i*********0
发帖数: 915 | 1 最近做一个实验，用E14.5和E13.5时期isolated 的MEF （primary）来做实验，我发现
用4-OHT做gene inducible deletion5天，然后wash out 4-OHT以后，E14.5的mutant
细胞相对E14.5的control cell line proliferation降低，但是E13,5 的mutant cell
相对control cell line的proliferation居然升高了 （我每个时期的细胞系都有2个
control 2个mutant），一头雾水呀。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 这种细胞实验很难说清楚的，
因为你分离fibroblast的操作就不是一个很consistent 的过程，
而且大部分proliferation assay 的S/N也很低。
最最重要的一点是：你是否都是在scarce culture 里面作的proliferation assay？
如果你的细胞系是在dense culture 里做的话，会引入sensitivity to contact
inhibition 这个因素，会导致非常大的误差。
如果你不同细胞之间的culture density 不一样的话那就更完蛋了，根本就没有
办法直接比较。
cell
【在 i*********0 的大作中提到】
: 最近做一个实验，用E14.5和E13.5时期isolated 的MEF （primary）来做实验，我发现
: 用4-OHT做gene inducible deletion5天，然后wash out 4-OHT以后，E14.5的mutant
: 细胞相对E14.5的control cell line proliferation降低，但是E13,5 的mutant cell
: 相对control cell line的proliferation居然升高了 （我每个时期的细胞系都有2个
: control 2个mutant），一头雾水呀。
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i*********0
发帖数: 915 | 3 谢谢回复呀。
我一般都是seed 1x10^5 cells/6 well. 细胞生长的也不是很dense，而且我重复了一
次，结果是一样的。搞得结果很难解释。我现在就是想是不是这个OHT对我的细胞有影
响，还是我研究的这个gene 对 OHT treatment 有response。
其实这个gene我们propose和stem cell 的分裂和分化有关，一个naive的想法就是E13.
5的primary细胞是不是保留了更多的stem cell identity？
【在 s******y 的大作中提到】
: 这种细胞实验很难说清楚的，
: 因为你分离fibroblast的操作就不是一个很consistent 的过程，
: 而且大部分proliferation assay 的S/N也很低。
: 最最重要的一点是：你是否都是在scarce culture 里面作的proliferation assay？
: 如果你的细胞系是在dense culture 里做的话，会引入sensitivity to contact
: inhibition 这个因素，会导致非常大的误差。
: 如果你不同细胞之间的culture density 不一样的话那就更完蛋了，根本就没有
: 办法直接比较。
:
: cell
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s******y
发帖数: 28562 | 4 有可能
老鼠胚胎每过一天都会大变样，所以分离出来的细胞有差别是可能的
E13.
【在 i*********0 的大作中提到】
: 谢谢回复呀。
: 我一般都是seed 1x10^5 cells/6 well. 细胞生长的也不是很dense，而且我重复了一
: 次，结果是一样的。搞得结果很难解释。我现在就是想是不是这个OHT对我的细胞有影
: 响，还是我研究的这个gene 对 OHT treatment 有response。
: 其实这个gene我们propose和stem cell 的分裂和分化有关，一个naive的想法就是E13.
: 5的primary细胞是不是保留了更多的stem cell identity？
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