M*****2
发帖数: 379 | 1 这个问题困扰了些日子
有没有可能测序结果是对的，结果WB测不出来（肯定不是抗体问题）？
有没有可能用TAG的抗体测出来 （比如GFP）， 但是用蛋白本身的抗体测不出来？
这种情况是不是就只能重做了？
谢谢 |
b******n
发帖数: 4225 | 2 你的针对目的蛋白的抗体是自己做的吧，可能效价不够
能检测到重组蛋白是因为重组蛋白的量比内源性蛋白高几个数量级
这里面可能的原因
一是蛋白本身免疫原性不强
二是抗体制备中的问题，比如你制备重组蛋白（抗原）加了detergent，这会干扰打兔
子的抗体的效价。
针对Tag的抗体是优化的，效价一般有保证
【在 M*****2 的大作中提到】
: 这个问题困扰了些日子
: 有没有可能测序结果是对的，结果WB测不出来（肯定不是抗体问题）？
: 有没有可能用TAG的抗体测出来 （比如GFP）， 但是用蛋白本身的抗体测不出来？
: 这种情况是不是就只能重做了？
: 谢谢
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M*****2
发帖数: 379 | 3 抗体均是公司买来的
不是自己制备的
大家没有遇到过这种问题么？？ |
v***a
发帖数: 1242 | 4 会不会是因为抗体target的sequence和你要检测的不一致？或者就是蛋白的活性啊、
conformation在你的recombinant protein和抗体之间不一致
【在 M*****2 的大作中提到】
: 这个问题困扰了些日子
: 有没有可能测序结果是对的，结果WB测不出来（肯定不是抗体问题）？
: 有没有可能用TAG的抗体测出来 （比如GFP）， 但是用蛋白本身的抗体测不出来？
: 这种情况是不是就只能重做了？
: 谢谢
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