s******y 发帖数: 28562 | 1 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式?
谢谢! |
O******e 发帖数: 4845 | 2 老鼠的没做过,但你这个50KD也太大了点吧,磷酸化的也应该是离35不远。
你用的哪家的抗体?
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
j*****d 发帖数: 787 | 3 好像不对哦
http://www.cellsignal.com/products/2926.html
CycD1作IHC好使的
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
s******y 发帖数: 28562 | 4 我们也觉得很奇怪。
但是那个50kD的带很强,比35kD的强得多。
抗体是 Santa Cruz (sc717) anti-cyclin D1
不知道cyclinD1 immunoprecipitation 是否好做?
如果好做的话我们拿去做一下Mass Spec
【在 j*****d 的大作中提到】 : 好像不对哦 : http://www.cellsignal.com/products/2926.html : CycD1作IHC好使的
|
s******u 发帖数: 81 | 5 有没有其它Posttranslational modification的可能,比方SUMO?
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
s******y 发帖数: 28562 | 6 不知道啊!所以上来问大家啊。
我是第一次涉及这个蛋白。
【在 s******u 的大作中提到】 : 有没有其它Posttranslational modification的可能,比方SUMO?
|
i*****l 发帖数: 51 | 7 应该是抗体非特异性条带。该公司每个蛋白都有好几种抗体,特异性也不同,换DCS6抗
体试试。
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
s******y 发帖数: 28562 | 8 嗯,明天我向他们抗议一下,让他们给我换抗体。
【在 i*****l 的大作中提到】 : 应该是抗体非特异性条带。该公司每个蛋白都有好几种抗体,特异性也不同,换DCS6抗 : 体试试。
|
h**********8 发帖数: 650 | 9 SUMO倒是有可能
不过貌似非特异的条带吧?
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
d****7 发帖数: 109 | 10 我现在也有类似的情况,可能是抗体的问题,比如我现在用的一个Cell signaling的
FOXO3a抗体,
在大概90kD有条带,在70kD也有条带,70kD那条带的表达量随细胞周期变化,90kD那条
带却很稳定,
而Cell signaling网页上的图却只有恨特异的一条带。呃。。。
【在 s******y 的大作中提到】 : 我们最近在侧cyclin D1 的时候,抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的 : 强带,而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。 : 想请问一下,那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式? : 谢谢!
|
s******y 发帖数: 28562 | 11 嗯。他们网页上也是只有35的一条强带,根本就看不到50的带。
而且最让我晕倒的是50的带的变化和我们实验设想的非常吻合,
而35的带根本就和我们的假说南辕北辙。
所以弄不好我们得把50的带IP 下来送去查查看到底是什么东西
【在 d****7 的大作中提到】 : 我现在也有类似的情况,可能是抗体的问题,比如我现在用的一个Cell signaling的 : FOXO3a抗体, : 在大概90kD有条带,在70kD也有条带,70kD那条带的表达量随细胞周期变化,90kD那条 : 带却很稳定, : 而Cell signaling网页上的图却只有恨特异的一条带。呃。。。
|
k****o 发帖数: 589 | 12 个人始终对Santa Cruz的质量不放心。50kDa的蛋白有很多,这个抗体有可能特异性不
好。
如果是post-translational modification的话,似乎只有SUMO能够吻合上两条带分子
量的差异。
公司的图片根本不可信,特别是Santa和Abcam的,为了卖东西什么都做得出来。 |
i*****n 发帖数: 53 | 13 50KD 的带应该是非特异的。 DSC-6 这个Antibody 还可以,但是因为是mouse 来源的,用它做老
鼠的组织,还是会有background. 试了非常多的抗体之后, 我们才发现 SP4 clone(rabbit
monoclonal) 是最好用的。病理医生都用这个做MCL 的检测。 Cyclin D1 磷酸化的形
式离35-36 并不远,非常近。 |