t******y
发帖数: 716 | 1 表达一个人体蛋白的突变体。这个蛋白的突变体（pCDNA3质粒上）中有一个点突变在
293T细胞表达量检测不到（其他几个突变体都可以检测到）。所以想用体外表达系统来
表达，不知道有没有人用过这个系统，推荐一下哪个公司的产品比较好。
因为初步判断突变体影响蛋白结构，在293T细胞体内表达时可能被降解了。所以想通过
体外表达，防止降解发生。因为以前没有做个这个实验，所以有几个问题。
1）体外表达是否可以防止突变蛋白降解？
2）选择哪个来源的系统表达我的蛋白？源自human是否比源自wheat的系统或者yeast的
系统更容易降解我的蛋白？
3）打算用质粒DNA直接做，有什么要注意的情况？
4）市场上的kits，哪个比较好？
先谢谢了。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 Promega, TnT T7 coupled transcription/translation kit
Depending on what degradation system was responsible. In vitro translation
system also contain ubiquitin and proteasome. However, it does not have
lysosome or golgi (which also contains protein degradation machinery).
You can add 10uM MG132 in the in vitro translation system (or your 293T cell
culture medium) to inhibit the proteasome.
的系统更容易降解我的蛋白？
Yes. If you want, you can try bacterial in vitro expression system. BUT, it
won't contain the
【在 t******y 的大作中提到】
: 表达一个人体蛋白的突变体。这个蛋白的突变体（pCDNA3质粒上）中有一个点突变在
: 293T细胞表达量检测不到（其他几个突变体都可以检测到）。所以想用体外表达系统来
: 表达，不知道有没有人用过这个系统，推荐一下哪个公司的产品比较好。
: 因为初步判断突变体影响蛋白结构，在293T细胞体内表达时可能被降解了。所以想通过
: 体外表达，防止降解发生。因为以前没有做个这个实验，所以有几个问题。
: 1）体外表达是否可以防止突变蛋白降解？
: 2）选择哪个来源的系统表达我的蛋白？源自human是否比源自wheat的系统或者yeast的
: 系统更容易降解我的蛋白？
: 3）打算用质粒DNA直接做，有什么要注意的情况？
: 4）市场上的kits，哪个比较好？
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l**********n
发帖数: 201 | 3 promega, t7, wheat germ
【在 t******y 的大作中提到】
: 表达一个人体蛋白的突变体。这个蛋白的突变体（pCDNA3质粒上）中有一个点突变在
: 293T细胞表达量检测不到（其他几个突变体都可以检测到）。所以想用体外表达系统来
: 表达，不知道有没有人用过这个系统，推荐一下哪个公司的产品比较好。
: 因为初步判断突变体影响蛋白结构，在293T细胞体内表达时可能被降解了。所以想通过
: 体外表达，防止降解发生。因为以前没有做个这个实验，所以有几个问题。
: 1）体外表达是否可以防止突变蛋白降解？
: 2）选择哪个来源的系统表达我的蛋白？源自human是否比源自wheat的系统或者yeast的
: 系统更容易降解我的蛋白？
: 3）打算用质粒DNA直接做，有什么要注意的情况？
: 4）市场上的kits，哪个比较好？
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a****o
发帖数: 1786 | |
p*****n
发帖数: 981 | 5 thermo scientific刚刚推出了human in vitro protein synthesis system
我大概看了一下，貌似很不错
不过我没用过。
只不过几乎所有in vitro系统表达量都不高（或者说要高表达就要花好多钱）
【在 t******y 的大作中提到】
: 表达一个人体蛋白的突变体。这个蛋白的突变体（pCDNA3质粒上）中有一个点突变在
: 293T细胞表达量检测不到（其他几个突变体都可以检测到）。所以想用体外表达系统来
: 表达，不知道有没有人用过这个系统，推荐一下哪个公司的产品比较好。
: 因为初步判断突变体影响蛋白结构，在293T细胞体内表达时可能被降解了。所以想通过
: 体外表达，防止降解发生。因为以前没有做个这个实验，所以有几个问题。
: 1）体外表达是否可以防止突变蛋白降解？
: 2）选择哪个来源的系统表达我的蛋白？源自human是否比源自wheat的系统或者yeast的
: 系统更容易降解我的蛋白？
: 3）打算用质粒DNA直接做，有什么要注意的情况？
: 4）市场上的kits，哪个比较好？
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t******y
发帖数: 716 | |
