a********k 发帖数: 2273 | 1 是不是只有放射性标记ATP然后体外加纯化的蛋白和PKA这一个决定性实验啊?
基本没做过生化,要证明这样一个磷酸化位点从零开始要多久啊?
谢谢了 |
r****r 发帖数: 379 | 2 可以做ms,如果你害怕同位素的话。或者用s/t磷酸化抗体去检测,不过这个不如ms和
同位素来得有说服力。除非你能做出特异磷酸化位点的抗体那也可以了。 |
a********k 发帖数: 2273 | 3 多谢。。。我还不知道这个位点是否可以磷酸化,估计没可能要钱去做个特意抗体吧。
不过其实钱不是问题,关键是怎么快点搞出结果。
可不可以转染细胞,然后抑制或者激活PKA,然后purify我的蛋白去MS?
thanks.
【在 r****r 的大作中提到】 : 可以做ms,如果你害怕同位素的话。或者用s/t磷酸化抗体去检测,不过这个不如ms和 : 同位素来得有说服力。除非你能做出特异磷酸化位点的抗体那也可以了。
|
r****r 发帖数: 379 | 4 是的,你可以体外激活,但体外的有时候会有假阳性出现,体内刺激纯化后去做ms当然
最好了,但不能确保一定做出来。
要快点搞出来,就多管齐下,点突变蛋白做对照,体外刺激用s/t检测,或者看有几个
预测位点,都做了抗体再说,然后ms也做,因为这几个方法都有缺陷,不一定100%保证
你能得到结果的。
【在 a********k 的大作中提到】 : 多谢。。。我还不知道这个位点是否可以磷酸化,估计没可能要钱去做个特意抗体吧。 : 不过其实钱不是问题,关键是怎么快点搞出结果。 : 可不可以转染细胞,然后抑制或者激活PKA,然后purify我的蛋白去MS? : thanks.
|