g******1
发帖数: 295 | 1 请问下什么是common primer pair?
谢谢
.
for
pair |
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w******n
发帖数: 767 | 2 没啥讲究吧，只不过用不着random了。我有时检测多个gene，用oligo(dt),做完反转录
，取RT产物可以检多个gene，没有问题。
primer |
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m***o
发帖数: 272 | 3 谢谢ｗａｋｅｓｍａｎ回复。
就是说你用的还是２step RT-PCR了？我现在还是需要做ｏｎｅ ｓｔｅｐ，就想试着
往ｋｉｔ里add random primer是不是可以有特异条带生成。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 4 from his/her sentence
>做realtime RTPCR， 自己上网设计的引物 mRNA as template 用one step RTPCR, then 自己上网设计的引物 PCR
竟
然一点不能得到产物
but with direct genomic DNA as template 自己上网设计的引物 可以得到很干净的条带
then you can IMAGE that---
because he/she did not have the full 3' UTR end that target full sequence information
so he/she used degenerated primer+oligo T tails for one-step qRTPCR
otherwise without below his/her 0F paste.
---- |
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w******n
发帖数: 767 | 5 one step rt-pcr用的就是 gene specific primer RT,说明书里通常说不推荐用random
或oligo(dt).
活,再开始PCR的cycle. |
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h*******o
发帖数: 4884 | 6 了解了
原来我一直以为one step RT-PCR的master mix里面有oligo dT之类,用来做RT step
然后user 自己加入的gene specific primer只是用来扩增用的
hoho, 傻兮兮的用了好几年都不知道原理
谢谢!
random |
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x*****o
发帖数: 441 | 7 做DMS RNA footprinting 的时候, unmodified 的RNA lane 也有很多的band, 这个该
怎么办?
primer是P32 label的, anneal 是90度1min,然后室温cool down.
大家有什么建议吗? |
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g***j
发帖数: 40861 | 8 为啥blast出的primer 有的用粗体箭头表示，有的用正常箭头表示？难道意思是粗体的
那个最好？ |
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D********0
发帖数: 409 | 9 补充一下，1个ct也有可能是dna造成（尤其是dna concentration比较低的时候）。
通常，final concentration of primers is 200nM. |
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K*C
发帖数: 2825 | 10 本来是用来配Random primer的，dT好像应当用superscript，不知道dT和Multiscribe
能不能一起用 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 11 if to alternative splcing 3'-end multi ployA sites plus that alternative
ORF length are so longer than superscript reverse transcriptase can cover
likes 20kb then only
one choice is use that oligo dt and Multiscibe reverse transcriptase
then PCR different fragment by diffeeernt forward and reverse primer pairs
set then sub-cloning then sequencing then assembly different fragment to
one super long ORF.
Multiscribe |
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K**R
发帖数: 193 | 13 主要第一是看看你测试什么的binding， 比如转录因子TFs 还是histone的。
设计primer 比较麻烦，
首先看promoter位置，看有人报道过没有。 如果没有就预测，
主要是具体选择哪个区域，有时候不一定严格选promoter， promoter附近也可以。
根据你要pull down 蛋白来定
看看Dr young 的设计方法，希望你能用的上。
http://younglab.wi.mit.edu/regulatory_code/ |
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t******k
发帖数: 599 | 14 是histone，就是因为觉得设计这个的primer很麻烦，看有些文章对一个基因都要试n对
引物，所以就想走捷径用别人发表的。 |
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m***o
发帖数: 272 | 15 IDTdna,45刀一个sybrgreen的primer.每次order后我都测efficiency.还可以,90%多的
可行率. |
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l*z
发帖数: 31 | 16 谢谢Magno的回复。45刀的primer是他们validated过的吗？ |
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V******t
发帖数: 444 | 18 这能准确吗
我用了文献的引物 和 primer bank的引物，测试都是1.6-1.8。
看表达变化，加上efficiency，跟不加，计算出来的是有些差别的呐。 |
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V******t
发帖数: 444 | 19 这能准确吗
我用了文献的引物 和 primer bank的引物，测试都是1.6-1.8。
看表达变化，加上efficiency，跟不加，计算出来的是有些差别的呐。 |
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g***j
发帖数: 40861 | 20 怎么排除这对primer在nontarget上没有响应序列
primerplast能弄吗？ |
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s******r
发帖数: 1245 | 21 可以直接用，就是产物要纯最好切胶，否则容易noisy，一般推荐换一条primer随便换
序列不一样能测到目标区域就行了 |
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t*******w
发帖数: 107 | 22 也就是说，这种情况下，sanger primer和PCR product, anneal后，template的5‘ 完
全没有任何extra bases,
这种情况下不会影响sanger reading对吧？
这样，就方便了 |
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G***G
发帖数: 16778 | 23 how to design a primer which can distinguish one species from other species?
what kind of technology is it? |
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a*********m
发帖数: 26 | 24 Interviewing Primer
Do NOT bring chewing gum, cell phone, Ipod, coffee or soda on an interview.
Clothing says a great deal about you.
Appropriate attire supports your image as a person who takes the interview
process
seriously.
Your attire should be appropriate and fit well but it should not take center
stage. If
you’re primarily remembered for your interview attire, this is probably
because you made
an error in judgment.
Interview Attire Guidelines for Men and Women
A two-piece matched suit is ... 阅读全帖 |
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y**i
发帖数: 13 | 25 Who would like to help me find this book?
A Primer for the Mathematics of Financial Engineering
thanks a million |
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m******d
发帖数: 3243 | 26 【 以下文字转载自 Automobile 讨论区 】
发信人: madcowdd (大头), 信区: Automobile
标 题: Primer and clear coat
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 26 12:49:00 2012, 美东)
在哪里买，
怎样选择
谢谢 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 27 Take this coupon Link:
to the Sephora counter at any JCPenney store to get a free LORAC Mini Lip
Gloss or Eye Primer. This coupon expires Sept. 22, 2010.
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w*******y
发帖数: 60932 | 28 Link:
http://www.sephora.com/promo/betrio/
Print this Sephora offer for a free mini Bare Escentuals foundation, primer,
and brush and take it to a Sephora store (no purchase necessary). You get
to choose from seven shades and two finishes (matte or original). This offer
is while supplies last.
This offer is not valid at the Sephora counter inside JCPenney, only at
Sephora stores.
You can also add this sample to your online order using MATTETRIO or
BARETRIO coupon codes.
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w*******y
发帖数: 60932 | 29 Orignal price $30 Sephora just lowered their price on Urban Decay Show Pony
box. This seems to be the going price now, but it's such a good deal I had
to post it. It has amazing reviews Comes with 6 shadows (2 are in Naked),
mini primer, and zero eyeliner.
Link:
http://sephora.com/browse/product.jhtml;jsessionid=XG2VYSMIZZRP
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w*******y
发帖数: 60932 | 30 Receive a deluxe sample of Laura Mercier Foundation Primer* with any Laura
Mercier purchase. Use code MERCIER29 at checkout.
http://www.saksfifthavenue. com/main/ProductDetail.jsp?FO LDER%3C%3Efolder_id= 2534374306570416&PRO DUCT%3C%3Eprd_id=845 524446442350&R=73615 0068521&P_name=Laura +Mercier&N=306570416 &bmUID=jhniK5n
$3 sharpener here:
Link:
http://www.saksfifthavenue.com/main/ProductDetail.jsp?FOLDER< Mercier&N=306428388 4294912426&bmUID=jhnlVIT
Free Shipping (no minimum) with co... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 32 Urban Decay Cosmetics is having its Friends & Family sale, 20% off
everything except Naked2 palette. Promo code is FFSPRING12.
The promo code works on sale/clearance items, now get 20% off the clearance
price of vintage eye shadow primer potion, Rollergirl makeup palette, cream
eyeliner, and more!
Here's a link to the sale/clearance section:
Link:
http://www.urbandecay.com/sale/sale,default,sc.html
Apply promo code FFSPRING12 at checkout. Valid 3/6/12 - 3/10/12. Limit 5
pieces of the same item... 阅读全帖 |
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j****m
发帖数: 3137 | 33 ic, thanks.
i already ordered primer and level 1 lesson and theory books, will get the
technique and performance books if the teacher thinks it is needed. |
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t********r
发帖数: 4908 | 34 ☆─────────────────────────────────────☆
joymom (平安是福) 于 (Wed Jun 16 20:19:13 2010, 美东) 提到:
The teacher asked me to buy it.
Checked online, found it is not just 1 book ya. Should i buy lesson book
only or the 4 books set (lesson, theory, technique and performance)? Are the
other 3 books very useful?
Bow.
☆─────────────────────────────────────☆
bhf (bhf) 于 (Wed Jun 16 20:23:40 2010, 美东) 提到:
what did ur teacher ask for? Lesson book I assume is must. If I want to take
one off the list, it ... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 36 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 37 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 38 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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n****o
发帖数: 14771 | 39 ☆─────────────────────────────────────☆
babyworm (雨然) 于 (Thu Jun 7 14:15:45 2012, 美东) 提到:
其实俺雨然，又称babyworm,从来木有想过8神马东京女孩臭美的那点事儿。因为8也8不
完。可是，来了美国以后每当去华人超市，看到日妆柜台上摆着那些俺以前从来都不会
正眼瞥一眼的
东东都能卖出天价，俺觉得还是跟jms们说一下真正日本女生玩的东东是个神马玩意。
臭美，一般先从化妆说起。化妆本应该从护肤说起。可是之前在某mm回帖中已经说过几
个俺心仪的几种护肤品，有答应过她改天8彩妆。所以就先从彩妆中眼妆部分的眼影开
始8吧。还有，所有帖子都代表俺一家之言。也欢迎jms们交流心得，并顺带向俺推荐美
国好用的东东。
翻了半天，发现东东实在太多，都掏出来实在壮观。。。就先拿出来几样照一张眼妆的
非全家福。
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xmxm (xmxm) 于 (Thu Jun 7 14:24:28 2012, 美东) 提到:
zhan z... 阅读全帖 |
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a******a
发帖数: 283 | 40 有个问题需要大牛的智慧。
两个病毒载体，一个是商业卖的做浓度标准曲线（用A序列的primers来测定）；一个是
自己构建的。主要骨架一样，只是我们自己做的除了有A序列之外，还有自己的靶基因B
序列。因此自己构建的载体，除了可以用A序列的primers之外，还可以用B序列的
primers来测浓度。
唯一的问题就是，B序列的测定因为GC成分高，所以primers反应浓度要高于A序列
primers的浓度。
作出来的标准曲线（同一个96孔板），用B序列的primers做的，Ct values要比用A序列
的primers迟上5-6个Ct。作出来的曲线，efficiency （都在90%-100%之间）和R
square（都在0.99以上）都类似。
但是作出来的EQUATION在Y-axis上的截距就不一样，差了有6的样子。这样用B作出来
的equation计算出来的样品浓度就比用A作出来的equation计算出来的样品浓度要高10
倍。
有什么看法吗？
这个B序列的primers反应浓度已经高得太离奇了，2um final concentration，低了就
更加出不了什么好的标准曲线了。... 阅读全帖 |
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g******r
发帖数: 139 | 41 谢谢你的建议。我知道qPCR的efficiency, 但确实没有测过各个primer的efficiency到
底怎么样。但理论上effiency对Absolute Quantification影响很大，而对ddCT方法的
影响有限。而我就只用ddCT方法比较各个gene在不同条件下的表达，没有去比较基因间
的表达。至于ddCt的方法有人要argue有缺陷，不理想，那是另外的话题 (体外话，我
发现没有测primer效率的人不在少数，当然绝大部分人也是用ddCt)。
以一个简单的knockdown为例，设目标gene表达量为X0，在Ct时的PCR产物为Xt0，效率
为EX, reference gene的表达量为R0，在Ct时的PCR产物为Rt0，效率为ER；在
knockdown情况下目标gene表达量为X1，在Ct时的PCR产物为Xt1, reference gene的表
达量不变，仍然是R0，在Ct时的PCR产物为Rt1 (两次的Ct可能一样，也可能不一样)。
Xt0=X0 (1+EX)CtX0, Rt0= R0 (1+ER)CtR0 ;Xt1=X1 (1+EX)CtX1, Rt1... 阅读全帖 |
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j*****h
发帖数: 3292 | 42 看来得多刷几遍
http://en.wikipedia.org/wiki/Primer_%28paint%29
Using a primer on wood before painting is mandatory for several reasons.
First of all, wood is very porous and will absorb the solvent from paint,
drying the paint prematurely. Because most paints undergo chemical reactions
during the process of curing (for example, latex and alkyd-based paints
actually polymerize when curing), they depend on water or solvent being
evaporated slowly rather than being absorbed quickly by the underlying
mater... 阅读全帖 |
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K*******6
发帖数: 74 | 43 重开一楼，大家过来顶！这帖子是从 奔甜点
http://www.mitbbs.com/article_t/Tennis/31463141.html
移过来，借chinesegogo的光。
Wilson Pro Staff mid size(6.0)的前身今世
Wilson first manufactured the Wilson pro staff 125, It is a 125 head size
racket with braided graphite. Then Wilson decided to reduce the head size
and put both successful Wilson Ultra and Sting into together. I believe the
Wilson Sting doesn't have PWS on it. KennyD, please verify that. The
Wilson Pro Staff Midsize is manufactured in 1982 until 2003/4, Then Wilson... 阅读全帖 |
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c*********d
发帖数: 9770 | 44 荒猫牛不耕微信号laoniu003005
功能介绍
好文分享
来源：荒猫之舞
作者：荒猫
中美贸易战告一段落，毫不意外地，咱们又赢了。不过与以往不同的是，这次美国也赢
了，是双赢。据报道，咱们答应了美国减少贸易逆差的要求，所以美国赢了；而因为要
减少贸易逆差，中方将大量增加自美购买商品和服务，这样可以满足咱们不断增长的消
费需求和促进高质量经济发展，所以咱们也赢了。
但让我感觉不可思议的是，这么好的事情，为什么一直不做呢？为什么要在美国政府的
逼迫下去做呢？是因为没有想到？那岂不是说那些人能力低下？是因为想到了而不做，
那岂不是证明了那些人很坏？
而且在美国高调启动贸易战之初，咱们是抱着多大的决心，宁为玉碎不为瓦全，一定要
打赢的，一定要粉碎美国人阻挡咱们大国崛起的阴谋的。当美国提出500亿的清单时，
咱们针锋相对；当美国提出1000亿的清单时，咱们继续应战；而当美国把清单的总价提
高到2000亿的时候，一夜之间，美国就不是阻挡咱们大国崛起，而是有利于咱们大国崛
起了。美国的要求原来是有利于咱们的发展，而不是遏制咱们的发展了。我恍然大悟：
原来以前的针锋相对，是用的激将法，是为了刺激美... 阅读全帖 |
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P*****r
发帖数: 1308 | 45 金属原来就刷了漆，有些爆皮生锈，需要除/防锈repaint。去了一趟HD和Sherwin，得
到如下信息，希望请教一下大家
1。 HD的人说油漆分water based latex和oil based，latex的肥皂水就能洗刷子，oil
based
要thinner。而且油基的paint要配合油基的primer，latex也如此。latex based是新科
技，做外漆没有问题。
2. sherwin的人则说，我这个情况，因为不知道原来的漆是什么基的，所以建议sand
off rust，然后用油基的primer touch up 锈处，然后用latex based的漆刷整体。他
的意思是，latex的漆上到oil based的漆上面是可以的，但是反之不行会容易剥落开
裂；所以不管以前是哪种漆，上ltex based的漆都安全。另外一点：补锈的地方不能用
水基primer必须得油基。primer必须上在裸金属表面，所以除非我愿意把原来的漆全部
都打掉，否则primer就不要涂
在老漆上面。
3.我search了一下，有蛮多说刷带锈金属的，都是说用oil based primer和pai... 阅读全帖 |
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K*******6
发帖数: 74 | 46 让我来给你们扫扫盲吧。以后称我器材QUEEN吧
芝加哥版: red primer，White butt cap，butt cap code G_I，no head guard for
the grommet. the Grommet stock number from Wilson is T4824PK, Tension range
is 65-70lb. manufactured from 1982-1984
st. vincent version: 有3个 sub-version
1. red primer，White butt cap，butt cap code XXQ, no head guard for the
grommet. the Grommet stock number from Wilson is T4824PK, Tension range is
65-70lb. manufactured from 1984-1986
2. red primer，White butt cap，butt cap code XXQ(I have only seen the first... 阅读全帖 |
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c********b
发帖数: 363 | 47 I used Invitrogen GeneRACer kit，which suggested nested-pcr.
Invitrogen's oligo adapter is about 60 nt，first PCR used adapter 5‘-end ~
30 nt primer and gene specific（GS) primer. Then they use close to adapter 3
'-end nested primer and another nested GS primer.
After the nested PCR, I sometimes still see multiple bands. I have to gel-
purify the PCR products with correct size and sometimes to repeat 2nd PCR to
amplify it before cloning.
One suggestion is to purify mRNA for RACE, which gives you mu... 阅读全帖 |
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N2
发帖数: 81 | 48 primers:
Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
cycles:
using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
68C.
For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
increase the annealing temperature and break any p... 阅读全帖 |
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g********b
发帖数: 8461 | 49
先去买漆。这里面最烦人的是颜色漆。首先抄下来你车的漆号，然后上网看看
duplicolor等这类公司有没有你对应颜色，如果有的话就爽了，直接找
advanceautoparts给你order一罐（一定要aerosol can的，不要touch up的pen那种）
，也就10多刀。如果没有没关系，拿着漆号找个local的automobile paint supply
shop让他们给你调一罐aerosol can的，一般也就20-30刀吧。一般这一个can够你
touchup n多次的，大面积喷的话估计3-5罐够一个bumper不过一般不要自己喷大面积。
然后就是购买些必要的东西，砂纸要60、150、300、600、1000和2000号的各若干张20
刀够了，primer一罐大概10几刀（有好几种，用primer sealer和filler居多），另外
一罐clear coat 10刀附近。如果有需要的话你可能需要买点filler，大概10刀以内吧
。这些东西walmart都有，也可以在autozone、advanceautoparts买。另外推荐你买点
美纹纸，喷漆的时候可以把不想喷... 阅读全帖 |
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P*****r
发帖数: 1308 | 50 去了一趟HD和Sherwin，得到如下信息，希望请教一下大家
1。 HD的人说油漆分latex based和oil based，latex的肥皂水就能洗刷子，oil based
要thinner。而且油基的paint要配合油基的primer，latex也如此。latex based是新科
技，做外漆没有问题。
2. sherwin的人则说，我这个情况，因为不知道原来的漆是什么基的，所以建议sand
off rust，然后用油基的primer touch up 锈处，然后用latex based的漆刷整体。他
的意思是，latex的漆上到oil based的漆上面是可以的，但是反之不行；所以不管以前
是哪种漆，上ltex based的漆都安全。而且补锈的地方不能用水基primer必须得油基。
primer必须上在裸金属表面，所以除非我把原来的漆全部都打掉，否则primer就不要摸
在老漆上面。
请问一下sherwin那个人说法靠谱吗？primer只用上到去了锈的地方？ |
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