k****n 发帖数: 158 | 1 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来,粘端连接到pcdna4里目标基因后面
,目标基因和Dsred有3个氨基酸连接,inframe 没有问题,测序后序列也没有问题。
但是转染细胞后没有红色荧光,自己想到可能的问题是:dsRED 是一个四聚体蛋白,可
能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体,因此
没有红色荧光。
请各位帮我看看,我的想法对不对,还有什么别的问题吗? 非常感谢,有没有什么好
的单体的红色荧光蛋白推荐? |
b******n 发帖数: 4225 | 2 DSRed好像经常有这种问题
空质粒可以有红色荧光
一旦跟别的蛋白做成融合蛋白就无法产生红色荧光了
【在 k****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来,粘端连接到pcdna4里目标基因后面 : ,目标基因和Dsred有3个氨基酸连接,inframe 没有问题,测序后序列也没有问题。 : 但是转染细胞后没有红色荧光,自己想到可能的问题是:dsRED 是一个四聚体蛋白,可 : 能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体,因此 : 没有红色荧光。 : 请各位帮我看看,我的想法对不对,还有什么别的问题吗? 非常感谢,有没有什么好 : 的单体的红色荧光蛋白推荐?
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k****n 发帖数: 158 | |
A****9 发帖数: 262 | 4 我的质粒里面也有,但我用了IRES,所以没有影响,表达得很好。 |
s******9 发帖数: 283 | 5 我的DsRed fusion的maturation time也很长。mcherry要好很多。 |
k****n 发帖数: 158 | |
g*****e 发帖数: 209 | 7 western 有条带吗?
【在 k****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来,粘端连接到pcdna4里目标基因后面 : ,目标基因和Dsred有3个氨基酸连接,inframe 没有问题,测序后序列也没有问题。 : 但是转染细胞后没有红色荧光,自己想到可能的问题是:dsRED 是一个四聚体蛋白,可 : 能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体,因此 : 没有红色荧光。 : 请各位帮我看看,我的想法对不对,还有什么别的问题吗? 非常感谢,有没有什么好 : 的单体的红色荧光蛋白推荐?
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W*******a 发帖数: 1769 | 8 换单体的, mCherry, orange, apple, banana, etc.
【在 k****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 谢谢,有什么好的解决办法没有,继续求助!!
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k****n 发帖数: 158 | 9 没有做wb,准备先在目的基因和RFP 中间加一个linker试试看 |
g*****e 发帖数: 209 | 10 这个花的时间更久吧
还不如western呢,找个dsred的antibody试试
【在 k****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 没有做wb,准备先在目的基因和RFP 中间加一个linker试试看
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