请问影响real-time qPCR扩增效率的因素？ - Biology版 - 未名存档

本页内容为未名空间相应帖子的节选和存档，一周内的贴子最多显示50字，超过一周显示500字访问原贴

Biology版 - 请问影响real-time qPCR扩增效率的因素？

相关主题
● qPCR检测到Ct值在32左右的基因用western检测到蛋白会有多强？	● 问个qRT-PCR加样顺序的问题
● 请问如何提高PCR扩增产物的浓度？	● qPCR问题请教！
● 1包子求助各位大侠用PCR扩增整个质粒的问题?	● 汗了个去，我的引物出啥问题了
● 奇怪的RT-PCR问题，只能扩增出短片段	● 谁来答疑一下？
● 请问以cDNA为模板扩增8kb的一个基因是什么难度？	● qPCR amplication curve- does anyone see this before?
● qPCR标准曲线不是线性的有哪些可能性	● 急问QPCR引物efficiency在不同细胞系怎么不一样？
● 如何在同一个基因序列上准确标注多个引物序列的位置？	● 求助一个qPCR计算基因拷贝数出现在的诡异问题
● qPCR primer	● 求助个qPCR 问题：载体有扩增, 基因组DNA上没扩增

相关话题的讨论汇总
话题: 扩增话题: 引物话题: 效率话题: qpcr话题: real

进入Biology版参与讨论

1

(共1页)

k****o 发帖数: 589	1 假设引物和dNTP都是过量的，我一下能想到这些： 1. 引物的序列 2. 样品的杂质含量（genomic DNA，蛋白） 3. 混入的聚合酶抑制剂请问还有其它什么吗？
Z******5 发帖数: 435	2 其实对于Real Time来说，对数期之前的扩增效率对你的实验结果才是至关重要的（就是Ct值之前的地方）。比较重要的因素有： 1，引物的结合是否充分（重要的是引物序列，退火延伸温度，特异性；模板二级结构） 2，延伸反应是否完全，充分（延伸时间，虽然一般目的片段大小只有一到两百bp，但是都会延伸1分钟；聚合酶抑制剂）
k****o 发帖数: 589	3 多谢！我还有个问题：用梯度稀释法算扩增效率的时候，严格来说是不是应该每个样品都做梯度稀释，然后分别算每个样品里目标基因和housekeeping基因的扩增效率？换句话说，如果用来合成cDNA的RNA纯度不一样，其相应的扩增效率是否也不一样？

1

(共1页)

进入Biology版参与讨论

相关主题
● 求助个qPCR 问题：载体有扩增, 基因组DNA上没扩增	● 请问以cDNA为模板扩增8kb的一个基因是什么难度？
● 请问有什么好方法定位qPCR引物在human genome上的位置?	● qPCR标准曲线不是线性的有哪些可能性
● 请教PCR问题	● 如何在同一个基因序列上准确标注多个引物序列的位置？
● qPCR来鉴定lncRNA	● qPCR primer
● qPCR检测到Ct值在32左右的基因用western检测到蛋白会有多强？	● 问个qRT-PCR加样顺序的问题
● 请问如何提高PCR扩增产物的浓度？	● qPCR问题请教！
● 1包子求助各位大侠用PCR扩增整个质粒的问题?	● 汗了个去，我的引物出啥问题了
● 奇怪的RT-PCR问题，只能扩增出短片段	● 谁来答疑一下？

相关话题的讨论汇总
话题: 扩增话题: 引物话题: 效率话题: qpcr话题: real

未名新帖统计// 7月16日

#	版面	帖数(主题数)
-	全站	4871 (796)
1	Military	3777 (569)
2	Stock	341 (51)
3	Joke	117 (17)
4	History	116 (3)
5	Automobile	100 (9)
6	USANews	55 (9)
7	Midlife	45 (1)
8	Headline	41 (41)
9	Dreamer	33 (13)
10	FleaMarket	32 (20)
11	Living	30 (7)

* 这里只显示发帖超过25的版面，努力灌水吧:-)