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Biology版 - 讲个牛人做实验的事
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基因的外显子序列相同,但是内含子序列差异很大问大家一个100bp左右长引物的合成问题
推荐个好的ECOLI里表达重组蛋白的质粒?要克隆1000个cDNA到一个质粒
in vitro methylation隔壁实验室老美经常问我要质粒但自己不抽提怎么办?
请教一个测序问题请教有人做RACE吗?
问个关于overexpress pri-和pre-miRNA质粒构建的问题紧急求助:请大家推荐 RACE试剂盒
关于腺病毒表达系统的问题。RLM-5'RACE的结果可信还是早期cDNA library测序的结果可信?
为什么生物是由1%的高富帅和99%穷屌丝组成小白求大侠们指点3‘RACE
寻找含protein A 的质粒或cDNA.11kb gene 5'RACE
相关话题的讨论汇总
话题: 基因话题: 纯化话题: 克隆话题: 牛人话题: race
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1 (共1页)
W*****o
发帖数: 1780
1
某牛人,每天朝九晚五,周末不加班,但文章很多,档次也不错。终于明白人家怎么做
实验的了。
老板和另一大牛合作,克隆新基因,表达纯化蛋白,对方做功能。课题交给该牛人。
牛人上网搜了一下。不去定引物,不去杀老鼠提RNA,直接从公司A定了含该基因的质粒
。第二天收到。纯化测序正确。质粒邮寄公司B.告诉对方用什么细胞表达,要多少纯化
的蛋白,不能有标记什么的。两个月后收到纯化的蛋白和详细实验报告(包括质粒构建
,western,纯化等等)。纯化的蛋白送到学校测试中心C质谱测了一下纯度,浓度,确
定序列正确,寄给合作单位D。两个月之后收到活性试验结果和报告。该牛人写了摘要
和introduction,把公司的结果和合作的结果合在一起。老板修改投稿接收发表。从合
作到文章出来差不多半年。老板和合作方对其赞不绝口。
o****u
发帖数: 214
2
现在需要的就是这种思路。能外包的尽量外包。
我们现在已经不怎么用PCR突变啊,克隆什么的了。需要什么,直接给基因合成的发个
订单。现在定个基因也就是几百块,跟个KIT的价格差不多,一个星期就到货。头一个基
因贵点,后续的突变还要便宜。做微生物的,有感兴趣的活性,直接先来个全基因测序
,也就是不到1000块钱。
最后做成本核算的时候,肯定是比自己定一堆试剂摸条件的快,还省钱(考虑人力成本
的话)。

【在 W*****o 的大作中提到】
: 某牛人,每天朝九晚五,周末不加班,但文章很多,档次也不错。终于明白人家怎么做
: 实验的了。
: 老板和另一大牛合作,克隆新基因,表达纯化蛋白,对方做功能。课题交给该牛人。
: 牛人上网搜了一下。不去定引物,不去杀老鼠提RNA,直接从公司A定了含该基因的质粒
: 。第二天收到。纯化测序正确。质粒邮寄公司B.告诉对方用什么细胞表达,要多少纯化
: 的蛋白,不能有标记什么的。两个月后收到纯化的蛋白和详细实验报告(包括质粒构建
: ,western,纯化等等)。纯化的蛋白送到学校测试中心C质谱测了一下纯度,浓度,确
: 定序列正确,寄给合作单位D。两个月之后收到活性试验结果和报告。该牛人写了摘要
: 和introduction,把公司的结果和合作的结果合在一起。老板修改投稿接收发表。从合
: 作到文章出来差不多半年。老板和合作方对其赞不绝口。

e**r
发帖数: 1144
3
资本主义国家真幸福

【在 o****u 的大作中提到】
: 现在需要的就是这种思路。能外包的尽量外包。
: 我们现在已经不怎么用PCR突变啊,克隆什么的了。需要什么,直接给基因合成的发个
: 订单。现在定个基因也就是几百块,跟个KIT的价格差不多,一个星期就到货。头一个基
: 因贵点,后续的突变还要便宜。做微生物的,有感兴趣的活性,直接先来个全基因测序
: ,也就是不到1000块钱。
: 最后做成本核算的时候,肯定是比自己定一堆试剂摸条件的快,还省钱(考虑人力成本
: 的话)。

j****x
发帖数: 1704
4
我认识国内不少老板也是这么干的,拿钱换时间/效率,同时还能洗钱,当然前提是你
得有钱

【在 e**r 的大作中提到】
: 资本主义国家真幸福
g********0
发帖数: 6201
5
老中喜欢开小作坊,最好还是夫妻店,耕耘自己那一亩三分地,其乐无穷。
o****u
发帖数: 214
6
生物做商业相关研发,时间压力比开发费用要重要的多。
对玩的起R&D的公司来说,做上游研发的时候,你是用20万的试剂费,还是100万
的试剂费,其实没多大差别。产品开发要是耽误6个月,那损失可就大了。光是产权律
师的工资就不得了。更别说对下游生产部门,市场部门的影响了。

【在 j****x 的大作中提到】
: 我认识国内不少老板也是这么干的,拿钱换时间/效率,同时还能洗钱,当然前提是你
: 得有钱

O******e
发帖数: 4845
7
你确认杂志的“档次也不错”?这些结果也太简单太少了吧

【在 W*****o 的大作中提到】
: 某牛人,每天朝九晚五,周末不加班,但文章很多,档次也不错。终于明白人家怎么做
: 实验的了。
: 老板和另一大牛合作,克隆新基因,表达纯化蛋白,对方做功能。课题交给该牛人。
: 牛人上网搜了一下。不去定引物,不去杀老鼠提RNA,直接从公司A定了含该基因的质粒
: 。第二天收到。纯化测序正确。质粒邮寄公司B.告诉对方用什么细胞表达,要多少纯化
: 的蛋白,不能有标记什么的。两个月后收到纯化的蛋白和详细实验报告(包括质粒构建
: ,western,纯化等等)。纯化的蛋白送到学校测试中心C质谱测了一下纯度,浓度,确
: 定序列正确,寄给合作单位D。两个月之后收到活性试验结果和报告。该牛人写了摘要
: 和introduction,把公司的结果和合作的结果合在一起。老板修改投稿接收发表。从合
: 作到文章出来差不多半年。老板和合作方对其赞不绝口。

o****u
发帖数: 214
8
我不知道楼主说的是什么。这里有个例子,和楼主说的差不多。买点基因,测点活性。
我和作者交流过。总共也就是3,4个月时间的工作量。
Nature子刊的。应该够“不错”的标准了吧。
Nat Chem Biol. 2010 Nov;6(11):807-13.
Rational assignment of key motifs for function guides in silico enzyme
identification.

【在 O******e 的大作中提到】
: 你确认杂志的“档次也不错”?这些结果也太简单太少了吧
h********n
发帖数: 4079
9
这就是我梦想中的工作方式啊......

【在 W*****o 的大作中提到】
: 某牛人,每天朝九晚五,周末不加班,但文章很多,档次也不错。终于明白人家怎么做
: 实验的了。
: 老板和另一大牛合作,克隆新基因,表达纯化蛋白,对方做功能。课题交给该牛人。
: 牛人上网搜了一下。不去定引物,不去杀老鼠提RNA,直接从公司A定了含该基因的质粒
: 。第二天收到。纯化测序正确。质粒邮寄公司B.告诉对方用什么细胞表达,要多少纯化
: 的蛋白,不能有标记什么的。两个月后收到纯化的蛋白和详细实验报告(包括质粒构建
: ,western,纯化等等)。纯化的蛋白送到学校测试中心C质谱测了一下纯度,浓度,确
: 定序列正确,寄给合作单位D。两个月之后收到活性试验结果和报告。该牛人写了摘要
: 和introduction,把公司的结果和合作的结果合在一起。老板修改投稿接收发表。从合
: 作到文章出来差不多半年。老板和合作方对其赞不绝口。

j****x
发帖数: 1704
10
你这个例子举的不好,文章本身是提出一种新的方法,重点和核心不在“买点基因,测
点活性”,这部分算是验证而以。
好比ION TORRENT的方法发了Nature,不代表你用它机器测个序列也一样发nature。

【在 o****u 的大作中提到】
: 我不知道楼主说的是什么。这里有个例子,和楼主说的差不多。买点基因,测点活性。
: 我和作者交流过。总共也就是3,4个月时间的工作量。
: Nature子刊的。应该够“不错”的标准了吧。
: Nat Chem Biol. 2010 Nov;6(11):807-13.
: Rational assignment of key motifs for function guides in silico enzyme
: identification.

相关主题
关于腺病毒表达系统的问题。问大家一个100bp左右长引物的合成问题
为什么生物是由1%的高富帅和99%穷屌丝组成要克隆1000个cDNA到一个质粒
寻找含protein A 的质粒或cDNA.隔壁实验室老美经常问我要质粒但自己不抽提怎么办?
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g********0
发帖数: 6201
11
这篇文章的重头戏是计算和预测,是文章主要的significance,是idea的闪光点,在你
这里这部分就完全不算工作量了。

【在 o****u 的大作中提到】
: 我不知道楼主说的是什么。这里有个例子,和楼主说的差不多。买点基因,测点活性。
: 我和作者交流过。总共也就是3,4个月时间的工作量。
: Nature子刊的。应该够“不错”的标准了吧。
: Nat Chem Biol. 2010 Nov;6(11):807-13.
: Rational assignment of key motifs for function guides in silico enzyme
: identification.

o****u
发帖数: 214
12
我说的就是这个意思。以后生物的一个发展方向就是研究人员不再更多的耗费时间在
bench上面。而是做“设计”,更倾向于脑力劳动。实验交给专职的technician和商业
公司做。而实验技能的专职化,也能从整体上提高效率。
这篇文章的闪光点也就是在实验设计上。我和文章作者聊过,找motif这些工作,从时
间上算,也就是两个星期的事。很聪明,但工作量确实不大。但是没有实验验证是不可能发到nature子刊的。做实验的话,要照以前的传统方法。定几十个strain,然后一个一个的设计引物,克隆基因,再表达蛋白,要多少时间?还要专门雇佣至少1个PHD。现在呢,这些前期的东西都可以外包了。
所以,做生物以后需要的是更加"smart"的,而不是“skillful”的。

【在 j****x 的大作中提到】
: 你这个例子举的不好,文章本身是提出一种新的方法,重点和核心不在“买点基因,测
: 点活性”,这部分算是验证而以。
: 好比ION TORRENT的方法发了Nature,不代表你用它机器测个序列也一样发nature。

g********0
发帖数: 6201
13
不过大量的,范围广泛的skill训练也是必须的,否则对skill不了解,也想不出idea的
。就好比不从基层做起,就想直接做总经理也是不可行的。但我们反对把这些基础训练
变成一件很苦逼的事情,而且还范围还很窄,比如整个PHD或postdoc期间就做了
western blot和PCR这两件很苦逼的事。

可能发到nature子刊的。做实验的话,要照以前的传统方法。定几十个strain,然后一
个一个的设计引物,克隆基因,再表达蛋白,要多少时间?还要专门雇佣至少1个PHD。
现在呢,这些前期的东西都可以外包了。

【在 o****u 的大作中提到】
: 我说的就是这个意思。以后生物的一个发展方向就是研究人员不再更多的耗费时间在
: bench上面。而是做“设计”,更倾向于脑力劳动。实验交给专职的technician和商业
: 公司做。而实验技能的专职化,也能从整体上提高效率。
: 这篇文章的闪光点也就是在实验设计上。我和文章作者聊过,找motif这些工作,从时
: 间上算,也就是两个星期的事。很聪明,但工作量确实不大。但是没有实验验证是不可能发到nature子刊的。做实验的话,要照以前的传统方法。定几十个strain,然后一个一个的设计引物,克隆基因,再表达蛋白,要多少时间?还要专门雇佣至少1个PHD。现在呢,这些前期的东西都可以外包了。
: 所以,做生物以后需要的是更加"smart"的,而不是“skillful”的。

D*a
发帖数: 6830
14
其实这个发展模式挺好的。
v***a
发帖数: 1242
15
这个非常赞同

【在 g********0 的大作中提到】
: 不过大量的,范围广泛的skill训练也是必须的,否则对skill不了解,也想不出idea的
: 。就好比不从基层做起,就想直接做总经理也是不可行的。但我们反对把这些基础训练
: 变成一件很苦逼的事情,而且还范围还很窄,比如整个PHD或postdoc期间就做了
: western blot和PCR这两件很苦逼的事。
:
: 可能发到nature子刊的。做实验的话,要照以前的传统方法。定几十个strain,然后一
: 个一个的设计引物,克隆基因,再表达蛋白,要多少时间?还要专门雇佣至少1个PHD。
: 现在呢,这些前期的东西都可以外包了。

e**r
发帖数: 1144
16
"合作者" NB啊
我记得版上以前提到过一位,只做克隆发一堆一作的CNS
是谁来着?

么做
质粒
纯化
构建
,确
摘要
从合

【在 O******e 的大作中提到】
: 你确认杂志的“档次也不错”?这些结果也太简单太少了吧
f********n
发帖数: 6465
17
克隆新基因,直接从公司A定了含该基因的质粒。
我RACE克隆了2个不知道序列的新基因,花了2年时间,不知道基因的序列,怎么可以直
接从公司A定了含该基因的质粒???根本就是矛盾啊。
g****1
发帖数: 261
18

That's the way that science is supposed to be done. let others do the
tedious labor work :)

【在 W*****o 的大作中提到】
: 某牛人,每天朝九晚五,周末不加班,但文章很多,档次也不错。终于明白人家怎么做
: 实验的了。
: 老板和另一大牛合作,克隆新基因,表达纯化蛋白,对方做功能。课题交给该牛人。
: 牛人上网搜了一下。不去定引物,不去杀老鼠提RNA,直接从公司A定了含该基因的质粒
: 。第二天收到。纯化测序正确。质粒邮寄公司B.告诉对方用什么细胞表达,要多少纯化
: 的蛋白,不能有标记什么的。两个月后收到纯化的蛋白和详细实验报告(包括质粒构建
: ,western,纯化等等)。纯化的蛋白送到学校测试中心C质谱测了一下纯度,浓度,确
: 定序列正确,寄给合作单位D。两个月之后收到活性试验结果和报告。该牛人写了摘要
: 和introduction,把公司的结果和合作的结果合在一起。老板修改投稿接收发表。从合
: 作到文章出来差不多半年。老板和合作方对其赞不绝口。

o**4
发帖数: 35028
19
2年?
果儿太有毅力了

【在 f********n 的大作中提到】
: 克隆新基因,直接从公司A定了含该基因的质粒。
: 我RACE克隆了2个不知道序列的新基因,花了2年时间,不知道基因的序列,怎么可以直
: 接从公司A定了含该基因的质粒???根本就是矛盾啊。

S*****s
发帖数: 287
20
这个人我也感兴趣!我们实验室也有人只做克隆但是要求用到 cDNA 的人发什么文章都
挂名。找到这个牛人我也打两篇文章给我们同事看看,太励志了。

【在 e**r 的大作中提到】
: "合作者" NB啊
: 我记得版上以前提到过一位,只做克隆发一堆一作的CNS
: 是谁来着?
:
: 么做
: 质粒
: 纯化
: 构建
: ,确
: 摘要

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f********n
发帖数: 6465
21
根本不知道序列是什么,从头开始克隆,解析序列,这本来就不容易啊。
就你能耐就你拽。

【在 o**4 的大作中提到】
: 2年?
: 果儿太有毅力了

j****x
发帖数: 1704
22
你做的什么物种?不是太偏门就只你这儿独一处、或者你的基因太各色
别的物种都没有的话,那么很多办法可以想

【在 f********n 的大作中提到】
: 根本不知道序列是什么,从头开始克隆,解析序列,这本来就不容易啊。
: 就你能耐就你拽。

f********n
发帖数: 6465
23
农药的一个靶点,GPCR。
物种是一种虫。

【在 j****x 的大作中提到】
: 你做的什么物种?不是太偏门就只你这儿独一处、或者你的基因太各色
: 别的物种都没有的话,那么很多办法可以想

W*****o
发帖数: 1780
24
我也是做昆虫的。幸会幸会。在美国似乎只有蚊子和蜜蜂还好拿经费,其他昆虫的不好
混(果蝇不算),我才流落澳洲来了。

【在 f********n 的大作中提到】
: 农药的一个靶点,GPCR。
: 物种是一种虫。

j****x
发帖数: 1704
25
昆虫不是很熟悉,但是基因组/cDNA序列信息还是比较丰富的吧
“根本不知道序列是什么”,近缘物种总有些homolog吧,有这些信息做RACE足够了。
当然,RACE尤其是5'RACE,运气的成分比较大

【在 f********n 的大作中提到】
: 农药的一个靶点,GPCR。
: 物种是一种虫。

f********n
发帖数: 6465
26
所以要做很久才能做出来RACE的。你还笑我。
RACE真的不好做。

【在 j****x 的大作中提到】
: 昆虫不是很熟悉,但是基因组/cDNA序列信息还是比较丰富的吧
: “根本不知道序列是什么”,近缘物种总有些homolog吧,有这些信息做RACE足够了。
: 当然,RACE尤其是5'RACE,运气的成分比较大

D*a
发帖数: 6830
27
同情,同情~

【在 f********n 的大作中提到】
: 所以要做很久才能做出来RACE的。你还笑我。
: RACE真的不好做。

1 (共1页)
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