X***h 发帖数: 74 | 1 如果我PCR后的product比较干净,能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
烦的是如
果用column purification总是丢失大部分的DNA,后面digest完了还要gel
purification,
那就所剩无几了。
或者用SAP 去除primers,然后Ethanol-sodium acetate precipitation,总可以上
digestion了吧。 |
l***y 发帖数: 638 | 2 要看用啥酶了
不过pcr又不值钱,多做几管purify,总能拿到足够dna
【在 X***h 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 如果我PCR后的product比较干净,能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻 : 烦的是如 : 果用column purification总是丢失大部分的DNA,后面digest完了还要gel : purification, : 那就所剩无几了。 : 或者用SAP 去除primers,然后Ethanol-sodium acetate precipitation,总可以上 : digestion了吧。
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X***h 发帖数: 74 | 3 ft,template值钱啊。
用的是SacI HF和HindIII。
【在 l***y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 要看用啥酶了 : 不过pcr又不值钱,多做几管purify,总能拿到足够dna
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s******r 发帖数: 2876 | 4 你既然都P出来了,完全可以用PCR产物第二次扩增一遍,
DNA还不是要多少有多少。
如果我PCR后的product比较干净,能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
烦的是如
果用column purification总是丢失大部分的DNA,后面digest完了还要gel
purification,
那就所剩无几了。
或者用SAP 去除primers,然后Ethanol-sodium acetate precipitation,总可以上
digestion了吧。
【在 X***h 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 如果我PCR后的product比较干净,能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻 : 烦的是如 : 果用column purification总是丢失大部分的DNA,后面digest完了还要gel : purification, : 那就所剩无几了。 : 或者用SAP 去除primers,然后Ethanol-sodium acetate precipitation,总可以上 : digestion了吧。
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e****s 发帖数: 1125 | 5 你PCR完了还没有Template?
PCR产物不就是Template了吗?
通常那些PCR clean-up的Kit效率还是不错的,除非你PCR产物超级小或者大。
【在 X***h 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : ft,template值钱啊。 : 用的是SacI HF和HindIII。
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X***h 发帖数: 74 | 6 实际上是超小。~100bp。
这样的小片段在用column的时候是不是bind完了spin的时间需要短一些呢?我都是照着
标准的流程做
的,结果非常low.
【在 e****s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你PCR完了还没有Template? : PCR产物不就是Template了吗? : 通常那些PCR clean-up的Kit效率还是不错的,除非你PCR产物超级小或者大。
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e****s 发帖数: 1125 | 7 我用ZYMO的Kit弄过80bp的,我只是把2次洗涤,减到一次。效果很好。
关键还是PCR产物多点就好了。
【在 X***h 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 实际上是超小。~100bp。 : 这样的小片段在用column的时候是不是bind完了spin的时间需要短一些呢?我都是照着 : 标准的流程做 : 的,结果非常low.
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X***h 发帖数: 74 | 8 恩,我先triple我的PCR,然后再试试一半gel purify,一半ethanol/acetate
precipitation.
【在 e****s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我用ZYMO的Kit弄过80bp的,我只是把2次洗涤,减到一次。效果很好。 : 关键还是PCR产物多点就好了。
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