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- 做完蛋白Co-IP后,如何上样跑SDS-PAGE?
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1
(共1页)
e********r
发帖数: 147
1
最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完
Protein-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这
样的缓冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一
样?)。如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验
表明100度处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友
,还有别的什么着数可以用吗?
v***a
发帖数: 1242
2
我现在也在做蛋白磷酸化实验,是用100度煮的。倒没注意过会让信号消失的问题。不
过信号差是蛮差的,从来没有过特别explicit的。
【在 e********r 的大作中提到】
: 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完
: Protein-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这
: 样的缓冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一
: 样?)。如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验
: 表明100度处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友
: ,还有别的什么着数可以用吗?
e********r
发帖数: 147
3
呵呵,同病相怜
【在 v***a 的大作中提到】
: 我现在也在做蛋白磷酸化实验,是用100度煮的。倒没注意过会让信号消失的问题。不
: 过信号差是蛮差的,从来没有过特别explicit的。
1
(共1页)
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