l********s 发帖数: 70 | 1 最近做RNA从plate中提取,发现RNA测试有机溶剂那个参数很低,0.3-0.6 。 其实最后
我尽量把乙醇抽吸干净。我怀疑是不是DEPC水有问题,因为我统一吧RNA dilute 到
100ng/ul 做反转,发现dilute后,那个比值更低了。。。
当然Nanodrop 的control 用的是DEPC,这个不会搞错。。
不知道为啥,怎么提高这个比值? 另外这个如果低多大程度影响反转? |
z*t 发帖数: 863 | 2 RNA怎么沉淀?异丙醇沉淀可能会造成盐浓度过高,可以换2倍体积乙醇
230高是混了酚类和盐。理论上70%乙醇洗可以降低盐类污染
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 最近做RNA从plate中提取,发现RNA测试有机溶剂那个参数很低,0.3-0.6 。 其实最后 : 我尽量把乙醇抽吸干净。我怀疑是不是DEPC水有问题,因为我统一吧RNA dilute 到 : 100ng/ul 做反转,发现dilute后,那个比值更低了。。。 : 当然Nanodrop 的control 用的是DEPC,这个不会搞错。。 : 不知道为啥,怎么提高这个比值? 另外这个如果低多大程度影响反转?
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g********0 发帖数: 6201 | 3 我当初测260/280时无论怎么努力改善提取,更换溶解RNA的buffer,值就是偏
低。后来我想了一个终级方法解决了这个问题,就是------不测了,直接用26
0算浓度就行了,反正我用这种RNA从来没出过问题。 |
f*******e 发帖数: 628 | 4 用过 DEPC 水,没问题的,除非没有处理好。
还是提纯时候有机溶剂没除干净吧? |
l********s 发帖数: 70 | 5 可能找到原因了,确实是DEPC水出的问题。 谢谢楼上兄弟。我索性用水稀释算了,反
正马上反转 |
s******s 发帖数: 13035 | 6 去买点nuclease free的water吧,回来分装一大堆,反正一直会有用
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 可能找到原因了,确实是DEPC水出的问题。 谢谢楼上兄弟。我索性用水稀释算了,反 : 正马上反转
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