	● Re: why this E.Coli grow so slow?
● 问个cloning 的问题	● Re: 请教E.coli competent cells
● [合集] 为什么转化后的菌落,提不出质粒DNA	● 请教E. coli 表达的蛋白90% 以上被degrade的掉，怎么避免？

相关话题的讨论汇总
话题: bl21plyss话题: 过转话题: bl21话题: de3话题: 质粒

#	版面	帖数(主题数)
-	全站	4871 (796)
1	Military	3777 (569)
2	Stock	341 (51)
3	Joke	117 (17)
4	History	116 (3)
5	Automobile	100 (9)
6	USANews	55 (9)
7	Midlife	45 (1)
8	Headline	41 (41)
9	Dreamer	33 (13)
10	FleaMarket	32 (20)
11	Living	30 (7)

boards

未名新帖统计// 7月16日

历史上的今天