w******e
发帖数: 1187 | 1 Methods Mol Biol. 1999;118:143-60.
Detection of nucleic acid interactions using surface plasmon resonance.
Crouch RJ, Wakasa M, Haruki M.
email: q****[email protected]
thank you!! |
m*******s
发帖数: 3142 | |
a****o
发帖数: 1786 | 3 建议你不要用这种方法，除非有人对这个方法很熟，愿意帮你，不然不值得费这个事
【在 w******e 的大作中提到】
: Methods Mol Biol. 1999;118:143-60.
: Detection of nucleic acid interactions using surface plasmon resonance.
: Crouch RJ, Wakasa M, Haruki M.
: email: q****[email protected]
: thank you!!
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 嗯，SPR很tricky，不像EMSA或者filter binding那么容易上手的。 |
w******e
发帖数: 1187 | 5 多谢提醒！实不相瞒，我就是想各种方法都玩玩。。。呵呵
【在 a****o 的大作中提到】
: 建议你不要用这种方法，除非有人对这个方法很熟，愿意帮你，不然不值得费这个事
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w******e
发帖数: 1187 | 6 thx for sharing!!
【在 m*******s 的大作中提到】
: the whole book
: http://www.sendspace.com/file/szxxvi
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w******e
发帖数: 1187 | 7 en，我们lab ms从来没人做出来过。。。不过话说我做EMSA或filter
binding居然也前三次颗粒无收。。。丢人啊~
BTW，如果想知道Kon/Koff，不用SPR的话有什么比较简单的方法吗？
ms可以做dilution time course，不过ms很麻烦
【在 T**********t 的大作中提到】
: 嗯，SPR很tricky，不像EMSA或者filter binding那么容易上手的。
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T**********t
发帖数: 1604 | 8 dilution time course是什么？
我刚开始做Isothermal Titration Calorimetry (ITC)，好像不算特别难做。就是时间
长，一个test要接近三个小时，样品用量也大，我做一次titration要用掉0.1-0.2mg的
蛋白。
【在 w******e 的大作中提到】
: en，我们lab ms从来没人做出来过。。。不过话说我做EMSA或filter
: binding居然也前三次颗粒无收。。。丢人啊~
: BTW，如果想知道Kon/Koff，不用SPR的话有什么比较简单的方法吗？
: ms可以做dilution time course，不过ms很麻烦
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w******e
发帖数: 1187 | 9 我看一个methods上，在incubation结束后狂dilute一下，模拟ligand无法rebind的
状态，那么complex的数量根据时间成指数衰减，把几个time point上的
value plot一下可以搞出个koff来。
ITC倒没听过，不过0.1~0.2mg...我的蛋白都是买的，50ug300大刀，肯定没得玩~
【在 T**********t 的大作中提到】
: dilution time course是什么？
: 我刚开始做Isothermal Titration Calorimetry (ITC)，好像不算特别难做。就是时间
: 长，一个test要接近三个小时，样品用量也大，我做一次titration要用掉0.1-0.2mg的
: 蛋白。
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T**********t
发帖数: 1604 | 10 嗯，买蛋白的话，肯定做不起这个实验，我的都是自己表达的，做起来都特心疼。
【在 w******e 的大作中提到】
: 我看一个methods上，在incubation结束后狂dilute一下，模拟ligand无法rebind的
: 状态，那么complex的数量根据时间成指数衰减，把几个time point上的
: value plot一下可以搞出个koff来。
: ITC倒没听过，不过0.1~0.2mg...我的蛋白都是买的，50ug300大刀，肯定没得玩~
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