T**********r
发帖数: 287 | 1 从组织里分离细胞，之后FACS，直接sort到RLT裂解液里（from Qiagen RNeasy plus
mini kit),
获得cell 数量约20000，之后用RNeasy kit提取RNA，获得的RNA送去gene-profiling,
总是说质量
不好。
求有经验的同学给些建议，感激不尽。 |
m*********n
发帖数: 215 | 2 Collect到RNA－later里（room temperature）。然后spin down再提取RNA。 |
m*********n
发帖数: 215 | 3 另外分离组织的过程一定注意所有的用具RNase free。除了如果要酶解dissociate
cells，尽量保持放在冰上／低温操作。 |
V********n
发帖数: 305 | 4 After sorting, pellet cell first, then add RTL. |
c********d
发帖数: 75 | 5 RLT里头记得要有fresh 2-ME，sorting过程中RLT用4度水浴,sorting完了如果不是马上提
rna，转移过程中管子要放dry ice上然后-80度保存。提rna时快速室温水浴解冻，注意
观察冰块一
旦快融尽，迅速转移到冰上操作。提出的rna取两三个微升做质检，剩下的就赶紧冻起
来，运输过程也
都保证冰冻状态。总之尽量保证全过程的低温和快速。
用RNAlater对低温的要求不高，就是多一步离心，会有一些细胞的损失。两万细胞剩下
的应该也够做
一个chip了。
【在 T**********r 的大作中提到】
: 从组织里分离细胞，之后FACS，直接sort到RLT裂解液里（from Qiagen RNeasy plus
: mini kit),
: 获得cell 数量约20000，之后用RNeasy kit提取RNA，获得的RNA送去gene-profiling,
: 总是说质量
: 不好。
: 求有经验的同学给些建议，感激不尽。
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T**********r
发帖数: 287 | 6
上提
版上牛人济济，这里一一谢过了！
【在 c********d 的大作中提到】
: RLT里头记得要有fresh 2-ME，sorting过程中RLT用4度水浴,sorting完了如果不是马上提
: rna，转移过程中管子要放dry ice上然后-80度保存。提rna时快速室温水浴解冻，注意
: 观察冰块一
: 旦快融尽，迅速转移到冰上操作。提出的rna取两三个微升做质检，剩下的就赶紧冻起
: 来，运输过程也
: 都保证冰冻状态。总之尽量保证全过程的低温和快速。
: 用RNAlater对低温的要求不高，就是多一步离心，会有一些细胞的损失。两万细胞剩下
: 的应该也够做
: 一个chip了。
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