a***d 发帖数: 1998 | 1 我现在有个质粒,想用PCR的方法在target sequence两头加两个restriction sites,
然后再把target sequence切下来派用场。请问我必须作两次PCR,产物分别重提质粒,
最后酶切目标序列,与目标vector相连吗?
或者可不可以我只作一次PCR(用两个PRIMER),PCR产物直接酶切。再和目标vector相
连呢? |
I***a 发帖数: 13467 | 2 一次PCR(用两个PRIMER),PCR产物直接酶切。再和目标vector相
连 |
C*********u 发帖数: 811 | 3 一次PCR就够了
除非你要加的东西太长
【在 a***d 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我现在有个质粒,想用PCR的方法在target sequence两头加两个restriction sites, : 然后再把target sequence切下来派用场。请问我必须作两次PCR,产物分别重提质粒, : 最后酶切目标序列,与目标vector相连吗? : 或者可不可以我只作一次PCR(用两个PRIMER),PCR产物直接酶切。再和目标vector相 : 连呢?
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o*****r 发帖数: 156 | 4 Yes.
另外,primer设计的时候,两边的酶切位点旁边都要多放几个,这样酶切效率会高一些
。 我通常两边都加8个(atcgatcg)
【在 I***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一次PCR(用两个PRIMER),PCR产物直接酶切。再和目标vector相 : 连
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s******s 发帖数: 13035 | 5 这个去查NEB的catalog, 里面会告诉加几个的,各个酶不一样
【在 o*****r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Yes. : 另外,primer设计的时候,两边的酶切位点旁边都要多放几个,这样酶切效率会高一些 : 。 我通常两边都加8个(atcgatcg)
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