m***i
发帖数: 898 | 1 WB检测到新的protein bands，位置在55kd和28kd，设想是目标蛋白的fragments, 想用
同一抗体IP这两个fragments， 然后再用mass spectrometry ID证实是目标蛋白的
fragments。
但目前IP后fragments的信号被igG heavy and light chains所屏蔽（both for IB and
MS).大家有什么办法可以去除IgG的信号？谢谢 |
s******s
发帖数: 13035 | 2 Pierce Clean-blot, 只detect native antibody
and
【在 m***i 的大作中提到】
: WB检测到新的protein bands，位置在55kd和28kd，设想是目标蛋白的fragments, 想用
: 同一抗体IP这两个fragments， 然后再用mass spectrometry ID证实是目标蛋白的
: fragments。
: 但目前IP后fragments的信号被igG heavy and light chains所屏蔽（both for IB and
: MS).大家有什么办法可以去除IgG的信号？谢谢
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r********g
发帖数: 109 | 3 Yes. Pierce Co-IP kit. Very clean. |
d****7
发帖数: 109 | 4 用crosslinker比如DMP, BS3之类的把抗体crosslink在beads上，然后IP |
m***i
发帖数: 898 | 5 谢谢大家的热心回复。请教如何crosslink抗体？有无具体的protocol? |
m***i
发帖数: 898 | 6 Pierce Clean-blot看来不错。但这个有没有连接IR DYE.我们现在WB都用odyssey
system， 不用film了，这个不compatible吧？ |
V********n
发帖数: 305 | 7 LZ最终目的不是要visualize band，然后切胶做mass spec.么？不是WB吧。pierce kit
似乎是WB用的。俺记得invitrogen有kit可以只洗脱蛋白，而不release antibody |
V********n
发帖数: 305 | |
m***i
发帖数: 898 | 9 thanks for Vermillion. 最终是要elute下来的protein跑胶，染色，切胶，测序的。
所以最好不release antibody。 当然在这之前WB是用来确认IP了目标蛋白。 |
