w******e
发帖数: 1187 | 1 有没有遇到过过后即使做了etoh precipitation，OD curve还是不正常的情况？
我遇到过好几次A260 peak shift到 270了，对下游的实验ms也有影响。 |
T**********t
发帖数: 1604 | 2 270nm是phenol的峰，应该是你的phenol没有除干净。phenol extraction之后用氯仿再
提一次，然后再做ethanol precipitation。做ethanol precipitation的时候，用95%
的乙醇比用100%的乙醇要好。 |
w******e
发帖数: 1187 | 3 多谢啦！你干脆到我们lab来做吧，我们一帮土人每天自己瞎折腾，郁闷啊~
我用PLG column，还以为可以省了氯仿这一步呢，被欺骗了。。。你说95％ vs 100
％是指沉淀那一步？不太明白为什么会有区别。
【在 T**********t 的大作中提到】
: 270nm是phenol的峰，应该是你的phenol没有除干净。phenol extraction之后用氯仿再
: 提一次，然后再做ethanol precipitation。做ethanol precipitation的时候，用95%
: 的乙醇比用100%的乙醇要好。
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 你们招人么？我刚被我第一次面试的PI糗了一通，说我达不到他的要求还敢要H1B，让
我再表一下忠心他才考虑要不要招我，郁闷透了。说 If you are still seriously
interested in the postdoc position in my laboratory, please tell me why I
should revise my concerns listed above. 简直了。。。
做phenol extraction，氯仿这一步是不能省的，否则除不干净phenol。
乙醇蒸馏是和水共蒸馏的，最纯只能达到95%。工业上制备100%纯酒精是要在95%的基础
上再除水的，我忘了是怎么除了，反正依稀记得说是最后出来的纯酒精里，会有痕量的
苯。一般如果用做溶剂没什么问题，可是如果用来做DNA沉淀的话，如果酒精的质量不
过关，反而会影响后续的实验。
【在 w******e 的大作中提到】
: 多谢啦！你干脆到我们lab来做吧，我们一帮土人每天自己瞎折腾，郁闷啊~
: 我用PLG column，还以为可以省了氯仿这一步呢，被欺骗了。。。你说95％ vs 100
: ％是指沉淀那一步？不太明白为什么会有区别。
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w******e
发帖数: 1187 | 5 多谢啦！看信
【在 T**********t 的大作中提到】
: 你们招人么？我刚被我第一次面试的PI糗了一通，说我达不到他的要求还敢要H1B，让
: 我再表一下忠心他才考虑要不要招我，郁闷透了。说 If you are still seriously
: interested in the postdoc position in my laboratory, please tell me why I
: should revise my concerns listed above. 简直了。。。
: 做phenol extraction，氯仿这一步是不能省的，否则除不干净phenol。
: 乙醇蒸馏是和水共蒸馏的，最纯只能达到95%。工业上制备100%纯酒精是要在95%的基础
: 上再除水的，我忘了是怎么除了，反正依稀记得说是最后出来的纯酒精里，会有痕量的
: 苯。一般如果用做溶剂没什么问题，可是如果用来做DNA沉淀的话，如果酒精的质量不
: 过关，反而会影响后续的实验。
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T**********t
发帖数: 1604 | 6 回了。
其实你也是被我忽悠住了，我们实验室也是一帮土人在瞎折腾。都是半路出家的，拿两
篇paper大家学习一下就开做了，走了不少弯路。。。
【在 w******e 的大作中提到】
: 多谢啦！看信
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w******e
发帖数: 1187 | 7 呵呵，搭平台确实很痛苦。最恶心的是前面的人没好好搭，随便搞点数据发了
paper，然后老板就觉得我们技术很nb了，对后面的人再做optimization就
很不爽。郁闷啊~
【在 T**********t 的大作中提到】
: 回了。
: 其实你也是被我忽悠住了，我们实验室也是一帮土人在瞎折腾。都是半路出家的，拿两
: 篇paper大家学习一下就开做了，走了不少弯路。。。
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T**********t
发帖数: 1604 | 8 偷偷的说一句，我想换方向就是对Aptamer这东西有点儿小失望，等它做到antibody这
么成熟的程度，我怕我就成炮灰了。当然，我是悲观了一点。
【在 w******e 的大作中提到】
: 呵呵，搭平台确实很痛苦。最恶心的是前面的人没好好搭，随便搞点数据发了
: paper，然后老板就觉得我们技术很nb了，对后面的人再做optimization就
: 很不爽。郁闷啊~
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w******e
发帖数: 1187 | 9 nod，我进lab之后也经过一阵郁闷期，后来想通了：比aptamer更忽悠的东西多了去了，
加上现在好歹aptamer专利快过期＋借siRNA的东风RNA的PKPD study会越来越多，RNA
chemistry会越来越成熟廉价，现在逢低买入，观望个一两年，实在不行尽早止损~
【在 T**********t 的大作中提到】
: 偷偷的说一句，我想换方向就是对Aptamer这东西有点儿小失望，等它做到antibody这
: 么成熟的程度，我怕我就成炮灰了。当然，我是悲观了一点。
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T**********t
发帖数: 1604 | 10 赞逢低买入。:D 向你学习！
洗洗睡了，我这都快天亮了。
了，
【在 w******e 的大作中提到】
: nod，我进lab之后也经过一阵郁闷期，后来想通了：比aptamer更忽悠的东西多了去了，
: 加上现在好歹aptamer专利快过期＋借siRNA的东风RNA的PKPD study会越来越多，RNA
: chemistry会越来越成熟廉价，现在逢低买入，观望个一两年，实在不行尽早止损~
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