i*********0 发帖数: 915 | 1 目标蛋白是330kd,不知道横流280mA,3个小时能不能搞定。
谢谢! |
f*********r 发帖数: 1233 | 2 取决于设备,而不是电流电压参数。
我们用的湿转设备,有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer,电压
50v,电流0.2A,半小时-1小时,转500kD的蛋白完全没有问题。
如果用传统biorad的小盒子,面积也就1.5倍于膜。即使电压100,电流0.5,也很难在2
小时内将200kd蛋白转完全。 |
i*********0 发帖数: 915 | 3 我用的那种老式的biorad的盒子,刚才用120v跑了3个小时,基本上电流是从230mA最后
跳到了430mA,250的marker都转过去了,不知道330的怎么样。
等下stain一下gel看看。 |
l****y 发帖数: 398 | 4 Sorry, but i can't understand what's 有效面积 and why it matters.
I always assume only field strength matters, and it is only related to
voltage.
Could you provide me an equation or any reference?
thanks a lot!
在2
【在 f*********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 取决于设备,而不是电流电压参数。 : 我们用的湿转设备,有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer,电压 : 50v,电流0.2A,半小时-1小时,转500kD的蛋白完全没有问题。 : 如果用传统biorad的小盒子,面积也就1.5倍于膜。即使电压100,电流0.5,也很难在2 : 小时内将200kd蛋白转完全。
|
f*********r 发帖数: 1233 | 5 甲醇不要少于10%。放低温下。别把膜烫坏了。
如果250的能转完全,300出头的理应不是大问题。
【在 i*********0 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我用的那种老式的biorad的盒子,刚才用120v跑了3个小时,基本上电流是从230mA最后 : 跳到了430mA,250的marker都转过去了,不知道330的怎么样。 : 等下stain一下gel看看。
|
f*********r 发帖数: 1233 | 6 场强不是唯一的影响因素。
只有在平行板电容(面积无限大,板间距无限小,中间为完全绝缘介质)的理想状态下
,才可以单纯讨论场强。
而湿转环境完全不同。别说无限大无限小,面积和间距根本就在同一个数量级。介质也
是导电性极好的电解质溶液,通电后有很强的电流。还要考虑到蛋白在胶里以及在
buffer里穿行的流体动力学因素。
太多参数,我不会列这个方程。但我用过不同大小的转膜设备,在相同buffer和电流/
电压情况下,转大蛋白,效率随面积增加而呈几何提升。
【在 l****y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Sorry, but i can't understand what's 有效面积 and why it matters. : I always assume only field strength matters, and it is only related to : voltage. : Could you provide me an equation or any reference? : thanks a lot! : : 在2
|