d**********t
发帖数: 20415 | 1 要表达一个200+KD的protein，带selection marker other than puro,公司搜了很多都
是要买整个system的，老板想省钱，只买一个plasmid,用实验室现有的second
generation package system
大牛门有啥好用的推荐么？ |
a*******a
发帖数: 4233 | 2 首先200k的大蛋白直接transient expression都不一定能表达
其次200kd蛋白就是6kbp， 加上select marker估计要7k
我以前在es做过这个大小的，只有千分之几的marker possitive，还不知道这些colony
里哪些表达了蛋白。
es细胞可以挑单克隆让他慢慢长，其他细胞估计很难。。
仅供参考 |
d**********t
发帖数: 20415 | 3 多谢回复~
这个蛋白的表达没有问题，我们用 transient expression和现有的lentivirus都表达
过，只是现有的lentivirus vector没有selection marker,没法筛稳定表达克隆，所以
想找一个带select marker的vector
请问你用的是哪个vector和package system?
colony
【在 a*******a 的大作中提到】
: 首先200k的大蛋白直接transient expression都不一定能表达
: 其次200kd蛋白就是6kbp， 加上select marker估计要7k
: 我以前在es做过这个大小的，只有千分之几的marker possitive，还不知道这些colony
: 里哪些表达了蛋白。
: es细胞可以挑单克隆让他慢慢长，其他细胞估计很难。。
: 仅供参考
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s******s
发帖数: 13035 | 4 周围实验室要一个没有么？
【在 d**********t 的大作中提到】
: 要表达一个200+KD的protein，带selection marker other than puro,公司搜了很多都
: 是要买整个system的，老板想省钱，只买一个plasmid,用实验室现有的second
: generation package system
: 大牛门有啥好用的推荐么？
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a*******a
发帖数: 4233 | 5 我觉得各个公司的载体大同小异。
关于lentivirus载体有一点心得供你参考
以前用过好几种lentivirus，
一种是inder verma实验室的cscg， backbone里面只有必须元件，
还有一个是不知道哪里来的载体，里面加了很多提高包装/表达效率的元件，比如WPRE
之类现在的商业化载体大多是这种结构。
转小蛋白及gfp，第二种载体表达量、转染率都要远远高于cscg
但是转130k的雄激素受体AR的时候， cscg转的细胞的表达量是后者的十倍以上
我觉得转大基因最关键的是要尽量cut 两个ltr之间的长度。
【在 d**********t 的大作中提到】
: 多谢回复~
: 这个蛋白的表达没有问题，我们用 transient expression和现有的lentivirus都表达
: 过，只是现有的lentivirus vector没有selection marker,没法筛稳定表达克隆，所以
: 想找一个带select marker的vector
: 请问你用的是哪个vector和package system?
:
: colony
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d**********t
发帖数: 20415 | 6 多谢指点，我去看看！
WPRE
【在 a*******a 的大作中提到】
: 我觉得各个公司的载体大同小异。
: 关于lentivirus载体有一点心得供你参考
: 以前用过好几种lentivirus，
: 一种是inder verma实验室的cscg， backbone里面只有必须元件，
: 还有一个是不知道哪里来的载体，里面加了很多提高包装/表达效率的元件，比如WPRE
: 之类现在的商业化载体大多是这种结构。
: 转小蛋白及gfp，第二种载体表达量、转染率都要远远高于cscg
: 但是转130k的雄激素受体AR的时候， cscg转的细胞的表达量是后者的十倍以上
: 我觉得转大基因最关键的是要尽量cut 两个ltr之间的长度。
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m*****z
发帖数: 1451 | 7 addgene
【在 d**********t 的大作中提到】
: 要表达一个200+KD的protein，带selection marker other than puro,公司搜了很多都
: 是要买整个system的，老板想省钱，只买一个plasmid,用实验室现有的second
: generation package system
: 大牛门有啥好用的推荐么？
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