c*****g
发帖数: 408 | 1 FP和RP都是GC含量很高的（72%）。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing，也加过
DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗？谢谢 |
s****l
发帖数: 395 | 2 可以在PCR反应体系中加点Betaine（final concentration好像是1M）看看
【在 c*****g 的大作中提到】
: FP和RP都是GC含量很高的（72%）。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
: 的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing，也加过
: DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗？谢谢
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o**i
发帖数: 1165 | 3 换引物
【在 c*****g 的大作中提到】
: FP和RP都是GC含量很高的（72%）。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
: 的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing，也加过
: DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗？谢谢
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k*********n
发帖数: 241 | 4 The Kit of Invitrogen Platinum Pfx DNA polymerase contains different buffer
(PCRx Enhancer solution) is for problematic and or GF-rich templates.
Just try. |
d****u
发帖数: 1553 | 5 betaine是个办法，还可以加DMSO，还有一些公司提供GC RICH reagent。比如罗氏。 |
h**********r
发帖数: 671 | 6 试试
1）Pfx的Enhancer buffer
2)加DMSO
3)试试Phusion的GC buffer或加DMSO |
s*********n
发帖数: 937 | 7 HF buffer
另外听说加甘油有效果，没试过，你可以查查 |
N******o
发帖数: 3053 | 8 强烈推荐Takara的PrimeSTAR。
在构建Human Antibody Library时候，在我前面的博后捣腾了几个月，终于PCR出来了
，但是有时候用他的Protocol还是会失败。我换了Takara的PrimeSTAR，效果嘎嘎的，
没有再失败一次。
Takara的PrimeSTAR的GC Rich会是最佳选择。Fisher有代理。 |
c*******2
发帖数: 25 | 9 phusion, GC buffer,Mgcl2 or DMSO
实验室做的就是基因组GC含量高的细菌，一直用phusion |
