s******a
发帖数: 472 | 1 现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
我以前一直在UV下速战速决切胶
现在在的新实验室好麻烦
在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？ |
j****x
发帖数: 1704 | 2 这个真没啥意义吧，一般的建议都是尽量缩短UV下暴露的时间，把UV的功率调小然后速
战速决即可，这个影响几乎可以忽略，至少不会显著影响克隆结果。
【在 s******a 的大作中提到】
: 现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
: 大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
: 我以前一直在UV下速战速决切胶
: 现在在的新实验室好麻烦
: 在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
: mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
: 这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？
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s******a
发帖数: 472 | 3 这么短的时间DNA真的就能突变吗？
【在 j****x 的大作中提到】
: 这个真没啥意义吧，一般的建议都是尽量缩短UV下暴露的时间，把UV的功率调小然后速
: 战速决即可，这个影响几乎可以忽略，至少不会显著影响克隆结果。
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b******y
发帖数: 627 | 4
【在 s******a 的大作中提到】
: 现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
: 大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
: 我以前一直在UV下速战速决切胶
: 现在在的新实验室好麻烦
: 在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
: mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
: 这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？
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b******y
发帖数: 627 | 5 Sequencing is needed regardless. No need to worry for a majority of cases. |
b******y
发帖数: 627 | 6
【在 s******a 的大作中提到】
: 现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
: 大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
: 我以前一直在UV下速战速决切胶
: 现在在的新实验室好麻烦
: 在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
: mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
: 这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？
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j****x
发帖数: 1704 | 7 理论上当然是可能的，只是程度上的差别。片段越长暴露时间越久突变的几率和程度自
然就越高。只不过大部分情况下突变的DNA链只占总数的很小一部分比例，绝大多数重
组子仍然是未突变的。只要不是特别点背正好中奖。
如果插入片段很长对突变又非常敏感，又不想重组之后再完整测序确认，那么你们实验
室的做法也是可取的，或者用UV free purification.
【在 s******a 的大作中提到】
: 这么短的时间DNA真的就能突变吗？
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