v***a
发帖数: 1242 | 1 不是confocal，就是普通的荧光显微镜，看四种荧光（其中包括DAPI），大家有推荐的
荧光染料吗？谢谢！ | C*****h
发帖数: 926 | 2 Alexa Fluor 488, 568, and 647
【在 v***a 的大作中提到】
: 不是confocal，就是普通的荧光显微镜，看四种荧光（其中包括DAPI），大家有推荐的
: 荧光染料吗？谢谢！
| v***a
发帖数: 1242 | 3 谢谢！
【在 C*****h 的大作中提到】
: Alexa Fluor 488, 568, and 647
| s******y
发帖数: 28562 | 4 关键要看你的滤镜。
DAPI, Alexa 488, Alexa 546, alexa 635 or 680
或者
DAPI, alexa 488, alexa 594, alexa 680
和楼上另外一位同学推荐的染料差不多，但是我不推荐Alexa647, 因为它和Alexa 568
有部分重叠
【在 v***a 的大作中提到】
: 不是confocal，就是普通的荧光显微镜，看四种荧光（其中包括DAPI），大家有推荐的
: 荧光染料吗？谢谢！
| v***a
发帖数: 1242 | 5 谢谢提醒！我的滤镜上显示有FITC，CY3，还有TRITC，代表680无法用吗？
558
【在 s******y 的大作中提到】
: 关键要看你的滤镜。
: DAPI, Alexa 488, Alexa 546, alexa 635 or 680
: 或者
: DAPI, alexa 488, alexa 594, alexa 680
: 和楼上另外一位同学推荐的染料差不多，但是我不推荐Alexa647, 因为它和Alexa 568
: 有部分重叠
| s******y
发帖数: 28562 | 6 不但无法使用680，连 635 都不一定能看见。
你们为什么同时有CY3 和 TRITC？ 这两种颜色相当靠近， 不合适做共染。
我建议你到其他实验室去看看他们有没有合适的滤镜可以用。
另外，除了滤镜，还有考虑你们的相机的敏感范围，很多相机对红外光不敏感，
所以不能用680
【在 v***a 的大作中提到】
: 谢谢提醒！我的滤镜上显示有FITC，CY3，还有TRITC，代表680无法用吗？
:
: 558
| v***a
发帖数: 1242 | 7 非常感谢！！
【在 s******y 的大作中提到】
: 不但无法使用680，连 635 都不一定能看见。
: 你们为什么同时有CY3 和 TRITC？ 这两种颜色相当靠近， 不合适做共染。
: 我建议你到其他实验室去看看他们有没有合适的滤镜可以用。
: 另外，除了滤镜，还有考虑你们的相机的敏感范围，很多相机对红外光不敏感，
: 所以不能用680
| h**********r
发帖数: 671 | 8 借人气问一下，要是我想在e. coli同时表达几种荧光蛋白（三种或四种），怎么选择
呢？
在看mCFP, mYFP, dTomato之类呢，给指点一下吧。
多谢！包子奉上！ | s******y
发帖数: 28562 | 9 E.coli？ 这个比较麻烦，虽然我没有直接经验，但是在我印象中，很多荧光蛋白的
codon被改过用来适应哺乳动物的表达，所以你可能要把你想用的几个蛋白的codon
检查一下（有专门的网站程序做这个事情的）
至于说颜色嘛，CFP, YFP, CheerryFP 应该就足够可以分开了。
但是最好不要用tdTomato, 因为可能会把蛋白变得太大，细菌表达系统对那么大的蛋白
不是
很适应。
【在 h**********r 的大作中提到】
: 借人气问一下，要是我想在e. coli同时表达几种荧光蛋白（三种或四种），怎么选择
: 呢？
: 在看mCFP, mYFP, dTomato之类呢，给指点一下吧。
: 多谢！包子奉上！
| h**********r
发帖数: 671 | 10 Thanks! 做之前先是要看codon的，查查CAI。
就是不确定用啥颜色的。
我手上单独用得最多的就是gfp和dTomato。
多谢啊！
先发一个包子吧！ |
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