w*******y
发帖数: 60932 | 1 Urban Decay Primer Potions, Set of 4 Full Size Potions + Free Sample of
Complexion Primer
Urban Decay:
https://www.urbandecay.com/box-of-potions/265,default,pd.html?dwvar_265_
color=4Primers&start=3&q=box of potions
These are about $20 individually. I've been using the Eyeshadow Primer
Potion for eyes for a few months and it works really well.
I use the Primer first- I apply it with my finger not the wand. I follow it
up with a Mac loose pigment, then do my eye makeup as usual. It holds my
ey... 阅读全帖 |
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l******k
发帖数: 27533 | 3 【 以下文字转载自 Fashion 讨论区 】
发信人: lilybank (炎炎夏日何处去，采得青莲一茎香), 信区: Fashion
标 题: Re: 求推荐化妆刷，eye primer 和脸primer
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 28 01:45:10 2011, 美东)
1-1.眼妆 是不是不需要特别好的？目前我想添一个BB眼线膏+刷，再加一个涂眼影的小
刷子，一个晕眼影的中刷子，是不是就够了
BB眼线膏和刷好贵，试试PF的吧，也挺好用。
新手用眼影，应该用好点的，不容易出错。DIOR的大地色5色眼影。同样菜鸟的我特别
喜欢hourglass的双色眼影，粉质很好，有点日状的闪，颜色美丽。只有两种颜色，绝
对不会出错，十分漂亮。这个sephora有卖，你去试试，肯定喜欢：）就是有点贵。。。
1-2 腮红 我现在用的是benifit的胭脂水和蜜桃粉，胭脂水用手打就可以了，但我应该
还会添腮红，所以得买一个
赶快去买GA的，现在还在20% off, 跟benefit不是一个水平的，太美了～
1-3 底妆+setting powder，我有个问题啊，粉饼和set... 阅读全帖 |
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E*******2
发帖数: 131 | 4 我正在做ChIP-qPCR， anti acetyl Histone H3 and H4, 将来也会考虑做anti
methylation histones，现在遇到的问题
是，找不到合适的control gene primers. Millipore 公司提供的chip kits里用的
GAPDH。 但是我们领域有几篇文章是用
的beta globin和beta tubulin。我的老板说用我们领域已发表的。然后我查了一下他
们用的primer sequences，有意思的
是他们用的是小鼠，但是primer sequences和大鼠的基因是完全匹配的，而和小鼠有1
－2个碱基不匹配。并且beta
globin的primer在大鼠基因中扩增的是hemoglobin epsilone2，而在小鼠中最可能扩增
的是hemoglobin y， beta－like
embryonic chain。 我的问题是，如果我选择beta globin做为我的control gene，我
是否应该重新设计primer，还是说
我可以直接用人家发表的primer sequence？但是他们用的是sybr |
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c******r
发帖数: 3778 | 5 这个很简单，仔细想想就明白了。
当然不可以。random primer不能用来做qPCR。原因是这个是random的，所以对各个RNA
的RT efficiency是不一样的，所以以后的qPCR都没意义了。
如果要qPCR可以用polyA或者target specific primers。但是也不能混用。原因是
polyA会RT，而你的specific primers也可以RT，结果是你的target被polyA和specific
primers分别RT，而QC只被polyA RT。但是poly A和specific primer的RT efficiency
是不一样的，所以二者不再可比。
所以只能要么用poly A，要么target和control都用specific primers。
btw，gapdh的做RT是有kit的，买一个就可以了吧？
QC； |
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 理论上说应该没有问题
不过可能要摸条件
我用70-80，还有>100的primer做过regular PCR
不过我用的primer
1.Fwd和Rev差不多等长，Tm接近，
而且priming sequence (for target gene)部分的Tm也接近
2.我用的priming sequence比较长，24-28nts
我觉得你做的时候可能
1.不仅reaction的条件要摸
2.PCR cycle的设定要摸（除了gradient，还有touch down，touch up，3 steps, 2
steps之类的可以试）
3.有可能template也要试,我遇到过用整个plasmid不行，
把target gene的fragment切下来胶纯化以后做模板就没有问题
4.如果一切不顺利，建议reverse primer也设计个长点的
哦对了，还有一点，长的那个primer，最好要订纯化过的
不用HPLC纯化的也要PAGE纯化的
或者订了std desalted的回来自己用PAGE胶纯化一下
越长的primer越有可能5'段少一些（对于>100 nts的primer可能少的是一... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 7 OMG
LZ used degenerated primer for cDNA single strand synthesis
R U Seriously? an amateur molecular biologist LZ?
Please go to
//www.protocol-
online.org/prot/Molecular_Biology/RNA/Reverse_Transcription__RT____cDNA_Synthesis/index.html
RT reaction is also called first strand cDNA synthesis. Three types of primers can be used for RT reaction:
oligo (dT) primers, random (hexamer) primers and gene specific primers with each having its pros and cons.
or
/media.affymetrix.com/support/technical/usb... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 8 Just putting a value in the "Organism" field of the "Primer Pair Specificity
Checking Parameters" section is enough. Click the question marker followed
by each parameters to learn more, such as
"With this option on, the program will search the primers against the
selected database and determine whether a primer pair can generate a PCR
product on any targets in the database based on their matches to the targets
and their orientations. The program will return, if possible, only primer
pairs that d... 阅读全帖 |
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B*********0
发帖数: 385 | 9 filler里面好像有些填充粉之类的东西,他们claim说如果有非常tiny的scratch,filler
primer可以帮你填平,但是我实际使用的经验表示效果很差,不如先用点glazing
compound填好了再喷.sealer是比较普通的primer,我觉得etching不错而且能防锈.
sandable primer我觉得跟sealer没啥大区别就是颜色不一样,自己选和finish接近的颜
色.
另外要提醒你的是漆和漆的差别非常大.个人感觉advanceautoparts卖的dupli-color的
产品比较好用,Walmart卖的那些rust-o-leum的就差些.finish的漆一定要买好的,烂的
就是起皮没得说.
另外关于砂纸的使用: 准备工作用220号的干磨,不要用再小的了我之前用150号的结果
弄得全是道子最后用400号磨了半天都磨不平.220号磨到差不多之后换320的水磨,平了
之后检查,有道子用glazing compound填平,然后开始喷primer.薄薄一层,每喷一层等至
少1-2小时干之后用400号水磨,再干之后再喷下一层.我的做法是每层都磨太麻烦,我喷... 阅读全帖 |
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G***l
发帖数: 355 | 12 两本都是好书。primer高级一点，primer plus是入门级的，虽然名字看上去高级点。
两者内容有一定重复。如果你c++基础不是特别好的话就先读primer plus，再看primer
，然后做做project，再读effective c++。这些搞完你基本就可以自称能熟练使用c++
了。想学点奇技淫巧写一些祸害别人祸害自己的代码的话，可以再看看Modern C++
Design: Generic Programming and Design Patterns Applied。
最后可以看看c++11的一些feature跟实现，比如说蛋疼的rvalue reference，move
construtor。。。 |
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e****s
发帖数: 1125 | 13 primer dimers!
你这个100 bp的用Primer dimers最合适了。
定2个50-60左右的primer，15bp 左右的overlapping区域，先overlapping PCR做成100
bp左右的primer.
,
primer
PCR |
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A******y
发帖数: 2041 | 14 No, you have to do it at least when you get the primers in to make sure they
are good, linear, and have a good range. If you do delta delta C(t) method
, you don't have to do it every run but checking is definitely necessary.
I know a lot of people don't do it, that's why you see NCS paper with mouse
primers using in human samples or primers flat out don't work. I know a big
lab in Harvard don't check their primers because half of their primers are
not efficient nor linear in their NCS papers.... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 15 No, you have to do it at least when you get the primers in to make sure they
are good, linear, and have a good range. If you do delta delta C(t) method
, you don't have to do it every run but checking is definitely necessary.
I know a lot of people don't do it, that's why you see NCS paper with mouse
primers using in human samples or primers flat out don't work. I know a big
lab in Harvard don't check their primers because half of their primers are
not efficient nor linear in their NCS papers.... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 16 I would try primer blast from NCBI. It's basically using PRIMER3 to design
primer followed by blast alignment to evaluate specificity.
Paste the sequence of the species-of-interest in the PCR template. In the "
Primer Pair Specificity Checking Parameters" section below, specify the
species you want to avoid the primer to amplify. In this way, the algorithm
will avoid primers having potentials on that species. |
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T****i
发帖数: 15191 | 17 “ I just put the primers as input into this program and within seconds it
tells you there’s problems with it,” Altman said. “It’s freely available
. It’s not hard to use at all. It’s one of those things you’d do as a
basic quality control check. It seems like they hand-designed these primers
and it seems like they didn’t use computer tools to check it.
For reasons that remain unclear, the CDC opted to design its own COVID-19
test with new primers despite the fact that the World Health Organizati... 阅读全帖 |
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x**m
发帖数: 129 | 18 不太明白你的意思.
1 - 如果你的意思是只paint primer，不刷漆，那么primer过段时间会变黄，结块。刷
了primer还是得刷油漆。
2 - 如果你的意思是只使用一遍paint + primer的那种二和一漆，那要看你刷的墙原先
是什么颜色，是否足够clean。如果是同色或者接近色（比如白色），那么应该问题不
大；但如果颜色差距大，即使2合1的漆也无法盖住原来的颜色，恐怕你还是得刷2次。 |
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r********6
发帖数: 217 | 19 刚买了房子，客厅和饭厅是浅绿色的，卧室是白色的。想把所有房间都刷成另外一种浅
色。是不是必须都用primer先刷一遍？还是白色的就不由primer了， 直接上油漆？还
有如果用了primer，一般还得刷几遍漆？如果不用primer，得刷几遍漆？谢谢 |
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d**********0
发帖数: 13081 | 20 挑了这个最贵的 Primer, 把那有味道的小房间重刷一遍。
用了一罐不够， 又去 lowes 买了一罐。 这个 Shellac 味道把人给熏坏了。
B-I-N is the original pigmented shellac stain-killing primer-sealer
Great for knots, water stains, fire and smoke damage
Dries in minutes; recoat in 45 minutes
Seals in tough stains, pet, smoke and fire odors
Shellac-base primer-sealer
Zinsser Gallon Interior Oil Primer |
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x*7
发帖数: 11281 | 22 我也正好想尝试一下，反正很便宜。
在网上狗了狗，这里有个评价还不错的
http://forum.gon.com/showthread.php?t=661838
The Russian small rifle mag primers are actually becoming one of the "
preferred" primers for Highpower service rifle competition. My tests have
shown they give very consistent velocity, and I know some really hard
shooters getting awesome 600 yard scores using them. These are usually
fairly stiff loads using the Sierra 77 and 80 GN MatchKings.
但是也说了，NON MAGNUM的底火不能用，
I would definitely not use the non-magnum version... 阅读全帖 |
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x*7
发帖数: 11281 | 23 自己乱搞
按照QBQ灰猫的方子改了几个M67弹壳，打了，能行
另外改了几个54R的，没枪可以试验
如图，
从左到右,上到下
WOLF large rifle boxer primer
convert berdan primer加上个large rifle primer的火台（anvil）
convert以后的底火孔
侧漏了
convert的54R弹壳
打过的berdan primer+anvil |
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m**********g
发帖数: 2661 | 24 无论是眼部primer还是唇部primer, 还是其他primer.
另外用眼皮的primer能不能防止眼线晕？ |
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p*****e
发帖数: 16417 | 25 帮助后续彩妆上妆的东西
无论是眼部primer还是唇部primer, 还是其他primer.
另外用眼皮的primer能不能防止眼线晕？ |
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u**********y
发帖数: 656 | 26 我用过LM的primer、BRTC和SKIN79的BB霜
感觉primer是给干皮的MM用的，我是因为直接上foundation太干会起皮，所以
foundation之前用一层primer会有保湿和定妆的作用
BB霜感觉是moisture和foundation的混合物，保湿的同时有粉底的作用，但是自然的bb
霜遮瑕都不太好，这下好的大多比较厚重。而且BB霜没这么多skin color可以选择，所
以涂了有时会很白。。。。
MM要是买BB霜就不需要买primer了，BB霜本身保湿+定妆都还不错 |
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l******k
发帖数: 27533 | 28 1-1.眼妆 是不是不需要特别好的？目前我想添一个BB眼线膏+刷，再加一个涂眼影的小
刷子，一个晕眼影的中刷子，是不是就够了
BB眼线膏和刷好贵，试试PF的吧，也挺好用。
新手用眼影，应该用好点的，不容易出错。DIOR的大地色5色眼影。同样菜鸟的我特别
喜欢hourglass的双色眼影，粉质很好，有点日状的闪，颜色美丽。只有两种颜色，绝
对不会出错，十分漂亮。这个sephora有卖，你去试试，肯定喜欢：）就是有点贵。。。
1-2 腮红 我现在用的是benifit的胭脂水和蜜桃粉，胭脂水用手打就可以了，但我应该
还会添腮红，所以得买一个
赶快去买GA的，现在还在20% off, 跟benefit不是一个水平的，太美了～
1-3 底妆+setting powder，我有个问题啊，粉饼和setting powder能不能用同一个刷
子？比如热捧的mac 187.还是要分别买？并且求推荐。
刷子我舍不得买贵的，等大牛推荐。
1-4 唇刷是不是不用也行。本人唇形厚，不好看，只敢中间提亮，不然很猪很悲剧
megan fox看了岂不是要气死～！
2 眼睛老出油，双眼皮摺能积一层眼影，求推荐，urbe... 阅读全帖 |
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f*****a
发帖数: 7 | 29 I only use SYBR. What I did is
1. Use Primer Express 1.5 or 2.0 from ABI to design primers. Follow their
guidelines. Or just use Primer3.
2. Use Amply 1.2 (or higher) and Netprimer http://www.premierbiosoft.com/n
etprimer/) to evaluate candidates.
3. Blast your primers.
4. Pick up 2-3 pairs. Do standard and dissociation curves. Chose the one wor
k best.
Make sure to chose the right normalization primers for your experiment. 18S,
actin, GAPDH, tubulin... |
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w******e
发帖数: 1187 | 31 想用random primer做tissue RNA的RT，然后用GAPDH specific primers做qPCR as QC；
同时用aptamer specific primers做RT和qPCR。可以在RT这一步把两种primer放在
一个reaction里做吗？有什么可能的问题？
非常感谢！ |
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m*********7
发帖数: 606 | 32 我认为楼主现在要做的不是如何选择哪个sequence，如何设计primer,而是先确定你现
在使用的组织mRNA或cDNA库里这个蛋白是否有表达，表达的isoform是否如sequence 2
所述，否则的话做的都是无用功。
你首先可以在coding region（最好是两个reporting sequence共有的区域）设计
primer扩增300-500bp的片段。这个片段大小很容易扩增，可以很迅速的告诉你此蛋白
是否在你使用的组织mRNA或cDNA库里有表达，是否可以继续使用该材料进行下一步克隆。
如成功的话，再设计两对primer,分别扩增5'-UTR至coding region, 和coding region
至3'-UTR的片段，同样也是300-500bp,这样可以确认该蛋白是否以你所说的sequence 2
的形式表达。如果是的话，再考虑重新设计primer，PCR条件优化，或者扩增两三个800
-1000bp的片段进行拼接。
如果蛋白coding region有表达，而5'-UTR或3'-UTR的扩增未成功，说明该蛋白是以其
他的isoform存在，你需要做5'-RAC |
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x********u
发帖数: 430 | 33 I have to design a forward primer consisting of restriction sites (8 base),
operator region (35 base), ribosome biding site (6 base), spacer sequence (
about 20 base) and the priming sequence (21 base) of my target gene. The
total lenth would be 100 base for this forward primer and the reverse primer
is just 30 base. Does anyone know if this primer set would be okay for PCR
amplifying my target gene (around 720bp)?
Thanks a lot. |
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R****n
发帖数: 708 | 34 Generally speaking adaptor and primer are all oligo nucleotide sequences.
The difference lies in their roles in a 2nd generation sequencing reaction.
Adaptor is used for ligating the primer to the target sequences(usually for
DNA,RNA,miRs).Certain sequences are more efficient for ligation reaction.
Sometimes there will be a barcode sequences between adaptor and primer to
identify each sample when multiple samples are sequenced.common primer pair
is used for amplify a huge pool of ligated sequenc... 阅读全帖 |
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g******1
发帖数: 295 | 35 是所有fragments都用同一对primer对吗?
是不是加在5'端的叫forward primer，3'的叫reverse primer？
16S rRNA 测序时，我还看到一个概念叫universal primer,请问什么是什么意思？
谢谢！
is |
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h*******o
发帖数: 4884 | 36 没有完全看懂楼主的意思 , 个人理解
所有的One step RT-PCR kit都不可能用gene specific primer来做RT这一步
都是用的oligodT之类的primer来做RT,然后在接着标准的PCR而已
只不过对Taq的要求高一点而已,需要HotStart Taq
user自己加入自己的specific primer for gene of interest.
整个mixture其实就是先RT在PCR, 一般Protocol都要求42度1小时RT,然后直接65赌灭活,再开始PCR的cycle.
我以前用过很多One-step RT PCR,如果不出条带一般是自己的引物的问题
至于One-step realtime PCR 没试过
primer |
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y**q
发帖数: 570 | 37 如果我从ncbi search出突变基因sequence，想copy 还有mutant gene sequence 片段
前后 500bp 到相关primer design soft website 运行，找找出primer design
software 推荐 primer. 请问相关 primer design software link 推荐， 多谢！ |
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h*********g
发帖数: 18 | 38 I will design primers for qPCR.
First, I will find the cDNA for the gene from ensemble website. Then put the
cDNA sequence into Primer3 website.
For the parameters, I set as following
Primer size Min 20, Opt 22, Max 27,
Primer Tm, Min 57, Opt 60, Max 63.
GC% Min47, Opt 50, Max 65
It that all I need to consider? Is there anything else I need to pay
attention?
If anyone knows any good websites teaching how to design primers, please let
me know.
Thank you very much. |
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G***G
发帖数: 16778 | 39 I set organism as Ixodes and got the following output. Does it mean
the designed primer bind well with the target organism (Ixodes) or not?
What I want is a primer which doesn't bind with the target organism (Ixodes).
Thanks.
Products on target templates
>XM_002400420.1 Ixodes scapularis map-kinase activating death domain protein
, putative, mRNA
product length = 3845
Forward primer 1 CAGCAGCCGCGGTAATTCC 19
Template 88 GT........C.G..C... 106
Reverse primer 1 CCCGTGTTGAGTCAAATT... 阅读全帖 |
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A*****s
发帖数: 13748 | 40 rt
primer升级成primer plus了？为啥primer没有再版了？ |
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B*********0
发帖数: 385 | 42 不要用filler primer，这个是最难用的。用Primer sealer或者sandable primer。用
之前猛摇，珠子开始响之后摇1分钟，然后找个没用的cardboard喷两下确认好了再喷。
喷任何东西之前都要做这个步骤。 |
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A**u
发帖数: 2458 | 43 是
plus 简单点
没有c++ primer好
c++ primer 圣经啊，没一句废话, 我看了effective c++, 才慢慢理解一些 |
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e*****g
发帖数: 225 | 44 买了一桶primer竟然没够，衣柜里面有一小块墙没的primer刷了。不过也不打算再买，
想直接上漆。可是不知道漆是不是
也会短缺。据说漆用起来没有primer废？ |
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m******c
发帖数: 1202 | 45 浅粉浅蓝我都刷过，浅粉用的是kelly more的，要刷好几遍，才能盖住原来的黄色，后
悔没用primer。浅蓝用的home depot加primer的漆，刷两遍完全盖住。个人喜欢不加
primer的漆，虽然刷起来费劲，可是效果更好，颜色看上去非常纯净。 |
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G**********e
发帖数: 11693 | 47 话说eye primer是urban decay的最好，管网上现在有extra large的eye primer potion 仅$15，外加15% off site
wide（还不确定是否能apply to sales items）和free shipping on orders $50+，我想入一个，但苦于没有其他东西想
买，希望可以找到jm拼单，这个东东真的很好！
我感脚这个东西会走得很快，从速！站内联系！
http://www.urbandecay.com/XL-Eden-Eyeshadow-Primer-Potion/291,d
start=8&cgid=9999&prefn1=isOnSale&prefv1=true |
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x*7
发帖数: 11281 | 48 没有杯具，berdan primer确实比large boxer稍微大，
我是在berdan primer里面加了个large primer的火台，
最后一个pp，就是 分离的底火 |
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x*7
发帖数: 11281 | 49 嗯，
Berdan Primer水太深，即便是Tula的primer
都好多尺寸，昨天在俄国网站上找到了尺寸表
http://www.mpzflame.ru/production/primers/
4.5到6.47各种尺寸递进，太复杂了
Add:
俄国的54R用的那种底火是.254的，KV27N，
这个东西好像美国市场上还没有吧，估计也没人买。
对了，那个毛子铜壳子狙击弹，就是这个尺寸底火？
是. |
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G**********e
发帖数: 11693 | 50 我现在有一个nars的primer，是那种很想防晒moistrizer的texture，我不太喜欢，想
退掉。
请问smashbox的primer是不是那种matte的，silicon based的，擦完以后皮肤会很光滑？
用过两种质地primer的mm可不可以说一说哪种好一点啊？ |
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