h******y
发帖数: 1374 | 1 我们lab都是让本科生做10% SDS-PAGE gel；
seperating gel的部分用的是1.5M Tris pH 8.8，另外的成分还有30％ acrylamide，
10％SDS，10％APS和water。
今天跑胶的时候发现55kD以下的marker没有被分开，stack在一起；于是重新pH了一下
才发现学生配成1.5M Tris pH 7.4,请问是不是这个情况直接导致了55kD以下的蛋白没
有被分开来？
另外这样还能够做出21kD和27kD的蛋白吗？因为样品很珍贵，想着死马当着活马医试试。
多谢！ |
m******d
发帖数: 414 | 2 marker都没有分开，就别指望了。pH还是很重要的，否则stacking gel也不会用pH6.8
了。而且10％的gel，分21和27KDa，本来就不合适。 |
h******y
发帖数: 1374 | 3 我们run了两块胶，同样的sample一块做21kDa的蛋白，另外一块做27kDa的蛋白。
8
【在 m******d 的大作中提到】
: marker都没有分开，就别指望了。pH还是很重要的，否则stacking gel也不会用pH6.8
: 了。而且10％的gel，分21和27KDa，本来就不合适。
|
p******i
发帖数: 1092 | 4 都自己重新配吧，用著放心
21和27是不是用12%好一些？
【在 h******y 的大作中提到】
: 我们run了两块胶，同样的sample一块做21kDa的蛋白，另外一块做27kDa的蛋白。
:
: 8
|
a*****n
发帖数: 2835 | 5 没问题，接着做western吧，反正已经这样了，就算没有做出来你也不吃亏啊
【在 h******y 的大作中提到】
: 我们run了两块胶，同样的sample一块做21kDa的蛋白，另外一块做27kDa的蛋白。
:
: 8
|
h******y
发帖数: 1374 | 6 是的，我们已经接着在做；主要是想问明白是不是因为Tris的pH的问题导致55kDa以下
的蛋白没有分开呢？
【在 a*****n 的大作中提到】
: 没问题，接着做western吧，反正已经这样了，就算没有做出来你也不吃亏啊
|
x*****e
发帖数: 309 | 7 复习生化实验小册子吧，具体原因还真忘记了：大概得研究为啥选 6.8 和8.8， 为啥
选Glycine缓冲体系什么的？
【在 h******y 的大作中提到】
: 是的，我们已经接着在做；主要是想问明白是不是因为Tris的pH的问题导致55kDa以下
: 的蛋白没有分开呢？
|
