k****n
发帖数: 158 | 1 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来，粘端连接到pcdna4里目标基因后面
，目标基因和Dsred有3个氨基酸连接，inframe 没有问题，测序后序列也没有问题。
但是转染细胞后没有红色荧光，自己想到可能的问题是：dsRED 是一个四聚体蛋白，可
能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体，因此
没有红色荧光。
请各位帮我看看，我的想法对不对，还有什么别的问题吗？ 非常感谢，有没有什么好
的单体的红色荧光蛋白推荐？ |
b******n
发帖数: 4225 | 2 DSRed好像经常有这种问题
空质粒可以有红色荧光
一旦跟别的蛋白做成融合蛋白就无法产生红色荧光了
【在 k****n 的大作中提到】
: 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来，粘端连接到pcdna4里目标基因后面
: ，目标基因和Dsred有3个氨基酸连接，inframe 没有问题，测序后序列也没有问题。
: 但是转染细胞后没有红色荧光，自己想到可能的问题是：dsRED 是一个四聚体蛋白，可
: 能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体，因此
: 没有红色荧光。
: 请各位帮我看看，我的想法对不对，还有什么别的问题吗？ 非常感谢，有没有什么好
: 的单体的红色荧光蛋白推荐？
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k****n
发帖数: 158 | |
A****9
发帖数: 262 | 4 我的质粒里面也有，但我用了IRES，所以没有影响，表达得很好。 |
s******9
发帖数: 283 | 5 我的DsRed fusion的maturation time也很长。mcherry要好很多。 |
k****n
发帖数: 158 | |
g*****e
发帖数: 209 | 7 western 有条带吗？
【在 k****n 的大作中提到】
: 从 clontech pIRES2-DsRed 里 扩增 Dsred 出来，粘端连接到pcdna4里目标基因后面
: ，目标基因和Dsred有3个氨基酸连接，inframe 没有问题，测序后序列也没有问题。
: 但是转染细胞后没有红色荧光，自己想到可能的问题是：dsRED 是一个四聚体蛋白，可
: 能由于目标基因和Dsred之间的linker只有3个氨基酸所以Dsred不能形成四聚体，因此
: 没有红色荧光。
: 请各位帮我看看，我的想法对不对，还有什么别的问题吗？ 非常感谢，有没有什么好
: 的单体的红色荧光蛋白推荐？
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W*******a
发帖数: 1769 | 8 换单体的, mCherry, orange, apple, banana, etc.
【在 k****n 的大作中提到】
: 谢谢，有什么好的解决办法没有，继续求助！！
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k****n
发帖数: 158 | 9 没有做wb，准备先在目的基因和RFP 中间加一个linker试试看 |
g*****e
发帖数: 209 | 10 这个花的时间更久吧
还不如western呢，找个dsred的antibody试试
【在 k****n 的大作中提到】
: 没有做wb，准备先在目的基因和RFP 中间加一个linker试试看
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