T**********r 发帖数: 287 | 1 从组织里分离细胞,之后FACS,直接sort到RLT裂解液里(from Qiagen RNeasy plus
mini kit),
获得cell 数量约20000,之后用RNeasy kit提取RNA,获得的RNA送去gene-profiling,
总是说质量
不好。
求有经验的同学给些建议,感激不尽。 |
m*********n 发帖数: 215 | 2 Collect到RNA-later里(room temperature)。然后spin down再提取RNA。 |
m*********n 发帖数: 215 | 3 另外分离组织的过程一定注意所有的用具RNase free。除了如果要酶解dissociate
cells,尽量保持放在冰上/低温操作。 |
V********n 发帖数: 305 | 4 After sorting, pellet cell first, then add RTL. |
c********d 发帖数: 75 | 5 RLT里头记得要有fresh 2-ME,sorting过程中RLT用4度水浴,sorting完了如果不是马上提
rna,转移过程中管子要放dry ice上然后-80度保存。提rna时快速室温水浴解冻,注意
观察冰块一
旦快融尽,迅速转移到冰上操作。提出的rna取两三个微升做质检,剩下的就赶紧冻起
来,运输过程也
都保证冰冻状态。总之尽量保证全过程的低温和快速。
用RNAlater对低温的要求不高,就是多一步离心,会有一些细胞的损失。两万细胞剩下
的应该也够做
一个chip了。
【在 T**********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 从组织里分离细胞,之后FACS,直接sort到RLT裂解液里(from Qiagen RNeasy plus : mini kit), : 获得cell 数量约20000,之后用RNeasy kit提取RNA,获得的RNA送去gene-profiling, : 总是说质量 : 不好。 : 求有经验的同学给些建议,感激不尽。
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T**********r 发帖数: 287 | 6
上提
版上牛人济济,这里一一谢过了!
【在 c********d 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : RLT里头记得要有fresh 2-ME,sorting过程中RLT用4度水浴,sorting完了如果不是马上提 : rna,转移过程中管子要放dry ice上然后-80度保存。提rna时快速室温水浴解冻,注意 : 观察冰块一 : 旦快融尽,迅速转移到冰上操作。提出的rna取两三个微升做质检,剩下的就赶紧冻起 : 来,运输过程也 : 都保证冰冻状态。总之尽量保证全过程的低温和快速。 : 用RNAlater对低温的要求不高,就是多一步离心,会有一些细胞的损失。两万细胞剩下 : 的应该也够做 : 一个chip了。
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