v***a
发帖数: 1242 | 1 在NCBI上查到蛋白的mRNA序列，要设计引物以便引入Expression Vector中。
但这个蛋白我不需要全长，而是仅需要它的一部分，还得在比较精确的位置停止PCR的
反应，所以我想在要它停的地方引入一个TGA的stop codon。我平时设计anti-sense的
引物都是根据在NCBI上查到的mRNA序列从3'开始reverse读出一段作为引物，要引入此
stop codo的话，我有点想不通该怎么引入了，是要把TGA反向变为ACT加在平时正常的
引物后吗？
还有一个白痴问题，为什么我查到的mRNA序列会和我在别人paper上看到的cDNA序列一
模一样？
谢谢大家。 |
b*****o
发帖数: 150 | 2 序列和别人paper上一样有什么不对么
即使不一样也正常
要想设计truncated蛋白 在截断的位置上inframe加入一个TGA不就成了么?
【在 v***a 的大作中提到】
: 在NCBI上查到蛋白的mRNA序列，要设计引物以便引入Expression Vector中。
: 但这个蛋白我不需要全长，而是仅需要它的一部分，还得在比较精确的位置停止PCR的
: 反应，所以我想在要它停的地方引入一个TGA的stop codon。我平时设计anti-sense的
: 引物都是根据在NCBI上查到的mRNA序列从3'开始reverse读出一段作为引物，要引入此
: stop codo的话，我有点想不通该怎么引入了，是要把TGA反向变为ACT加在平时正常的
: 引物后吗？
: 还有一个白痴问题，为什么我查到的mRNA序列会和我在别人paper上看到的cDNA序列一
: 模一样？
: 谢谢大家。
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v***a
发帖数: 1242 | 3 谢谢。
mRNA和cDNA不应当是互补的么？
你的意思是直接把TGA加在设计好的引物3'末端就可以了是吗？
【在 b*****o 的大作中提到】
: 序列和别人paper上一样有什么不对么
: 即使不一样也正常
: 要想设计truncated蛋白 在截断的位置上inframe加入一个TGA不就成了么?
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b*****o
发帖数: 150 | 4 peng
peng
peng
【在 v***a 的大作中提到】
: 谢谢。
: mRNA和cDNA不应当是互补的么？
: 你的意思是直接把TGA加在设计好的引物3'末端就可以了是吗？
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b*****o
发帖数: 150 | 5 你也在UW?
【在 v***a 的大作中提到】
: 在NCBI上查到蛋白的mRNA序列，要设计引物以便引入Expression Vector中。
: 但这个蛋白我不需要全长，而是仅需要它的一部分，还得在比较精确的位置停止PCR的
: 反应，所以我想在要它停的地方引入一个TGA的stop codon。我平时设计anti-sense的
: 引物都是根据在NCBI上查到的mRNA序列从3'开始reverse读出一段作为引物，要引入此
: stop codo的话，我有点想不通该怎么引入了，是要把TGA反向变为ACT加在平时正常的
: 引物后吗？
: 还有一个白痴问题，为什么我查到的mRNA序列会和我在别人paper上看到的cDNA序列一
: 模一样？
: 谢谢大家。
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T**********t
发帖数: 1604 | 6 mRNA sequencing 不都是把mRNA先逆转录成cDNA再用cDNA做模板测序的么？RNA直接测
序现在好像还不成吧，至少没听说有商业化的RNA直接测序服务。 |
v***a
发帖数: 1242 | 7 谢谢
明白了
【在 T**********t 的大作中提到】
: mRNA sequencing 不都是把mRNA先逆转录成cDNA再用cDNA做模板测序的么？RNA直接测
: 序现在好像还不成吧，至少没听说有商业化的RNA直接测序服务。
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