s******y
发帖数: 28562 | 1 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
谢谢！ |
O******e
发帖数: 4845 | 2 老鼠的没做过，但你这个５０KD也太大了点吧，磷酸化的也应该是离３５不远。
你用的哪家的抗体？
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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j*****d
发帖数: 787 | 3 好像不对哦
http://www.cellsignal.com/products/2926.html
CycD1作IHC好使的
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 4 我们也觉得很奇怪。
但是那个50kD的带很强，比35kD的强得多。
抗体是 Santa Cruz (sc717) anti-cyclin D1
不知道cyclinD1 immunoprecipitation 是否好做？
如果好做的话我们拿去做一下Mass Spec
【在 j*****d 的大作中提到】
: 好像不对哦
: http://www.cellsignal.com/products/2926.html
: CycD1作IHC好使的
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s******u
发帖数: 81 | 5 有没有其它Posttranslational modification的可能，比方SUMO？
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 6 不知道啊！所以上来问大家啊。
我是第一次涉及这个蛋白。
【在 s******u 的大作中提到】
: 有没有其它Posttranslational modification的可能，比方SUMO？
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i*****l
发帖数: 51 | 7 应该是抗体非特异性条带。该公司每个蛋白都有好几种抗体，特异性也不同，换DCS6抗
体试试。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 8 嗯，明天我向他们抗议一下，让他们给我换抗体。
【在 i*****l 的大作中提到】
: 应该是抗体非特异性条带。该公司每个蛋白都有好几种抗体，特异性也不同，换DCS6抗
: 体试试。
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h**********8
发帖数: 650 | 9 SUMO倒是有可能
不过貌似非特异的条带吧？
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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d****7
发帖数: 109 | 10 我现在也有类似的情况，可能是抗体的问题，比如我现在用的一个Cell signaling的
FOXO3a抗体，
在大概90kD有条带，在70kD也有条带，70kD那条带的表达量随细胞周期变化，90kD那条
带却很稳定，
而Cell signaling网页上的图却只有恨特异的一条带。呃。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
: 强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
: 想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
: 谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 11 嗯。他们网页上也是只有３５的一条强带，根本就看不到５０的带。
而且最让我晕倒的是５０的带的变化和我们实验设想的非常吻合，
而３５的带根本就和我们的假说南辕北辙。
所以弄不好我们得把５０的带IP 下来送去查查看到底是什么东西
【在 d****7 的大作中提到】
: 我现在也有类似的情况，可能是抗体的问题，比如我现在用的一个Cell signaling的
: FOXO3a抗体，
: 在大概90kD有条带，在70kD也有条带，70kD那条带的表达量随细胞周期变化，90kD那条
: 带却很稳定，
: 而Cell signaling网页上的图却只有恨特异的一条带。呃。。。
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k****o
发帖数: 589 | 12 个人始终对Santa Cruz的质量不放心。50kDa的蛋白有很多，这个抗体有可能特异性不
好。
如果是post-translational modification的话，似乎只有SUMO能够吻合上两条带分子
量的差异。
公司的图片根本不可信，特别是Santa和Abcam的，为了卖东西什么都做得出来。 |
i*****n
发帖数: 53 | 13 50KD 的带应该是非特异的。 DSC-6 这个Antibody 还可以，但是因为是mouse 来源的，用它做老
鼠的组织，还是会有background. 试了非常多的抗体之后， 我们才发现 SP4 clone(rabbit
monoclonal) 是最好用的。病理医生都用这个做MCL 的检测。 Cyclin D1 磷酸化的形
式离35-36 并不远，非常近。 |
