y***y
发帖数: 563 | |
n********k
发帖数: 2818 | 2 Sigma I believe
【在 y***y 的大作中提到】
: 如题.
: 大家都从哪里买?
|
h******y
发帖数: 1374 | |
D*****l
发帖数: 554 | 4 I tried tamoxifen from Sigma. But I am not happy with the data. |
S******9
发帖数: 2837 | 5 我用的也是sigma的，2年多了，结果不错呀。
【在 D*****l 的大作中提到】
: I tried tamoxifen from Sigma. But I am not happy with the data.
|
s******y
发帖数: 28562 | 6 EMD Biosciences
【在 y***y 的大作中提到】
: 如题.
: 大家都从哪里买?
|
l******n
发帖数: 298 | 7 请教sunnyday,你是用OHT做老鼠试验吗？那么我有一个问题，假设平滑肌细胞的ER老鼠
给了OHT以后诱导蛋白表达，那么停药以后新分化的细胞还会表达这个蛋白吗？我看有
的人一直给OHT,有的人给几天就完事了。
第二个问题请教的就是OHT的剂量你是怎么控制的。
谢谢哦 |
s******y
发帖数: 28562 | 8 这个实验其实是我们实验室其他人做的，我们是做诱导性KO，所以我们只要确认
有足够量的cre表达，让目标基因被切了就好了。
停药之后cre应该就停了。但是因为这个诱导的效率其实不是那么高，所以有些时候必
须反复的处理好几次，有的时候几天就好了，一切取决于genotyping 的结果。
如果你要用诱导性表达其他蛋白，tamoxifen 不是一个好系统。
【在 l******n 的大作中提到】
: 请教sunnyday,你是用OHT做老鼠试验吗？那么我有一个问题，假设平滑肌细胞的ER老鼠
: 给了OHT以后诱导蛋白表达，那么停药以后新分化的细胞还会表达这个蛋白吗？我看有
: 的人一直给OHT,有的人给几天就完事了。
: 第二个问题请教的就是OHT的剂量你是怎么控制的。
: 谢谢哦
|
l******n
发帖数: 298 | 9 谢谢sunnyday。
有两个基本的问题
Supposing it is Cre-ER recombination with ROSA-b-gal，after giving OHT,
tissue will be X-gal positive. For those cells showing blue positive
staining, after proliferation and dividing, will their daughter cells also
express X-gal? That said, is that a permanent recombination?
Secondly, supposing a certain percentage of bone marrow cells will
differentiate into new tissues, the differentiation was induced after OHT.
Do you think the newly differentiated tissue will be recombined with X-gal?
谢谢 |
s******y
发帖数: 28562 | 10
Yes，被cre重组之后，b-lac里面那个干扰序列就被永久的除去了，所以就
可以一直正常表达了
Yes，因为ROSA 整合的基因位置是在几乎所有tissue/cell里都能表达的。
【在 l******n 的大作中提到】
: 谢谢sunnyday。
: 有两个基本的问题
: Supposing it is Cre-ER recombination with ROSA-b-gal，after giving OHT,
: tissue will be X-gal positive. For those cells showing blue positive
: staining, after proliferation and dividing, will their daughter cells also
: express X-gal? That said, is that a permanent recombination?
: Secondly, supposing a certain percentage of bone marrow cells will
: differentiate into new tissues, the differentiation was induced after OHT.
: Do you think the newly differentiated tissue will be recombined with X-gal?
: 谢谢
|
|
|
l******n
发帖数: 298 | 11 谢谢，我觉得第一个问题你回答的很好，第二个问题，可能我没说明白，我的意思是说
先OHT给药，然后停药以后给骨髓bone marrow mononuclear cells. 新分化的组织如心
脏或血管不应该再有b-gal，因为这部分从骨髓或周边血来源的分化的组织在给药的时候还没有smooth muscle promoter的活性。
所以我觉得新分化的组织，从骨髓来源的，或者是Bone marrow mononuclear cells来源的，不应该再有蓝色的X-gal阳性显色。 |
b*****n
发帖数: 1841 | 12 搭车问一个，有没有人用CreER诱导表达toxin然后特异性地杀死一些细胞的报道？
CreER leaky 有多严重？
【在 s******y 的大作中提到】
: EMD Biosciences
|
s******y
发帖数: 28562 | 13 听得我莫名其妙。
你到底在做什么试验？cre连在什么promoter？心脏和血管和骨髓没有关系的，
除非你说的是心脏和血管里面跑的血细胞。
而骨髓和周边血又什么时候突然可以分化成平滑肌了？
时候还没有smooth muscle promoter的活性。
来源的，不应该再有蓝色的X-gal阳性显色。
【在 l******n 的大作中提到】
: 谢谢，我觉得第一个问题你回答的很好，第二个问题，可能我没说明白，我的意思是说
: 先OHT给药，然后停药以后给骨髓bone marrow mononuclear cells. 新分化的组织如心
: 脏或血管不应该再有b-gal，因为这部分从骨髓或周边血来源的分化的组织在给药的时候还没有smooth muscle promoter的活性。
: 所以我觉得新分化的组织，从骨髓来源的，或者是Bone marrow mononuclear cells来源的，不应该再有蓝色的X-gal阳性显色。
|
l******n
发帖数: 298 | 14 对不起，可能不是你的领域，我现在在模仿richard lee的实验。一个例子就是
http://www.cell.com/cell-stem-cell/abstract/S1934-5909(11)00053
bone marrow can differentiate into smooth muscle like cells. The promoter I
am going to use is SM22 or SMMHC.
做SMMHC-cre-ER的是德国人，发了几个nat Med. |
S******9
发帖数: 2837 | 15 我做的系统ko，leaky就很严重，有70～80%。
最近做的内皮的，deletion不是想象中那样好，大概60～70%，估计是2个老鼠合在一起
分细胞，也许只有1只deletion了，真不好说，准备单只单只做，这样内皮细胞长得慢
一些，但是应该结果可靠。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 搭车问一个，有没有人用CreER诱导表达toxin然后特异性地杀死一些细胞的报道？
: CreER leaky 有多严重？
|
s******y
发帖数: 28562 | 16 哦，原来你说的是干细胞啊，我还以为你在说胚胎发育过程的问题呢。
你说的那个问题我还是没有完全听明白。因为我不是做你们那个领域的。
但是我猜你想说的是，那个ER是连在smc promoter 上的，所以如果在处理
的时候，如果某些细胞不处于smooth muscle 状态的话，就不会被诱导，对吧？
如果你是这个意思，那么答案就是，大致如此。但是得多重复几次，因为
leaky expression 会是一个问题。
I
【在 l******n 的大作中提到】
: 对不起，可能不是你的领域，我现在在模仿richard lee的实验。一个例子就是
: http://www.cell.com/cell-stem-cell/abstract/S1934-5909(11)00053
: bone marrow can differentiate into smooth muscle like cells. The promoter I
: am going to use is SM22 or SMMHC.
: 做SMMHC-cre-ER的是德国人，发了几个nat Med.
|
