哪位做过in vitro degradation assay? - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 哪位做过in vitro degradation assay?

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r*****t 发帖数: 4793	1 请问哪个protocol 好些？我试着做了几次，看不到目的蛋白的降解。
r*****t 发帖数: 4793	2 我试了用400 ul extraction buffer 处理差不多150ug cell pellet, 然后用90ul做好的cell extract 和10ul in vitro transcription/translation的蛋白混合，37度反应，到4小时都没大变化我现在不知道哪个因素是比较重要的？我这个条件是cell extract 不够么？ cell extract 里面要加些SDS NP40什么的吗？（有的protocol不加）。还有的说in vitro transcription/translation的蛋白要新鲜，这个很重要么？
t**********8 发帖数: 223	3 应该加点ATP和ubiquitin吧, 具体配方很多文献都有【在 r*****t 的大作中提到】 : 我试了用400 ul extraction buffer 处理差不多150ug cell pellet, 然后用90ul做 : 好的cell extract 和10ul in vitro transcription/translation的蛋白混合，37度 : 反应，到4小时都没大变化 : 我现在不知道哪个因素是比较重要的？我这个条件是cell extract 不够么？ cell : extract 里面要加些SDS NP40什么的吗？（有的protocol不加）。还有的说in vitro : transcription/translation的蛋白要新鲜，这个很重要么？

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