v***a 发帖数: 1242 | 1 不是confocal,就是普通的荧光显微镜,看四种荧光(其中包括DAPI),大家有推荐的
荧光染料吗?谢谢! | C*****h 发帖数: 926 | 2 Alexa Fluor 488, 568, and 647
【在 v***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不是confocal,就是普通的荧光显微镜,看四种荧光(其中包括DAPI),大家有推荐的 : 荧光染料吗?谢谢!
| v***a 发帖数: 1242 | 3 谢谢!
【在 C*****h 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Alexa Fluor 488, 568, and 647
| s******y 发帖数: 28562 | 4 关键要看你的滤镜。
DAPI, Alexa 488, Alexa 546, alexa 635 or 680
或者
DAPI, alexa 488, alexa 594, alexa 680
和楼上另外一位同学推荐的染料差不多,但是我不推荐Alexa647, 因为它和Alexa 568
有部分重叠
【在 v***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不是confocal,就是普通的荧光显微镜,看四种荧光(其中包括DAPI),大家有推荐的 : 荧光染料吗?谢谢!
| v***a 发帖数: 1242 | 5 谢谢提醒!我的滤镜上显示有FITC,CY3,还有TRITC,代表680无法用吗?
558
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 关键要看你的滤镜。 : DAPI, Alexa 488, Alexa 546, alexa 635 or 680 : 或者 : DAPI, alexa 488, alexa 594, alexa 680 : 和楼上另外一位同学推荐的染料差不多,但是我不推荐Alexa647, 因为它和Alexa 568 : 有部分重叠
| s******y 发帖数: 28562 | 6 不但无法使用680,连 635 都不一定能看见。
你们为什么同时有CY3 和 TRITC? 这两种颜色相当靠近, 不合适做共染。
我建议你到其他实验室去看看他们有没有合适的滤镜可以用。
另外,除了滤镜,还有考虑你们的相机的敏感范围,很多相机对红外光不敏感,
所以不能用680
【在 v***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 谢谢提醒!我的滤镜上显示有FITC,CY3,还有TRITC,代表680无法用吗? : : 558
| v***a 发帖数: 1242 | 7 非常感谢!!
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不但无法使用680,连 635 都不一定能看见。 : 你们为什么同时有CY3 和 TRITC? 这两种颜色相当靠近, 不合适做共染。 : 我建议你到其他实验室去看看他们有没有合适的滤镜可以用。 : 另外,除了滤镜,还有考虑你们的相机的敏感范围,很多相机对红外光不敏感, : 所以不能用680
| h**********r 发帖数: 671 | 8 借人气问一下,要是我想在e. coli同时表达几种荧光蛋白(三种或四种),怎么选择
呢?
在看mCFP, mYFP, dTomato之类呢,给指点一下吧。
多谢!包子奉上! | s******y 发帖数: 28562 | 9 E.coli? 这个比较麻烦,虽然我没有直接经验,但是在我印象中,很多荧光蛋白的
codon被改过用来适应哺乳动物的表达,所以你可能要把你想用的几个蛋白的codon
检查一下(有专门的网站程序做这个事情的)
至于说颜色嘛,CFP, YFP, CheerryFP 应该就足够可以分开了。
但是最好不要用tdTomato, 因为可能会把蛋白变得太大,细菌表达系统对那么大的蛋白
不是
很适应。
【在 h**********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 借人气问一下,要是我想在e. coli同时表达几种荧光蛋白(三种或四种),怎么选择 : 呢? : 在看mCFP, mYFP, dTomato之类呢,给指点一下吧。 : 多谢!包子奉上!
| h**********r 发帖数: 671 | 10 Thanks! 做之前先是要看codon的,查查CAI。
就是不确定用啥颜色的。
我手上单独用得最多的就是gfp和dTomato。
多谢啊!
先发一个包子吧! |
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