c**********8
发帖数: 229 | 1 想买娇兰的primer，不知珍珠和金箔哪个好些？长草很久了但是太贵了所以一直没下手
。用过的姐妹麻烦给点建议，谢谢。 |
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d****5
发帖数: 129 | 2 还要再擦粉底吗
想买娇兰的primer，不知珍珠和金箔哪个好些？长草很久了但是太贵了所以一直没下手
。用过的姐妹麻烦给点建议，谢谢。
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z**j
发帖数: 1579 | 3 昨天收拾basement，发现好几个之前刷墙用过的装primer和装Joint Compound的塑料空
桶。里面的残余物质早就干透了。这几个桶的大小都是2 Gallon的，觉得大小挺合适，
有盖子，有把手，不知能不能利用一下在种菜种花里，比如早期盆栽育苗或者装个厨余
什么的。就是不知会不会有有害物质对土壤或者植物造成污染。
如果大家不建议，明天正好是垃圾日，我就把它们清理了。
谢谢。 |
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w***f
发帖数: 75 | 4 算是把， 以前曾经翻译过 "Inside Visual C++" (Visual C++ 技术内幕),
"Effective Java", "C++ Primer", 写过 "COM 原理与应用".
有些 fans 认为只要是他或一个叫侯俊杰的台湾作家写的， 翻译的， 就必属
精品。 |
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B****S
发帖数: 597 | 5 理论上，c++ primer应该包括所有东西了，虽然细节未必面面俱到。 |
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l****c
发帖数: 838 | 6 Which version of C++ Primer are you reading?
Make sure it discusses C++11. |
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b**********y
发帖数: 112 | 7 请问在哪可以下载免费Primer 2011 Quickbooks 软件，麻烦知道的XDJM给个链接。非
常感谢！ |
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b**********y
发帖数: 112 | 8 请问Primer 2011 Quickbooks 软件专门for non-profit organization，麻烦知道的
XDJM给个链接。非常感谢！ |
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d****o
发帖数: 361 | 9 From which company did you order your primer?
we order from Invitrogen, and they use different salt concentration
to calculate Tm. It's not about right or wrong, coz Tm changes with
oligonucleotide and salt concentrations, so u'd better calculate it by
yourself. Some softwares like Vector NTI can do it, I think Primer3
works too.
we use oligo conc. at 250 pM and salt conc. at 250 pM to calculate
the Tms. |
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E*******2
发帖数: 131 | 10 谢谢ls的，我positive和negative的都需要。因为所查的文献用的就是这两个基因，所
以怕以后发文章的时候reviewer罗里吧唆，所以决定用这两个的。我后来给公司写信订
primers的时候问清楚了，所以问题应该算解决了。不过你说的这个网站很有用，学习
了。谢谢！ |
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b******e
发帖数: 3348 | 12 这个我用过，感觉不是非常好，也可能是我不会用，请问在设计chip的primer的时候这
些常量应该如何调节，比方说product是不是应该在500-1000之间等等。多谢。 |
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h****k
发帖数: 182 | 13 设计引物的时候发现使用primer 3 网站预计的melting temperature和idt网站预测的
相差很大，有4-5度，到底该选哪种计算方法？？ |
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b********n
发帖数: 72 | 14 invitrogen 订primer 居然花了1个月还没到，准备换公司了。 |
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G*****h
发帖数: 320 | 15 Just for clarification:
First, melting temperature does not equal annealing temperature.
The optimal annealing temperature in a PCR is:
T(opt) = 0.3 x Tm(primer) + 0.7 x Tm(product) -14.9
Second, the most accurate algorithm to calculate Tm is based on the nearest-
neighbor interaction model:
Tm (°C) =dH/(dS + R x ln(c/4)) - 273.15 + 16.6 x log[salt]
(Note: dH and dS = deltaH and deltaS)
where dH and dS are the enthalpy and entropy for the helix formation of an
oligonucleotide duplex, respectivel |
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a****d
发帖数: 1919 | 16 primer bank @ Harvard Univ |
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w******e
发帖数: 1187 | 17 想test tissue RNA和2'-F RNA在plasma里的stability, 准备做qRT-PCR
side by side.
请推荐housekeeping RNA的primers。多谢！ |
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h********n
发帖数: 4079 | 18 你是否在实验上验证过你说的"random primer不能用来做qPCR"?
RNA
specific
efficiency |
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h****g
发帖数: 439 | 19 我现在都是用random primer做RT，然后做QPCR，内参挺准的啊
难道我所有的结果都不可信？ |
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m**********2
发帖数: 6568 | 20 我做过8个基因的。用基因specific reverse primers RT,稍微上游一点，一对儿一对
儿的做
real time qPCR。效果不错。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 21 你是说2kb？如果你想表达这个蛋白，很简单啊。设计对primer，提点RNA直接做RT-PCR
好了。这样得到的就是coding sequence，没有intron，表达比较容易吧？
从genomic DNA上clone除了exon还有intron，有时候不一定在细胞里面能够正确表达。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 22 。。。没有RNA sequence？
protein叫什么名字？要human的还是mice的？
primer |
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v***a
发帖数: 1242 | 23 真是非常感谢你！你给的答案就是我想问的！
你所说的前两步我已经做了，所以已知此蛋白表达，并且sequence 2很可能不适用于我
想要得到的组织中的gene。
后来感谢clonebar同学，他帮我查到了一个序列，跟我查到的sequence 1是一致的，并
且有一部分的5'及3' UTR sequence，我刚设计了新的primer，下周到就可以进行实验
了。
我也几乎翻遍了跟我这个gene有关的paper，没有见到有clone full-length的，并且
sequence 2貌似是大家引用最多的（比如设计此gene的siRNA等）。
谢谢你说的5'和3' RACE，这个我没想到，如果sequence 1也不行，我就会采取这个办
法。
非常感谢！！！
2
隆。
region
2
800 |
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m*********7
发帖数: 606 | 24 同学，问问题的时候最好想一想，你这样问的方式别人在不了解你的目的，你的课题的
时候能否看懂？
你设计primer的目的是扩增特定基因吗？你的意思是你已经有了一个一定要用的下游引
物？用这个引物去blast基因库发现它能和除了你的目的基因外其他的基因序列match?
事实上，我个人认为你根本不用理会下游引物blast出来的序列。一则100%match的情况
不多，加上上游引物要去扩增出其他基因的概率其实很低，二则你通过软件选好参数设
计出来的引物都是要通过PCR检测，看扩增出来的产物片段长度是否和预定一致。不一
致的话就扔了重新设计。不用费这么大劲纸上谈兵。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 25 这个东西好用吗？ 我安装了3.0，搜索一段高GC区间的引物，怎么都搞不定。最后还得
用Primer preimier5.0 |
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k*****u
发帖数: 14053 | 26 请问invitrogen make得primer
收到后
因为人不在2周
一直放在室温
没加水溶解
要紧么
谢谢 |
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A******d
发帖数: 571 | 27 同样的primer用primer3 和 primerblast算下来居然差10度。该相信哪个？要用来做
real time
pcr |
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G*******e
发帖数: 76 | 28 我正在设计一个fusion protein lead (~30氨基酸）的PCR primer, 需要加入Kozak
sequence。我打算在start codon 之前加CACC， 但是＋4不是 G。 请问这个Kozak
sequence是否足够strong？有更好的design吗？
拜谢！ |
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f*******g
发帖数: 35 | 29 麻烦问一下 大家谁在用pVR1012 这个vector？我在网上查到 这个vector 是Vical,
Inc. 公司的， 但没有相关的信息阿！ 这个vector的reverse and forward
sequencing primer sequence是什么呢？
谢谢！ |
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m****M
发帖数: 360 | 30 有哪位做过抗体和DNA conjugate的？crosslinker是什么？最多能连多长的DNA/oligo/
primer （i.e.双链,单链都可以）。连后是怎么分离没有连上的DNA，要保持抗体仍然
具有结合抗原的能力。非常感谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 可以做，但是条件得摸索一下。
我做过70+ 20 的组合条件，感觉杂带比较多。不过把正确带切出来再放大一次就好了。
,
primer
PCR |
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n***w
发帖数: 2405 | 32 I never tried that long. I only tried 45 as the max.
You can also do overlap PCR so you can use short primer at every time. |
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b******n
发帖数: 4225 | 33 可以分两到三次PCR，毕竟长引物价格贵而且容易合成错误
第一次用RBS+SPACE+Priming sequencing作为forward
得到的产物纯化一下作为第二次PCR的模板
第二次用restriction+operator+RBS+Space作为forward
,
primer
PCR |
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Z******5
发帖数: 435 | 34 没试过。不过不太建议这么做，合成100bp以上的引物应该不便宜吧。
要是我的话，就直接在primer上加上酶切位点和保护碱基，做普通的PCR。另一部分直
接合成两条Oligo退火（参考构建shRNA），然后与酶切后的PCR产物，酶切后的载体一
起去做链接，一次就能搞定。 |
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a*****y
发帖数: 277 | 35 PCR should work but your primers will be expensive enough that you'd better
to get the gene chemically synthesized. 720 bp = 300 USD? |
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X******n
发帖数: 914 | 36 做过120bp的primers，没啥问题。但是价格很贵，360刀一对。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 37 realtime PCR you could try primer bank, google it. |
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g*****d
发帖数: 27 | 38 谢谢楼上的，不同的primers都试过了，不同的水也试过了，不同的dNTP
concentration也试过了。用的是bulldog的Taq，都会出现size相同的dimers. 但是奇
怪的是用QPCR的mastermix试过后，出现了不同Size的bands。真是相当奇怪。
sequence在lab的电脑上，周一才能拿到。请楼上的兄弟帮忙分析下，谢谢。 |
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l*****x
发帖数: 658 | 39 Can anyone share the sequences of J and C primers to confirm the presence of
TCR gene in hybridoma fusions?
Thanks |
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b******e
发帖数: 3348 | 40 老板催着我干新活，结果上周没时间再看一遍文章，周日晚上好不容易抽点时间看，发
现新添的supplemental figure中用的一个primer的sequence老板忘了写，就改了然后
发个email给老板，结果老板回信说周五已经投出去了。。。。。。 |
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b******e
发帖数: 3348 | 41 还羡慕呢，指不定什么地方又出幺蛾子。这种没写primer会不会是很严重的问题？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 42 不用紧张，如果被录用的时候，还有一个proof 的机会
而且大部分审稿者根本就没有这么仔细会慢慢核对你的primer sequence |
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h********n
发帖数: 4079 | 43 我以前发的一篇文章在最后清样的时候发现primer序列错了. |
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y******n
发帖数: 8667 | 44 Why put primers sequence there? No one care. It is not necessary. |
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e****s
发帖数: 1125 | 45 我们实验室差不多10年的primers都还在用。都是-20保存的。 |
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c**********e
发帖数: 230 | 46 我们实验室的人说的, 恐龙的dna都还在呢, dna很tough. primer有那么容易降解吗?
呵呵 |
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m*****z
发帖数: 1451 | 48 我有碰到primer放在室温2个月不work了的
害我trouble shooting了好几天 |
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s******r
发帖数: 91 | 49 adapter加在靶标序列上为测序primer提供锚定位点 |
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