真心请教：关于real time PCR的几个问题 - Biology版

本页内容为未名空间相应帖子的节选和存档，一周内的贴子最多显示50字，超过一周显示500字访问原贴

Biology版 - 真心请教：关于real time PCR的几个问题

相关主题
● PCR空白对照有扩增，并且熔解曲线是单峰说明什么？	● 请troubleshoot一个PCR问题。。。见图。。。
● 请问如何提高PCR扩增产物的浓度？	● ssDNA怎么作成dsDNA
● 请教遗传学问题，谢谢！	● 借人气问个小片段回收的问题
● 请问影响real-time qPCR扩增效率的因素？	● 要做长引物pcr，大家有没有啥建议呀～～
● 请推荐引物设计软件，谢谢！	● [合集] 可以将长PCR产物送出去直接测序吗？
● 用g418 筛选3T3(求助）help！	● 关于PCR的问题。。
● 膜电势drive的离子流比浓度梯度drive的要快吧?	● 请教一个未知引物序列的技术问题
● Re: 紧急求助	● 蛋白结构还多人做吗？

相关话题的讨论汇总
话题: 模板话题: 扩增话题: pcr话题: 浓度话题: 曲线

进入Biology版参与讨论

(共1页)

c*****0
发帖数: 109

我是准备用Pffafl法做相对定量，然后设计实验时有些问题想不通，想请教大家一下
1.我准备做扩增曲线，网上有的文章说是取点要做至少五个数量级（logs），我想应该
是五个log2级吧，目前看到的文献里面都是1X--几千X里面取的数个点，也就3个数量级。
2.做扩增曲线的时候能不能顺便把模板浓度优化的梯度做了呢？还是应该分开再做一
次？
如果能够一起做，如何稀释我就比较费解，我现在想稀释
1:6.25 1:12.5 1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1: 800 这样是否可行？
3. 做扩增曲线（或者模板浓度优化）要设置无模板negative control 否？
4. 如果做模板浓度梯度、退火温度梯度，那选择“最适”浓度的标准是什么？溶解曲
线单峰，荧光最强而且ct最低？

(共1页)

进入Biology版参与讨论

相关主题
● 蛋白结构还多人做吗？	● 请推荐引物设计软件，谢谢！
● primer 设计请教	● 用g418 筛选3T3(求助）help！
● 问个关于RNAi screen的问题	● 膜电势drive的离子流比浓度梯度drive的要快吧?
● 如何除去plasmid里面的gapped plasmid	● Re: 紧急求助
● PCR空白对照有扩增，并且熔解曲线是单峰说明什么？	● 请troubleshoot一个PCR问题。。。见图。。。
● 请问如何提高PCR扩增产物的浓度？	● ssDNA怎么作成dsDNA
● 请教遗传学问题，谢谢！	● 借人气问个小片段回收的问题
● 请问影响real-time qPCR扩增效率的因素？	● 要做长引物pcr，大家有没有啥建议呀～～

相关话题的讨论汇总
话题: 模板话题: 扩增话题: pcr话题: 浓度话题: 曲线

#	版面	帖数(主题数)
-	全站	4871 (796)
1	Military	3777 (569)
2	Stock	341 (51)
3	Joke	117 (17)
4	History	116 (3)
5	Automobile	100 (9)
6	USANews	55 (9)
7	Midlife	45 (1)
8	Headline	41 (41)
9	Dreamer	33 (13)
10	FleaMarket	32 (20)
11	Living	30 (7)

boards

未名新帖统计// 7月16日

历史上的今天