N***P
发帖数: 153 | 1 最近做western blot，肌肉里面的GAPDH都是两条平行的带，中间间隔1毫米。
有人见到过这种情况吗？ |
H*g
发帖数: 2333 | 2 How many times have you replicated this western? |
N***P
发帖数: 153 | 3 从一个肌肉样本提的总蛋白，分装在-80度。western blot两次。加了抗体，不到1分钟，两条
带就显示出来了。
另外我也尝试了跑胶，不转膜，直接coomassie blue染色。Coomassie blue染色后，在
Tris-HCl胶上相对应的地方，也是两条清晰的带。 |
N***P
发帖数: 153 | |
n******d
发帖数: 1055 | 5 most journal will accept data without GAPDH loading control. if you can't
load equally, then you are not for this kind of research.
western GAPDH? a total waste of time. |
N***P
发帖数: 153 | 6 不是加样不一致，而是每条骨骼肌的lane都用两条带。如果把这两条带合并，每条lane
的总density是一样的。
能否解释一下为什么western gapdh 是 waste of time?
【在 n******d 的大作中提到】
: most journal will accept data without GAPDH loading control. if you can't
: load equally, then you are not for this kind of research.
: western GAPDH? a total waste of time.
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y*****1
发帖数: 73 | |
s**e
发帖数: 1523 | 8 从来都只有一条带。。。你做个positive control看看抗体有没有问题？如果胶是自己
做的，那就换commercial的胶试试。如果抗体没问题，胶也没问题，那你换个loading
control的蛋白吧，actin 或者tubulin之类的。 |
t*********i
发帖数: 35 | |
