s******l
发帖数: 7 | 1 最近做一个丝氨酸蛋白酶的降解底物的活性实验，发现在低浓度的时候有活性，能够在
30分钟内将底物降解完全，而在高浓度（是低浓度的50倍）时活性受到抑制，底物完全
不被降解。想请教各位，这种现象该如何解释。谢谢！ |
a******c
发帖数: 597 | |
e****s
发帖数: 1125 | 3 高浓度形成inactive 的oligomers?
可以跑个Gel filtration看看，如果有Oligomers形成，分别收集Oligomers和Monomer
，测活。
【在 s******l 的大作中提到】
: 最近做一个丝氨酸蛋白酶的降解底物的活性实验，发现在低浓度的时候有活性，能够在
: 30分钟内将底物降解完全，而在高浓度（是低浓度的50倍）时活性受到抑制，底物完全
: 不被降解。想请教各位，这种现象该如何解释。谢谢！
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O*C
发帖数: 649 | 4 aggregate了
【在 s******l 的大作中提到】
: 最近做一个丝氨酸蛋白酶的降解底物的活性实验，发现在低浓度的时候有活性，能够在
: 30分钟内将底物降解完全，而在高浓度（是低浓度的50倍）时活性受到抑制，底物完全
: 不被降解。想请教各位，这种现象该如何解释。谢谢！
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s******l
发帖数: 7 | 5 谢谢各位的意见！
酶还是很纯的。
Aggregate 和 inactive oligomers 都有可能，我再做实验检测一下。
【在 s******l 的大作中提到】
: 最近做一个丝氨酸蛋白酶的降解底物的活性实验，发现在低浓度的时候有活性，能够在
: 30分钟内将底物降解完全，而在高浓度（是低浓度的50倍）时活性受到抑制，底物完全
: 不被降解。想请教各位，这种现象该如何解释。谢谢！
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i***0
发帖数: 160 | 6 If you dilute the high concentration protease to low concentration its
activity increase, then the decreased activity at high concentration is
reversible, which is good. It might due to the storage buffer you use for
concentration not friendly for the activity of the enzyme, or reversible
oligomerization that enclose the active site.
If you dilute the high concentration protease and can not restore the
activity you have seen while it is at low concentration, it is possible,
that it is aggregated or denatured. You can run a native blue PAGE or gel-
filtration FPLC to compare your active low concentration enzyme with the
inactive high concentration enzyme to see if there is aggregation. |
