W*********n
发帖数: 775 | 1 请问各位大侠，
我想买一个抗体用，结果只查到一个抗体，用途说明中说可以用在dot blot 和 ELISA
及免疫组化中。只是没有说western blot中可用. 我没有做过dot blot. 请问这个可以
用在dot blot的抗体，一般情况下可否用在我的western blot上？浓度一般需要做如何
调整？
谢谢！ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 yes, in most case you can use it. I would suggest you to test it first.
In principle, the concentration used for Immunohistology need to be diluted
for 10~100x for WB application.
I suggest you to load good negative control and positive control lanes in
your test run to confirm this ab works for your application.
ELISA
【在 W*********n 的大作中提到】
: 请问各位大侠，
: 我想买一个抗体用，结果只查到一个抗体，用途说明中说可以用在dot blot 和 ELISA
: 及免疫组化中。只是没有说western blot中可用. 我没有做过dot blot. 请问这个可以
: 用在dot blot的抗体，一般情况下可否用在我的western blot上？浓度一般需要做如何
: 调整？
: 谢谢！
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W*********n
发帖数: 775 | 3 谢谢 艳阳天！ 以前经常得到您的指点！
还有两点不明白：
1）一个对于某个肽段的抗体做出来之后，为何有的可以用在点杂交，免疫组化或者
western上， 有的不写可以在某方面应用呢？ 我觉得抗体（多抗）都是一种方式产出
来的，为何用途会不同？
2）关于一个检测磷酸化蛋白的抗体，我想检测的蛋白（另一个物种的）和抗体制备所
用的蛋白（人的）肽段，在磷酸化位点左右各4个（一共9个氨基酸）完全相同，再往两
侧就有些区别了。请问这种情况下，以磷酸化位点为中心的13个氨基酸的肽段，和磷酸
化位点为中心的30个氨基酸的肽段产生的多抗，用起来效果一样么？我觉得产生出来的
抗体应该只纯化出磷酸化位点相应的抗体， 否则其它位点的抗体，应该也能够识别非
磷酸化蛋白，这是磷酸化蛋白抗体所不允许的。 请您指点迷津。
谢谢！
diluted
【在 s******y 的大作中提到】
: yes, in most case you can use it. I would suggest you to test it first.
: In principle, the concentration used for Immunohistology need to be diluted
: for 10~100x for WB application.
: I suggest you to load good negative control and positive control lanes in
: your test run to confirm this ab works for your application.
:
: ELISA
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s******y
发帖数: 28562 | 4
这个解释起来比较麻烦。
简单的讲吧，因为抗体在体内产生的时候，是识别一个经过免疫细胞处理过的
变性后的短肽，这个短肽和实际上的蛋白可能会有差别。所以有的抗体能够
识别作为抗原的短肽但不一定能够识别真正的蛋白，特别是在做免疫荧光的时候，很多
时候蛋白被formaldehyde固定后构象更接近于native protein 而不是变性的
短肽。
另外，有些时候有些抗体不适用于某些场合可能是因为在那个场合该抗体的非特异背景
太强。
这个是不能保证的。虽然一般而言大部分抗体的识别序列小于10个氨基酸，但是也会有
可能有些抗体可能会需要更多的氨基酸才能识别。
另外，有些抗体的识别只需要很少的氨基酸就可以了。比方说，有些抗体甚至可以
识别一个被磷酸化的tyrosine.
所以说抗体这种东西，是要试一试才能知道怎么回事的。根据理论做出的推测只
能作为推测，不能作为结论。
【在 W*********n 的大作中提到】
: 谢谢 艳阳天！ 以前经常得到您的指点！
: 还有两点不明白：
: 1）一个对于某个肽段的抗体做出来之后，为何有的可以用在点杂交，免疫组化或者
: western上， 有的不写可以在某方面应用呢？ 我觉得抗体（多抗）都是一种方式产出
: 来的，为何用途会不同？
: 2）关于一个检测磷酸化蛋白的抗体，我想检测的蛋白（另一个物种的）和抗体制备所
: 用的蛋白（人的）肽段，在磷酸化位点左右各4个（一共9个氨基酸）完全相同，再往两
: 侧就有些区别了。请问这种情况下，以磷酸化位点为中心的13个氨基酸的肽段，和磷酸
: 化位点为中心的30个氨基酸的肽段产生的多抗，用起来效果一样么？我觉得产生出来的
: 抗体应该只纯化出磷酸化位点相应的抗体， 否则其它位点的抗体，应该也能够识别非
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