C*******e
发帖数: 4348 | 1 想问问看版上做DNA binding protein的同学
有没有简单的方法，不做放射性同位素标记的，Mobility Shift Assay啊？
现在我们手头有一个细菌蛋白
是属于某个细菌细胞器的
该细胞器和DNA无关
但这个蛋白的具体功能未知
只是有不寻常的high pI (>11)
在纯化该蛋白的时候发现UV reading近乎DNA
事实也证明跑胶以后目标蛋白很少
UV reading一多半来自于DNA
过SEC之后能把蛋白和DNA分开
有没有办法做个简单的测试
验证该蛋白能结合DNA？
哪怕是非特异性的 |
t******6
发帖数: 1657 | 2 random binding selection |
C*******e
发帖数: 4348 | 3 悟性不够
再详细点儿？
不是用简并寡核酸片段建库筛选吧
我不是要做evolution
也不是非要push这个蛋白绑个核酸不可啊
【在 t******6 的大作中提到】
: random binding selection
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H*g
发帖数: 2333 | 4 Get the sequence of that DNA and then label with biotin
You may try gel shift assay with Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Kit
from Pierce. |
C*******e
发帖数: 4348 | 5 DNA sequence未知
不过准备看看能不能把和蛋白一起纯化下来的DNA进一步分离纯化
然后放到载体里
测序看序列
只能想到这么笨的方法
Kit
【在 H*g 的大作中提到】
: Get the sequence of that DNA and then label with biotin
: You may try gel shift assay with Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Kit
: from Pierce.
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z*****6
发帖数: 1486 | 6 作gel shift assay 吧。。我最近也在研究这个东西。。打算试试下面这个kit。。这
里面有两个dye。。一个结合ＤＮＡ，一个结合蛋白。而且很敏感。。目前是不ｌａｂ
ｅｌ的最敏感的方法了。。
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/E33075 |
