k********n
发帖数: 136 | 1 有个系的老鼠要做ｑＰＣＲ鉴定转基因是杂合子还是纯合子．
方法１ 尽量把尾巴剪得一样长，用蛋白酶Ｋ消化后，用乙酸氨沉淀蛋白，再用异丙醇
或乙醇沉淀，都是浑浊的雾状，消化好的，可以看到螺旋絮状ＤＮＡ，但ｑＰＣＲ结果
不好．
方法２ ＮａＯＨ消化后，Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ中和，离心直接ｑＰＣＲ．
两个方法好像结果的变异都比较大，有时候很难区分１ｃｏｐｙ和２ｃｏｐｙ．
大侠们觉得我哪里做的有问题呢？ 先谢谢了 |
h****6
发帖数: 229 | 2 How many samples do you have? Can yo use a kit just to verify that your
method works on true pure DNA? Without internal control, i think 1 Ct
difference is hard to be consistently detected. |
k********n
发帖数: 136 | 3 是用ｔａｑｍａｎ的ｐｒｏｂｅ做引物的，用持家基因的ｐｒｏｂｅ做内参．
给我们老鼠的组也说没法完全分开，他们的方法是，不清楚的用ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂ
ｌｏｔ鉴定．．．．．
【在 h****6 的大作中提到】
: How many samples do you have? Can yo use a kit just to verify that your
: method works on true pure DNA? Without internal control, i think 1 Ct
: difference is hard to be consistently detected.
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k********n
发帖数: 136 | 4 我没用ｓｏｕｔｈｅｒｎ，刚开始老鼠少，还可以采样后做ｉｎ ｓｉｔｕ鉴定，现在
baby boom, 这么搞要累死人的
【在 h****6 的大作中提到】
: How many samples do you have? Can yo use a kit just to verify that your
: method works on true pure DNA? Without internal control, i think 1 Ct
: difference is hard to be consistently detected.
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a*****g
发帖数: 543 | 5 既然这么重要，弄个kit 提genomic DNA吧。
然后最好用plasmid做个standard curve
【在 k********n 的大作中提到】
: 有个系的老鼠要做ｑＰＣＲ鉴定转基因是杂合子还是纯合子．
: 方法１ 尽量把尾巴剪得一样长，用蛋白酶Ｋ消化后，用乙酸氨沉淀蛋白，再用异丙醇
: 或乙醇沉淀，都是浑浊的雾状，消化好的，可以看到螺旋絮状ＤＮＡ，但ｑＰＣＲ结果
: 不好．
: 方法２ ＮａＯＨ消化后，Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ中和，离心直接ｑＰＣＲ．
: 两个方法好像结果的变异都比较大，有时候很难区分１ｃｏｐｙ和２ｃｏｐｙ．
: 大侠们觉得我哪里做的有问题呢？ 先谢谢了
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