i*********0
发帖数: 915 | 1 目标蛋白是330kd，不知道横流280mA，3个小时能不能搞定。
谢谢！ |
f*********r
发帖数: 1233 | 2 取决于设备，而不是电流电压参数。
我们用的湿转设备，有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer，电压
50v，电流0.2A，半小时-1小时，转500kD的蛋白完全没有问题。
如果用传统biorad的小盒子，面积也就1.5倍于膜。即使电压100，电流0.5，也很难在2
小时内将200kd蛋白转完全。 |
i*********0
发帖数: 915 | 3 我用的那种老式的biorad的盒子，刚才用120v跑了3个小时，基本上电流是从230mA最后
跳到了430mA，250的marker都转过去了，不知道330的怎么样。
等下stain一下gel看看。 |
l****y
发帖数: 398 | 4 Sorry, but i can't understand what's 有效面积 and why it matters.
I always assume only field strength matters, and it is only related to
voltage.
Could you provide me an equation or any reference?
thanks a lot!
在2
【在 f*********r 的大作中提到】
: 取决于设备，而不是电流电压参数。
: 我们用的湿转设备，有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer，电压
: 50v，电流0.2A，半小时-1小时，转500kD的蛋白完全没有问题。
: 如果用传统biorad的小盒子，面积也就1.5倍于膜。即使电压100，电流0.5，也很难在2
: 小时内将200kd蛋白转完全。
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f*********r
发帖数: 1233 | 5 甲醇不要少于10%。放低温下。别把膜烫坏了。
如果250的能转完全，300出头的理应不是大问题。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我用的那种老式的biorad的盒子，刚才用120v跑了3个小时，基本上电流是从230mA最后
: 跳到了430mA，250的marker都转过去了，不知道330的怎么样。
: 等下stain一下gel看看。
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f*********r
发帖数: 1233 | 6 场强不是唯一的影响因素。
只有在平行板电容（面积无限大，板间距无限小，中间为完全绝缘介质）的理想状态下
，才可以单纯讨论场强。
而湿转环境完全不同。别说无限大无限小，面积和间距根本就在同一个数量级。介质也
是导电性极好的电解质溶液，通电后有很强的电流。还要考虑到蛋白在胶里以及在
buffer里穿行的流体动力学因素。
太多参数，我不会列这个方程。但我用过不同大小的转膜设备，在相同buffer和电流/
电压情况下，转大蛋白，效率随面积增加而呈几何提升。
【在 l****y 的大作中提到】
: Sorry, but i can't understand what's 有效面积 and why it matters.
: I always assume only field strength matters, and it is only related to
: voltage.
: Could you provide me an equation or any reference?
: thanks a lot!
:
: 在2
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