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h**********r
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不知道版上有没有同修用BioBrick?例如NEB的
http://www.neb.com/nebecomm/products/productE0546.asp
或iGEM的。我以前没有接触过。最近要从别的实验室要到一个质粒,带有BioBrick。我有几个疑问:
1. 扩增克隆质粒是不是必须用E. coli DB3.1?
BioBrick上带有ccdB。ccdB is a lethal gene that targets DNA gyrase。E. coli
DB3.1上有gyrA462的突变。可是JM109,DH5a还有XL1-Blue上有gyrA96的突变。实验室
没有DB3.1,但有JM109。不知道可以替代不?Invitrogen有新一代的One Shot®
ccdB Survival 2 T1R Competent Cells出来。可是贵啊,没有买感受态细胞的
习惯。
2. 虽然ccdB是个negative selection marker,感觉不像sacB那样有用,在biobrick里面
有点多此一举吧。还是我的理解不够深入?
http://partsregistry.org/Part:BBa_P1010:Experience
上面有人提到过用DH5a和XL1-Blue。我不是很确定。不然invitrogen特别弄一个ccdB survival干啥呢。
请达人解惑。非常感谢!
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