n**********s 发帖数: 228 | 1 研究的基因是一个酶,很简单的knock in模型,就是将GFP-Neo同源重组到基因的第一
个exon前面,这样homozygous的老鼠该酶实际上是knock out的。
理论上GFP表达细胞是受该基因调控的,现在的结果是,在已知正常情况下该基因表达
的器官,homozygous的老鼠GFP细胞数大概是heterozygous的2倍多,比较的是相似位置
的切片,做过统计,基本上是这个结果。
请教这种现象准确原因是什么?Allelic Imbalance造成的吗?好像没什么理论基础支
持这个?另外,该基因也不存在明显的imprinting,应该不是这个原因吧。请高人指教
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s******s 发帖数: 13035 | 2 不是imprinting, x-inactivation一类的?我就不知道了
【在 n**********s 的大作中提到】 : 研究的基因是一个酶,很简单的knock in模型,就是将GFP-Neo同源重组到基因的第一 : 个exon前面,这样homozygous的老鼠该酶实际上是knock out的。 : 理论上GFP表达细胞是受该基因调控的,现在的结果是,在已知正常情况下该基因表达 : 的器官,homozygous的老鼠GFP细胞数大概是heterozygous的2倍多,比较的是相似位置 : 的切片,做过统计,基本上是这个结果。 : 请教这种现象准确原因是什么?Allelic Imbalance造成的吗?好像没什么理论基础支 : 持这个?另外,该基因也不存在明显的imprinting,应该不是这个原因吧。请高人指教 : !
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l**********k 发帖数: 189 | 3 这是Allelic exclusion, 很正常。好多基因都有这种情况。至于一个细胞里面表达哪个
染色体上的等位基因,是随机的。在你的小鼠里面,heterozygous小鼠里某类细胞
的GFP+比例是homozygous小鼠的30%-70%都是正常的。
【在 n**********s 的大作中提到】 : 研究的基因是一个酶,很简单的knock in模型,就是将GFP-Neo同源重组到基因的第一 : 个exon前面,这样homozygous的老鼠该酶实际上是knock out的。 : 理论上GFP表达细胞是受该基因调控的,现在的结果是,在已知正常情况下该基因表达 : 的器官,homozygous的老鼠GFP细胞数大概是heterozygous的2倍多,比较的是相似位置 : 的切片,做过统计,基本上是这个结果。 : 请教这种现象准确原因是什么?Allelic Imbalance造成的吗?好像没什么理论基础支 : 持这个?另外,该基因也不存在明显的imprinting,应该不是这个原因吧。请高人指教 : !
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n**********s 发帖数: 228 | |
l**********k 发帖数: 189 | 5 您太客气了。谢谢。
【在 n**********s 的大作中提到】 : 多谢多谢,等着收包子,
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m*********n 发帖数: 215 | 6 等一下。。。你这个homozygous和heterozygous的表达差别难道和copy number没关么
?两个copy和1个copy的区别? |
n**********s 发帖数: 228 | 7 就是这个纠结啊,一开始看到结果,直接就想到是copy number 的原因, 但是我觉得
用上面那位同学的解释似乎更合理些,heterozygous的细胞,表达GFP那条allele是随
机的,因此GFP positive的细胞数目有个变化范围。
用copy number来解释,感觉不太有说服力,我觉得是不是平均单个细胞的GFP荧光强度
总体来说,homo比heterozygous平均强一些,用这个来解释更合理些?
是直接的显微镜下拍摄照片进行的荧光计数,设定个阈值,高于的就算阳性,因为这个
实验相当于验证这个敲入模型的准确性,所以才做的一个相当于“对照”性质的实验。 |